HPLC測(cè)定貴州不同產(chǎn)地八月瓜中齊墩果酸的含量

李 香

貴州省黔南民族醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，貴州 都勻 558000

HPLC測(cè)定貴州不同產(chǎn)地八月瓜中齊墩果酸的含量

李 香

貴州省黔南民族醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，貴州 都勻 558000

目的：建立HPLC測(cè)定貴州不同產(chǎn)地八月瓜中齊墩果酸含量的方法。方法：以70%乙醇90℃水浴回流1h，過(guò)濾，濾液揮干，加濃鹽酸，70%乙醇回流4h。流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(87∶13∶0.04∶0.02)；檢測(cè)波長(zhǎng)210nm；流速為1.0ml/min；柱溫為30℃。結(jié)果：齊墩果酸分離效果好，在0.0654～2.616μg(r=0.9999)呈良好線(xiàn)性關(guān)系。結(jié)論：不同產(chǎn)地八月瓜中齊墩果酸含量存在一定差異。

八月瓜；不同產(chǎn)地；齊墩果酸；HPLC

八月瓜為木通科植物木通Akebiatrifoliate(Thunb.)Koidz的果實(shí)，又稱(chēng)木通子、八月扎、八月炸、預(yù)知子、臘瓜等，分布于我國(guó)南部、長(zhǎng)江流域和西北地區(qū)。民間多用于治療小便赤澀、淋濁水腫、胸中煩熱、喉痹咽痛、遍身拘痛、婦女經(jīng)閉、乳汁不通等疾病。八月瓜的主要化學(xué)成分為齊墩果酸類(lèi)三萜、三萜皂甙，具有較強(qiáng)生物活性[1]。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定4個(gè)不同產(chǎn)地八月瓜中齊墩果酸含量，為不同產(chǎn)地八月瓜質(zhì)量研究提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-20AT/SPD-20A UV/vis Detector高效色譜儀(日本島津)；Shim-pack VP-ODS色譜柱(150×4.6mm，5μm)；WS205電子天平(瑞士梅特公司)；DZG-6000電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；HA-4恒溫水浴鍋(常州澳華儀器有限公司)。

1.2 試劑 甲醇為色譜純；水為娃哈哈純凈水；其余試劑均為分析純。

1.3 試藥 齊墩果酸對(duì)照品(批號(hào)：110709-200505，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所)；八月瓜藥材采于貴州云頂、大定、云霧、都勻，由黔南民族醫(yī)專(zhuān)魏學(xué)軍老師鑒定為木通科木通屬落葉木質(zhì)藤本植物Akebiatrifoliate(Thunb.)Koidz的果實(shí)。

2 方法與結(jié)果[2-5]

2.1 色譜條件 Shim-pack VP-ODS色譜柱(150mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相為甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(87∶13∶0.04∶0.02)；檢測(cè)波長(zhǎng)210nm；流速為1.0ml/min；柱溫為30 ℃。

2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)量干燥至恒重的齊墩果酸對(duì)照品16.36mg，加入一定量甲醇定容至25ml，搖勻，配制得濃度為0.654mg/ml齊墩果酸對(duì)照品母液。

2.3 供試液的制備 取干燥到恒重并過(guò)四號(hào)篩的八月瓜粉末0.582g，加入6ml 70%乙醇，90℃水浴回流1h，回流1次，過(guò)濾，濾液揮干，加0.54ml濃鹽酸，加5.44ml 70%乙醇，回流4h，揮干溶劑，用甲醇定容至25ml，備用。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備 分別精密吸取0.2、0.4、0.8、1、2、4、8 ml對(duì)照品母液用甲醇定容至10ml，搖勻，分別配成濃度0.01308、0.02616、0.05232、0.0654、0.1308、0.2616 、0.5232mg/ml的齊墩果酸對(duì)照品溶液。精密量取5μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定結(jié)果，以齊墩果酸對(duì)照品溶液的質(zhì)量濃度X(mg/ml)為橫坐標(biāo)，峰面積值Y為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=2.3430×106X-6.8714×103，r=0.9999，線(xiàn)性范圍為：0.0654 ～2.616 μg。結(jié)果表明齊墩果酸與峰面積值在線(xiàn)性范圍內(nèi)有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.4.2 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn) 據(jù)“2.3”項(xiàng)制備供試液，分別精密量取5μl對(duì)照品溶液、供試液、色譜甲醇溶液注入高效液相色譜儀，結(jié)果表明，陰性樣品在相應(yīng)位置無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.4.3 精密度試驗(yàn) 稱(chēng)取干燥至恒重藥材粉末約0.5 g，依“2.3”項(xiàng)下制備供試液，精密吸取供試液5μl，注入高效液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定齊墩果酸峰面積，計(jì)算RSD=1.83%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

