不同養(yǎng)殖模式下對蝦早期死亡綜合癥致病菌的動態(tài)變化

張婉蓉　徐含穎　張學(xué)舒　馮雙雙　羅燕兒

摘要 [目的] 為指導(dǎo)南美白對蝦高位池的科學(xué)養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。[方法]選取2種養(yǎng)殖模式的南美白對蝦高位池塘為試驗對象，通過周期性的水樣采集研究了蝦池水體細(xì)菌數(shù)量、弧菌數(shù)量以及弧菌中非副溶血弧菌和副溶血弧菌比例變化規(guī)律與早期死亡綜合癥發(fā)生的相關(guān)性。[結(jié)果]試驗蝦池在養(yǎng)殖初期弧菌數(shù)量較低，養(yǎng)殖過程中弧菌數(shù)量與細(xì)菌總數(shù)的消長趨勢基本一致。當(dāng)蝦池中細(xì)菌總數(shù)高于2.5×10.4 cfu/ml，弧菌數(shù)量高于1.5×10.3cfu/ml，非副溶血弧菌與副溶血弧菌的比例超過10∶1，蝦池內(nèi)極易發(fā)生早期死亡綜合癥。[結(jié)論] 該研究結(jié)果可用于進(jìn)行對蝦健康養(yǎng)殖的風(fēng)險評估。

關(guān)鍵詞 南美白對蝦；細(xì)菌；弧菌；養(yǎng)殖模式

中圖分類號 S945.4.+9 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）11-120-03

南美白對蝦是目前世界養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的三大蝦種之一，南美白對蝦生長速度快、出肉率高，且營養(yǎng)需求低、抗逆性強(qiáng)，是一種優(yōu)良的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種。隨著大規(guī)模的高密度養(yǎng)殖的進(jìn)行，集約化程度不斷提高，南美白對蝦發(fā)生病害愈來愈頻繁。從2009年起，一種名為早期死亡綜合癥（Early mortality syndrome，EMS）的對蝦疾病開始肆虐亞洲各國對蝦養(yǎng)殖區(qū)[1]，給對蝦養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。盡管目前對早期死亡綜合癥的致病機(jī)理研究并不透徹，但眾多學(xué)者普遍認(rèn)為該疾病是由副溶血弧菌直接或間接作用對蝦導(dǎo)致死亡[2-3]。弧菌病是養(yǎng)殖對蝦的主要細(xì)菌病害之一，能引起水產(chǎn)動物魚、蝦類等大量死亡，往往與暴發(fā)性流行病有關(guān)[4-12]。筆者研究了在養(yǎng)殖進(jìn)程中采用不同疾病防控措施的高位蝦池從放苗到收蝦的養(yǎng)殖過程中水體細(xì)菌和弧菌數(shù)量的動態(tài)變化，對“規(guī)范化南美白對蝦養(yǎng)殖水體中細(xì)菌和弧菌總量關(guān)鍵限值”[13-14]進(jìn)行對應(yīng)性檢驗，用于

評估對蝦健康養(yǎng)殖風(fēng)險，為指導(dǎo)南美白對蝦高位池的科學(xué)養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗池塘與養(yǎng)殖進(jìn)程

選定舟山市（金浦養(yǎng)殖場）和臺州市（誠達(dá)養(yǎng)殖場）2個養(yǎng)殖場各4口養(yǎng)殖池和1口水源處理池作為追蹤檢測對象，從2個養(yǎng)殖場各選2口養(yǎng)殖池的檢測結(jié)果作為研究內(nèi)容。試驗所用養(yǎng)殖池均為南美白對蝦規(guī)范化高位養(yǎng)殖池，面積為2 000～3 335 m.2/池，池形正方，中央排污，有效水深1.8 m，池底鋪防滲膜，配備底增氧和水面增氧系統(tǒng)。

