微囊栓制劑降低尼美舒利豚鼠肝毒性的實驗研究

曲宏烜，陳新梅，徐溢明，趙 元，孫笑蕾

(1.山東中醫(yī)藥大學藥學院，山東 濟南 250355;2.山東大學醫(yī)學院，山東 濟南 250000;3.山東中醫(yī)藥大學實驗中心，山東 濟南 250355)

尼美舒利(nimesulide，NIM)是一種新型的非甾體抗炎藥，其解熱鎮(zhèn)痛抗炎作用顯著，臨床應用比較廣泛。但近年來，其肝損傷不良反應多有報道，具體表現(xiàn)為肝功能異常，天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate transaminase，AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase，ALT)含量增高等。為保障用藥安全，故限制了其使用［1，2］。為降低尼美舒利的肝毒性，本課題組將其制成微囊栓。微囊栓具有栓劑和微囊的雙重優(yōu)勢［3］，與普通栓相比，具有緩釋、降低毒副作用的特點，且具有血藥濃度穩(wěn)定，維持時間長等優(yōu)點［4］。本實驗考察了尼美舒利微囊栓對豚鼠肝臟的影響，以期提高NIM臨床用藥的安全性。

1 材料

1.1 儀器 UV－3010紫外分光光度計(日本島津);FA1004N電子天平(上海精密科學儀器有限公司);XSP－2C光學顯微鏡(上海長方光學儀器有限公司);予華SHZ－D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司)。

1.2 試藥 ALT試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號:C009－1141103);AST試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號:C010－1141103);尼美舒利原料藥(武漢大華偉業(yè)醫(yī)藥有限公司，批號:XH201301248002，純度 99%)。

1.3 動物 SPF級豚鼠，355 g左右，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司提供，許可證號:SCXK(魯)2013－0001。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥物制備 NIM普通栓、NIM微囊栓均由本實驗室制成。每0.5 g栓劑約含 NIM原料藥3.3 mg。

2.2 動物分組 試驗動物隨機分成NIM普通栓組、NIM微囊栓組。飼養(yǎng)于20℃，相對濕度為60%的環(huán)境下適應一周，自由進食和飲水。試驗前，禁食1 d，可自由飲水。1天后開始試驗。

2.3 試驗數(shù)據(jù)的測定 豚鼠每天直腸給藥2次，早晚各1次，每次0.5 g。期間，自由進食和飲水，每天記錄豚鼠的食量和水量。每隔2 d測定豚鼠的體重。給藥15天后，采用空氣栓塞法處死豚鼠。解剖后取肝臟稱重，計算肝指數(shù)(肝指數(shù)=肝臟重量/豚鼠體重);每組取相同質(zhì)量相同部位的肝組織，制備肝組織勻漿，來測定肝組織勻漿液中AST、ALT的含量，剩余肝臟留作病理切片［5，6］。試驗數(shù)據(jù)用統(tǒng)計學軟件SPSS 19.0進行分析，P＜0.05為具有統(tǒng)計學差異，結(jié)果見表1、2。

表1 豚鼠每日平均食量、水量及試驗前后體重差值

表2 豚鼠肝指數(shù)以及肝組織勻漿液中ALT、AST含量

由表1可知:兩組豚鼠攝食量沒有顯著差異，即是否用藥對豚鼠的飲食沒有影響。雖然NIM普通栓組的每天飲水量明顯偏大，但根據(jù)統(tǒng)計學分析，發(fā)現(xiàn)兩組豚鼠的飲水量沒有顯著性差異。對于體重，NIM普通栓組為負值，NIM微囊栓組為正值，即NIM普通栓組與NIM微囊栓組有顯著差異。

由表2可以看出，兩組豚鼠的肝指數(shù)沒有顯著差異。而對肝組織勻漿液中ALT、AST含量，兩組數(shù)據(jù)具有顯著性差異。NIM微囊栓組明顯低于NIM普通栓組，即NIM微囊栓與NIM普通栓相比，能減弱肝臟中ALT、AST含量。

2.4 肝臟病理切片 將豚鼠肝臟病理切片，并HE染色，顯微鏡下觀測病理結(jié)構，結(jié)果見圖1。NIM普通栓組肝索、肝竇結(jié)構清晰，且基本完整，肝細胞基本正常，個別細胞發(fā)生氣球樣變。NIM微囊栓組肝索、肝竇結(jié)構清晰，且大都完整，肝細胞大多正常。NIM普通栓組與NIM微囊栓組有顯著差異。

