從海綿Pseudoceratina purpurea中分離的化合物及其結(jié)構(gòu)鑒定

王海鳴　 李支薇　 田光超 任祥祥

摘要 對(duì)海綿Pseudoceratina purpurea的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)研究。采用多種分離手段對(duì)海綿Pseudoceratina purpurea進(jìn)行化學(xué)成分的分離，運(yùn)用多種波譜分析手段和與文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)比的方法，對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。從海綿Pseudoceratina purpurea中共分離得到9個(gè)化合物，經(jīng)鑒定為hyrtiosin A （1），5-羥基-1H-吲哚-3-羧酸 （2），11-hydroxy-12-（5-hydroxy-1H-indole-3-yl）-ethanone （3），Stevensine （4），Spongiacidin A （5），Oroidin （6），2-bromoaldisine （7），Aaptamine （8），demethylaaptamine （9）。所有化合物均為首次從海綿Pseudoceratina purpurea中分離得到。

關(guān)鍵詞 海綿Pseudoceratina purpurea；化合物；結(jié)構(gòu)鑒定

中圖分類號(hào) S188；R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 0517-6611（2015）11-005-03

海洋中蘊(yùn)藏著非常豐富的海洋天然生物資源，是一個(gè)巨大的天然產(chǎn)物寶庫(kù)。海綿是其中最原始的低等生物[1-2]。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)海綿的研究非常活躍，已從不同海域不同海綿中分離出數(shù)百種結(jié)構(gòu)新穎的化學(xué)成分。目前為止，海洋生物中新化合物的最大來(lái)源仍是海綿[3]。我國(guó)南海環(huán)境特殊，憑借其低污染和物種豐富等優(yōu)勢(shì)，成為海洋生物研究者們競(jìng)相前往尋求原料的首選[4]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，維隆格海綿目海綿Verongiida含有豐富的溴代衍生物，而目前關(guān)于該目海綿Pseudoceratina purpurea的報(bào)道尚少。為尋求具有抗腫瘤、抗病毒等活性的化合物，筆者從南海采集海綿Pseudoceratina purpurea進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，采用1H NMR、13C NMR、UV、ESI-MS等分析手段及與文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)比方法，對(duì)從該海綿中獲得的單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)儀器和材料

Waters 2695高效液相色譜儀（二極管陣列檢測(cè)器，分析柱：4.6 mm×150 mm，半制備柱：10 mm×250 mm，5 μm，Phenomenex，美國(guó)Waters公司）；Brucker Avance 600 型核磁共振波譜儀（德國(guó)Bruker公司）； Lambda 35紫外可見分光光度計(jì)（美國(guó)Perkin-Elmer公司）；N-1100V-W旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本東京理化株式會(huì)社）；LCQDecaXP ESI質(zhì)譜儀（美國(guó)Finnigan公司）；Sephadex LH-20（美國(guó)GE Healthcare公司）；柱層析硅膠（青島海洋化工有限公司生產(chǎn)）；其他所用試劑均為分析純。

1.2 生物材料采樣于海南省文昌縣附近海域，濕重5 kg。經(jīng)荷蘭阿姆斯特丹大學(xué)動(dòng)物學(xué)博物院Rob van Soest 博士鑒定為海綿Pseudoceratina purpurea，標(biāo)本現(xiàn)存于廣州廣電計(jì)量檢測(cè)股份有限公司藻種室。

1.3 分離純化室溫下用乙醇-二氯甲烷（2∶1，V∶V）浸提3次，每次10 d，將所得的粗提物加1體積水混懸，依次采用有機(jī)溶劑乙酸乙酯和正丁醇萃取，減壓回收萃取溶劑，得到乙酸乙酯部萃取物28.11 g和正丁醇部萃取物13.15 g。對(duì)乙酸乙酯部萃取物和正丁醇部萃取物采用Sephadex LH-20、硅膠柱色譜和半制備高效液相色譜等方法進(jìn)行分離、純化。