養(yǎng)殖流程按照《南美白對蝦高位池養(yǎng)成技術(shù)規(guī)范》[15]執(zhí)行。金浦養(yǎng)殖場在按照南美白對蝦高位池養(yǎng)成技術(shù)規(guī)范進(jìn)行養(yǎng)殖的基礎(chǔ)上，定期在養(yǎng)殖池中進(jìn)行鹵素消毒劑帶蝦消毒，在飼料中拌服針對性抗生素，用于疾病防控。誠達(dá)養(yǎng)殖場在養(yǎng)殖過程中不進(jìn)行鹵素消毒劑帶蝦消毒，在飼料中拌服微生物制劑、大蒜素和VC等，用于提高對蝦的抗病能力。

1.2 儀器與試劑

1.2.1設(shè)備。

滿足細(xì)菌數(shù)量檢測和細(xì)菌種類分離鑒定的完整試驗條件。

1.2.2

試劑。

檢測細(xì)菌總數(shù)的培養(yǎng)基平板為營養(yǎng)瓊脂平板，由上?？片敿挝⑸锛夹g(shù)有限公司生產(chǎn)；

檢測弧菌總數(shù)的培養(yǎng)基平板為TCBS瓊脂平板，由上海科瑪嘉微生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3 試驗方法

采用稀釋平板涂布法對檢測池水中的細(xì)菌總數(shù)、弧菌數(shù)量和弧菌菌比進(jìn)行測定。從對蝦放苗到收獲1個養(yǎng)殖周期內(nèi)，每隔15 d進(jìn)行1次養(yǎng)殖水體的水樣采集，分別測定細(xì)菌總數(shù)、弧菌數(shù)量以及弧菌菌比，通過對試驗數(shù)據(jù)的整理分析，探討高位蝦池細(xì)菌總數(shù)、弧菌數(shù)量變化及弧菌菌比與對蝦EMS癥發(fā)生的相關(guān)性。

1.3.1 采樣方法。2014年6～9月進(jìn)行養(yǎng)殖水環(huán)境細(xì)菌數(shù)量跟蹤檢測，所有檢測池每隔15 d進(jìn)行1次采樣，現(xiàn)場稀釋、涂布水樣，接種平板在實驗室恒溫培養(yǎng)。細(xì)菌采用營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)，弧菌采用TCBS平板培養(yǎng)。接種后的平板放入恒溫培養(yǎng)箱，34 ℃下培養(yǎng)24 h后計數(shù)菌落數(shù)量。

1.3.2 菌落特征。

在TCBS平板上副溶血弧菌的菌落呈圓形，邊緣整齊、濕潤、稍混濁、半透明，多數(shù)具尖心，斗笠狀，藍(lán)綠色。非副溶血弧菌（其他弧菌）的菌落稍大，光滑，黃色，稍平。

1.4 數(shù)據(jù)處理

利用Excel對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計并繪圖，分析其相關(guān)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 蝦池內(nèi)細(xì)菌數(shù)量的變化情況

由表1可知， A3和C7養(yǎng)殖池中細(xì)菌總數(shù)及弧菌數(shù)量基本呈現(xiàn)隨養(yǎng)殖進(jìn)程而增高的走勢；副溶血弧菌數(shù)量在養(yǎng)殖初期為0；此后菌比值隨養(yǎng)殖進(jìn)程有明顯變化，呈上升趨勢，并且表現(xiàn)出副溶血弧菌含量明顯升高的現(xiàn)象——非副溶血弧菌與副溶血弧菌比均超過10∶1。

此外，在檢測過程中水源處理池（消毒池）內(nèi)只檢測到低含量的細(xì)菌數(shù)（<200 cfu/ml）和弧菌數(shù)（<10 cfu/ml）。在末次檢測后的次日（7月2日），C7蝦池內(nèi)出現(xiàn)典型EMS癥，對蝦大批死亡，排塘；7月4日，A3蝦池出現(xiàn)典型EMS癥，對蝦大批死亡，排塘。

由表2可知，在全養(yǎng)殖期內(nèi)8#和11#養(yǎng)殖池中細(xì)菌總數(shù)均低于2.5×10.4 cfu/ml，弧菌數(shù)量除個別時段基本處于1.5×10.3 cfu/ml以下；副溶血弧菌數(shù)量在養(yǎng)殖初期檢測時為0；菌比值隨養(yǎng)殖進(jìn)程有所變化，基本呈上升趨勢，且表現(xiàn)出副溶血弧菌含量明顯升高的現(xiàn)象——非副溶血弧菌與副溶血弧菌比均超過10∶1。