注：A：色譜甲醇液；B:對(duì)照品溶液；C：供試液。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 稱(chēng)取干燥至恒重藥材粉末約0.5g，據(jù)“2.3”項(xiàng)下制備供試液，精密吸取樣品溶液5μl，注入高效液相色譜儀，每間隔1h進(jìn)樣一次，記錄齊墩果酸峰面積，計(jì)算RSD=2.53%。結(jié)果表明樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 重復(fù)性試驗(yàn) 稱(chēng)取干燥至恒重的藥材粉末約0.6g，6份，據(jù)“2.3”項(xiàng)制備供試液，精密吸取樣品溶液5μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定齊墩果酸峰面積，計(jì)算含量RSD=2.18%。結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.4.6 回收率試驗(yàn) 稱(chēng)取干燥至恒重的藥材粉末約0.3g，9份，編號(hào)1～9號(hào),按一定比例量吸取一定量已配好對(duì)照品溶液。1、2、3號(hào)加入原藥材含量80%對(duì)照品；4、5、6加入原藥材含量100%對(duì)照品；7、8、9加入原藥材含量120%對(duì)照品。據(jù)“2.3”項(xiàng)制備供試液，精密吸取供試液5μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定齊墩果酸的峰面積，計(jì)算平均回收率為100.77%，RSD=2.01%，結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明本方法回收率較好，方法可行。

2.5 樣品含量測(cè)定試驗(yàn) 樣品取自4個(gè)不同產(chǎn)地，每個(gè)產(chǎn)地采集不同3個(gè)區(qū)域，各稱(chēng)取干燥至恒重的藥材粉末6.0g，據(jù)“2.3”項(xiàng)制備供試液，精密吸取樣品溶液5μl，注入高效液相色譜儀，計(jì)算各產(chǎn)地齊墩果酸含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)(n=9)

表2 樣品齊墩果酸含量測(cè)定(n=4)

3 討論

3.1 齊墩果酸是一類(lèi)五環(huán)三萜類(lèi)化合物，不溶于水，可溶于乙醇、乙醚、甲醇、氯仿等有機(jī)溶劑，通過(guò)兩步選取提取工藝，從第一步試驗(yàn)結(jié)果得出用70%乙醇提取時(shí)，齊墩果酸含量較高；在第二步試驗(yàn)中對(duì)鹽酸濃度等進(jìn)行考察，通過(guò)方差分析，試驗(yàn)結(jié)果的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明齊墩果酸在植物體內(nèi)主要以皂苷形式存在，經(jīng)酸水解為游離形式。

3.2 本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，云頂與大定兩個(gè)產(chǎn)地的齊墩果酸含量接近；云頂與云霧、都勻的差異較大。

[1]劉桂艷,王曄.木通屬植物木通化學(xué)成分及藥理活性研究概況[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2004,39(5):330-332.

[2]劉衛(wèi)國(guó),楊文鈺,肖啟銀.三葉木通齊墩果酸的超聲提取工藝研究[J].中藥材,2005,28(2):140-141.

[3]金有景.抗癌食藥草奉[M].北京:中國(guó)食品出版杜,1989:191-198.

[4]牡乃正,張風(fēng)英.攀援植物[M].北京:中國(guó)林業(yè)出版杜,1984:68-69.

[5]趙蓉.正交試驗(yàn)法優(yōu)選女貞子中齊墩果酸的提取工藝[J].海峽藥學(xué),2007,19(12):19-20.

Determination of different regions of Guizhou in August melon oleanolic acid content in HPLC

LI Xiang

Qiannan Medical College for Nationalities,Duyun 558000,China

Objective To establish the content of oleanolic acid in different places of Guizhou in August melon in the determination method of HPLC.Methods Using 70% ethanol,90℃ water bath reflux for 1h,the reflux for 1 times,filtering,adding concentrated hydrochloric acid,70% ethanol,refluxing for 4h,the mobile phase:methanol water acetic acid-three triethy lamine(87∶13∶0.04∶0.02);the detection wavelength of 210nm;the flow rate was 1ml/min;column temperature was 30℃.Results Oleanolic acid separation effect is good,in the 0.0654～2.616μg(r=0.9999)showed a good linearrelationship.Conclusion There were significant differences among different areas in the content of oleanolic acid in August melon.

Akebiatrifoliate;different habitats;Oleanolic acid;HPLC

李香，女，講師，主要從事中藥復(fù)方及質(zhì)量控制研究。

R284.1

A

1007-8517(2015)09-0012-02

2015.02.04)