1.4 化合物1～9的結(jié)構(gòu)鑒定運(yùn)用1H NMR、13C NMR、UV、ESI-MS等分析手段及與文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)比方法，對(duì)獲得的單體化合物1～9進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 化合物1～9的分離純化乙酸乙酯部萃取物（28.11 g） 采用正相硅膠層析 （Pet：=（10∶0）～（0∶10），V∶V）分離，然后根據(jù)薄層色譜檢測(cè)結(jié)果合并近似流份，共得到9個(gè)分離部位（A～I(xiàn)）。部位C使用Sephadex LH-20（MeOH）再次分離，根據(jù)薄層色譜檢測(cè)結(jié)果合并近似流份，得到3個(gè)子分離部位C-1、C-2和C-3。C-2使用Sephadex LH-20（MeOH）再次分離，得到2個(gè)流份C-2-1和C-2-2，再用HPLC（MeOH∶H2O = 7∶93，V∶V）對(duì)C-2-1進(jìn)行分離，得到化合物1（2.7 mg）和化合物2（3.6 mg）。E組分使用正相硅膠色譜 （CHCl3∶Me2CO=（1∶0）～（0∶1），V/V）細(xì)化分離，得到4個(gè)子分離部位E-1～E-4。子部位E-4經(jīng)半制備HPLC （MeOH∶H2O=25∶75，V∶V）進(jìn)行分離，得到化合物3 （6.7 mg）和化合物4 （1.8 mg）。F組分使用正相硅膠色譜 （CHCl3：Me2CO=（1∶0）～（0∶1），V∶V）再次分離，得到5個(gè)子分離部位F-1～F-5。F-2用半制備HPLC （MeOH∶H2O=5∶95，V∶V）分離，得化合物5 （1.6 mg）和化合物6 （1.3 mg）。F-3直接采用半制備HPLC （流動(dòng)相MeOH∶H2O=35∶65，V∶V）進(jìn)行分離，得化合物7 （2 mg）。

正丁醇萃取物（13.15 g）采用正相硅膠層析，得到4個(gè)分離部位（J-1～J-4）。J-3用半制備HPLC （MeOH∶H2O=15∶85，V∶V）進(jìn)行分離，得到化合物8 （2.6 mg）和化合物9 （3.1 mg）。

2.2 化合物1～9結(jié)構(gòu)鑒定 化合物1～9的結(jié)構(gòu)見圖1?；衔?白色無(wú)定形粉末；ESI-MS m/z 161 [M+H]+；1H NMR （600 MHz，DMSO） δH：11.90 （br，H-NH），9.87 （s，H-10），8.13（brd， J = 3.0 Hz，H-2），7.40 （d，J = 2.5 Hz，H-4），7.26 （d，J = 8.8 Hz，H-7），6.74 （dd，J = 2.5，8.8 Hz，H-6）； 13C NMR （150 MHz，CD3OD） δC：184.2 （d，C-10），152.1 （s，C-5），138.1 （d，C-2），133.2 （s，C-8），125.3 （s，C-9），117.3 （s，C-3），113.2 （d，C-7），113.1 （t，C-6），104.4 （d，C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]對(duì)照基本一致，因此將化合物1鑒定為hyrtiosin A。

化合物2白色無(wú)定形粉末；ESI-MS m/z 177 [M+H]+；1H NMR （600 MHz，DMSO） δH：11.83 （brs，H-NH），7.90（brd， J = 3.0 Hz，H-2），7.55 （d，J = 2.5 Hz，H-4），7.24 （d，J = 8.8 Hz，H-7），6.75 （dd，J = 2.5，8.8 Hz，H-6）； 13C NMR （150 MHz，CD3OD） δC：193.6 （d，C-10），152.0 （s，C-5），138.1 （d，C-2），130.0 （s，C-8），125.5 （s，C-9），128.2 （s，C-3），111.4 （d，C-7），113.0 （t，C-6），104.4（d，C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]對(duì)照基本一致，因此將化合物2鑒定為5-羥基-1H-吲哚-3-羧酸。