此外，在檢測過程中水源處理池（消毒池）內(nèi)僅檢測到低含量的細(xì)菌數(shù)（<200 cfu/ml）和弧菌數(shù)（<10 cfu/ml）。金浦養(yǎng)殖場全場12口養(yǎng)殖池在整個養(yǎng)殖期未出現(xiàn)明顯的EMS疾病現(xiàn)象，獲得良好的養(yǎng)殖效果，于10月初陸續(xù)收捕，平均產(chǎn)量超過1.8 kg/m.2。

2.2 蝦池內(nèi)細(xì)菌數(shù)量和弧菌數(shù)量的變化

從圖1可以看出，金浦養(yǎng)殖場 8#和11#蝦池細(xì)菌數(shù)量的變化范圍為0.023×10.4 cfu/ml～2.14×10.4 cfu/ml，在2.5×10.4 cfu/ml以下，平均值分別為0.64×10.4和0.44×10.4 cfu/ml，方差分別為0.65和0.34，波動變化較小。誠達(dá)養(yǎng)殖場A3和C7蝦池細(xì)菌數(shù)量的變化范圍為0.69×10.4～3.90×10.4 cfu/ml，平均值分別為2.30×10.4和0.97×10.4 cfu/ml，方差分別為3.33和5.15，波動較為劇烈，2個蝦池的細(xì)菌數(shù)量均在第3次采樣時呈現(xiàn)爆發(fā)性增長。

從圖2可以看出，金浦養(yǎng)殖場8#和11#水體弧菌數(shù)量呈波動變化，范圍為0～2.70×10.3 cfu/ml，平均值分別為0.59×10.3和0.94×10.3 cfu/ml，方差分別為0.89和0.84，數(shù)量變化基本在1.5×10.3 cfu/ml以下。誠達(dá)養(yǎng)殖場A3和C7蝦池在前2次檢測時弧菌數(shù)量為0.08～0.18×10.3 cfu/ml，最高值為0.18×10.3 cfu/ml，弧菌數(shù)量較低。然而，在第3次檢測時發(fā)現(xiàn)，弧菌數(shù)量短時間內(nèi)爆發(fā)性增長，遠(yuǎn)超于1.5×10.3 cfu/ml。A3和C7蝦池檢測結(jié)果的方差分別為2.33和11.16，弧菌數(shù)量的變化幅度較大。

綜上可知，同一個位點細(xì)菌和弧菌數(shù)量呈現(xiàn)規(guī)律性的同步增多或減少。方差分析表明，弧菌數(shù)量的變化與細(xì)菌數(shù)量相比顯得更不穩(wěn)定。

3 結(jié)論與討論

該研究中細(xì)菌數(shù)量變化與養(yǎng)殖進(jìn)程沒有表現(xiàn)出顯著的相關(guān)性，與申玉春等[16]報道的高位蝦池細(xì)菌總數(shù)隨養(yǎng)殖過程逐步上升、后期最多的結(jié)果不同。這可能是人工因素和環(huán)境因子綜合作用的結(jié)果。章潔香等[17]也認(rèn)為池中異養(yǎng)細(xì)菌和弧菌的數(shù)量受多方面因素尤其是人為因素的綜合影響。

3.1 2種養(yǎng)殖模式下細(xì)菌數(shù)量的變化規(guī)律

2個養(yǎng)殖場的水處理池中細(xì)菌數(shù)量與弧菌數(shù)量都非常低。養(yǎng)殖前期，養(yǎng)殖池中的細(xì)菌數(shù)量與弧菌數(shù)量也呈低含量狀態(tài)。這表明《南美白對蝦高位池養(yǎng)成技術(shù)規(guī)范》在水源水的處理中是有效的。誠達(dá)養(yǎng)殖場（A3、C7）養(yǎng)殖進(jìn)程中細(xì)菌數(shù)量與弧菌數(shù)量均呈上升走勢，且在嚴(yán)重超限后發(fā)生EMS癥，導(dǎo)致排塘結(jié)果。金浦養(yǎng)殖場（8#、11#）養(yǎng)殖進(jìn)程中細(xì)菌數(shù)量始終低于2.5×10.4 cfu/ml，弧菌數(shù)量在1.5×10.3 cfu/ml附近波動。筆者認(rèn)為這種現(xiàn)象應(yīng)該是后者定期在養(yǎng)殖池中進(jìn)行鹵素消毒劑帶蝦消毒，始終抑制水中的細(xì)菌數(shù)量結(jié)果。