圖1 各組豚鼠肝臟病理切片圖(HE，×100)

3 討論

本試驗的試驗動物選擇為豚鼠，是綜合豚鼠肛門大小及飼養(yǎng)難易程度的考慮。實驗室常用的動物有小鼠、大鼠、豚鼠、家兔等。重0.5 g栓劑的直徑，在豚鼠肛門直徑大小的承受范圍內(nèi)，且豚鼠比其它試驗動物溫順，便于飼養(yǎng)和給藥。

本試驗結(jié)果表明，NIM微囊栓組豚鼠與NIM普通栓組豚鼠相比，其肝組織勻漿液中AST、ALT含量明顯偏低，且通過觀察豚鼠的肝組織病理切片，可以看出NIM微囊栓組的肝細胞病變偏輕。綜上，進一步表明微囊栓與普通栓相比能夠降低NIM的肝毒性。

微囊栓降低肝臟毒性的機理，可以從兩方面來看。一方面是栓劑，栓劑能夠避免肝臟的首過效應［7］，減少藥物的代謝失活。另一方面是微囊，微囊是一種人工半透膜，采用緩釋、控釋微囊化材料將藥物制成微囊后，藥劑等小分子物質(zhì)可控地從囊內(nèi)持久緩慢釋放，并擴散到體內(nèi)起長期治療的目的［8］。同時，可以使藥物濃度集中于靶區(qū)，降低毒副作用［9］。故把原料藥做成微囊栓能夠降低對肝臟的毒性。

本試驗中，通過各組豚鼠肝組織勻漿液的數(shù)值大小來判定它們的肝臟受損情況大小。肝組織勻漿液中ALT、AST含量雖說可以表明結(jié)果，但血液中AST、ALT卻是目前最常用的反應肝損傷的生化指標。具體血液中AST、ALT含量，今后還有待試驗驗證。之前有試驗驗證普通栓與微囊栓的體外釋放情況［10］。結(jié)果顯示，微囊栓和普通栓相比，具有較好的體外緩釋效果。也有試驗通過測定NIM栓劑血藥濃度，得出以市售NIM普通片為參比制劑，NIM直腸栓的相對生物利用度為84.75%的結(jié)論［11］。NIM栓劑和微囊栓的體內(nèi)釋放情況，還有待試驗進一步深入驗證。

［1］梁玉華，劉勁.19例尼美舒利所致肝臟損害的調(diào)查分析［J］.海南醫(yī)學，2011，22(19):34 －35.

［2］邵建芳，王志成，王惠媛，等.尼美舒利肝臟損害不良反應探究［J］.中國處方藥，2014，1:20 －21.

［3］李喜香，劉效栓，包強，等.新型栓劑制備工藝及其藥動學特征研究進展［J］.中國藥事，2013，27(7):740－744.

［4］陳圣潔，陳志紅.栓劑新劑型的研究概況［J］.醫(yī)學理論與實踐，2006，19(10):1158 －1159.

［5］劉聰，陳新梅，袁玉芳.脂質(zhì)體降低尼美舒利肝臟毒性的初步研究［J］.藥學研究，2014，33(7):382 －383.

［6］袁玉芳，陳新梅，劉聰.尼美舒利脂質(zhì)體對小鼠體重和攝食量的影響［J］.化工時刊，2014，28(7):24－25.

［7］陳新梅，高曉黎，孫衛(wèi)東，等.尼美舒利栓藥代動力學及相對生物利用度研究［J］.西北藥學雜志，2003，18(3):116－119.

［8］楊曉昀，陳兒同，周燕，等.微囊化技術在醫(yī)學領域中的應用與進展［J］.中國組織工程研究與臨床康復，2010，14(29):5483 －5488.

［9］周松，陳騰.微囊化技術在藥物研究中的應用［J］.醫(yī)藥導報，2007，26(2):179 －181.

［10］楊宜華，劉毅，趙子明，等.萘普生微囊栓的制備及其質(zhì)量控制［J］.中國藥房，2011，22(25):2363 －2365.

［11］陳新梅，高曉黎，白麗.用藥效學試驗篩選尼美舒利新劑型［J］.中國藥學雜志，2003，38(11):841 －844.