2個養(yǎng)殖場水體中弧菌數(shù)量中非副溶血弧菌與副溶血弧菌的比例均呈現(xiàn)隨養(yǎng)殖進(jìn)程而升高的趨勢，但由于水中弧菌總數(shù)的差異，2個養(yǎng)殖場養(yǎng)殖池水中副溶血弧菌的含量也有明顯差異。同期進(jìn)行的蝦體弧菌含量輔助檢測發(fā)現(xiàn)，當(dāng)水體弧菌數(shù)量上升時，蝦體肝胰腺和腸道中的弧菌也隨之上升。該試驗結(jié)果表明當(dāng)水體弧菌超過一定數(shù)量時，蝦池內(nèi)極可能發(fā)生對蝦患EMS癥大規(guī)模死亡現(xiàn)象。

2個養(yǎng)殖場都曾出現(xiàn)細(xì)菌數(shù)量過高的現(xiàn)象，而養(yǎng)殖結(jié)果卻表現(xiàn)出明顯差異。2個養(yǎng)殖場的主要區(qū)別體現(xiàn)在養(yǎng)殖管理和疾病防控模式的不同。誠達(dá)養(yǎng)殖場采用肥水養(yǎng)蝦，養(yǎng)殖過程中在蝦池內(nèi)不進(jìn)行消毒，主要以在飼料中添加護(hù)肝藥物（如大蒜素和微生物制劑）來提高抗病能力，無其他對弧菌針對性藥物施用。金浦養(yǎng)殖場采用清水養(yǎng)蝦，陳超然等[18]的研究結(jié)果表明采用ClO2溶液潑灑，對養(yǎng)殖蝦池水中的細(xì)菌具有明顯殺滅作用，所以定期對養(yǎng)殖池進(jìn)行帶蝦消毒（ClO2）。王永勝等[19]研究發(fā)現(xiàn)抗生素可以提高凡納濱對蝦肝臟中的抗菌力， 在飼料中拌入允許使用的抗生素，限制養(yǎng)殖池水中和對蝦體內(nèi)細(xì)菌，特別是弧菌的數(shù)量。

3.2 關(guān)于南美白對蝦高位池養(yǎng)殖的思考

養(yǎng)殖過程中控制細(xì)菌的數(shù)量是至關(guān)重要的，養(yǎng)殖池水中細(xì)菌數(shù)量在2.5×10.4 cfu/ml以下時較為安全，這與郭平等[20]對對蝦養(yǎng)殖水域環(huán)境細(xì)菌動態(tài)變化研究中富營養(yǎng)水域細(xì)菌數(shù)相近。其中，大多數(shù)弧菌在養(yǎng)殖系統(tǒng)中是一類重要的致病菌或條件致病菌，養(yǎng)殖過程中控制蝦池水體的弧菌數(shù)與預(yù)防蝦病的發(fā)生有關(guān)[21]。許多學(xué)者將10.4 cfu/ml作為對蝦發(fā)病的弧菌數(shù)量閾值[22]，但筆者發(fā)現(xiàn)弧菌數(shù)量在1.5×10.3 cfu/ml以下時較為安全，與占國等[23]認(rèn)為使對蝦感染發(fā)病的弧菌數(shù)量閾值為1×10.3～1×10.4 cfu/ml基本接近。此外，菌比值也是需要予以關(guān)注的指標(biāo)。非副溶血弧菌與副溶血弧菌的比例應(yīng)低于10∶1。不同的疾病防控措施表現(xiàn)出明顯不同的養(yǎng)殖成效，建議對南美白對蝦高位池養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范中疾病防控的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)作適應(yīng)性補(bǔ)充或修改。

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責(zé)任編輯 陳玉敏 責(zé)任校對 李巖