化合物3白色無(wú)定形粉末；ESI-MS m/z 191 [M+H]+；1H NMR （600 MHz，DMSO） δH：11.72 （brs，H-NH），8.00 （brd，J = 3.0 Hz，H-2），7.52 （d，J = 1.8 Hz，H-4），7.33 （d，J = 8.8 Hz，H-7），6.73 （dd，J = 2.5，8.8 Hz，H-6）； 13C NMR （150 MHz，CD3OD） δC：196.3 （d，C-10），152.1 （s，C-5），133.0 （s，C-8），130.1 （d，C-2），126.5 （s，C-9），114.2 （s，C-3），112.4 （d，C-7），112.0 （t，C-6），105.4（d，C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]對(duì)照基本一致，因此將化合物3鑒定為11-hydroxy-12-（5-hydroxy-1H-indole-3-yl）-ethanone。

化合物4橙色無(wú)定形固體；UV ёmax 224，235 nm； ESI-MS m/z 386，388，390 [M+H]+；1H NMR （600 MHz，DMSO） δH：6.81 （s，H-12），6.24 （t，J = 6.9 Hz，H-9），3.56 （d， J = 7.0 Hz，H-8）；13C NMR （150 MHz，CD3OD） δC：161.2 （s，C-6），126.1 （s，C-9），120.8 （s，C-10）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]對(duì)照基本一致，因此將化合物4鑒定為Stevensine。

化合物5黃色無(wú)定形固體；UV ёmax 272，332 nm； ESI-MS m/z 402，404，406 [M+H]+；1H NMR （600 MHz，DMSO） δH：3.40 （brs，H-8），3.43 （brs，H-9）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]對(duì)照基本一致，因此將化合物5鑒定為Spongiacidin A。

化合物6淺黃色油狀物；UVёmax 276，215 nm； ESI-MS m/z 386，388，390 [M+H]+；1H NMR （600 MHz，DMSO） δH：12.70 （brs，H-NH），10.43 （ brt，J = 5.6，5.5 Hz，H-NH），8.53（brt，J = 5.0，10.1 Hz，H-NH），7.60 （brs，H-NH2），7.06（s，H-4），6.81 （s，H-15），6.21 （brd，J = 16.3 Hz，H-10），6.12（dd，J = 10.0，15.7，5.0 Hz，H-9），3.93 （brt，J = 5.0，11.3 Hz，H-8）； 13C NMR （150 MHz，CD3OD） δC：158.4 （s，C-6），148.2 （s，C-13），128.3 （s，C-5），128.1 （s，C-11），128.0 （s，C-9），117.2（ d，C-10），112.4 （s，C-4），111.6 （s，C-15），104.2（s，C-3），39.9 （t，C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]對(duì)照基本一致，因此將化合物6鑒定為Oroidin。

化合物7白色粉末；ESI-MS m/z 224，310 [M+H]+；1H NMR （600 MHz，DMSO） δH：6.60 （s，H-3），3.52 （dd，J = 2.5，3.15 Hz，H-8），2.80 （dd，J = 2.53，3.15 Hz，H-9）； 13C NMR （150 MHz，CD3OD） δC：194.0 （s，C-10），161.1 （s，C-6），129.3 （s，C-5），124.4 （s，C-4），110.6 （d，C-3），105.2 （s，C-2），43.1 （t，C-9），36.01 （t，C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]對(duì)照基本一致，因此將化合物7鑒定為2-bromoaldisine。

化合物8白色粉末；UV ёmax 240，254 nm； ESI-MS m/z 229 [M+H]+；1H NMR （600 MHz，DMSO） δH：12.63 （brs，H-NH），7.82 （t，J = 6.2，6.2 Hz，H-2），7.41 （brt，J =6.9，4.1Hz，H-5），7.11 （s，H-7），6.94 （d，J = 6.9 Hz，H-6），6.34 （d，J = 6.2 Hz，H-3），4.11 （s，H-OCH3），3.80 （s，H-OCH3）； 13C NMR （150 MHz，CD3OD） δC：156.7 （s，C-9），149.8 （s，C-3a），142.1 （d，C-2），133.9 （s，C-9a），132.8 （s，C-6a），131.1 （s，C-8），129.7 （d，C-5），116.5 （s，C-9b），112.5 （d，C-6），100.8 （d，C-7），98.0 （d，C-3），60.1 （q，C-OCH3），56.3 （q，C-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]對(duì)照基本一致，因此將化合物8鑒定為Aaptamine。

化合物9ESI-MS m/z 215 [M+H]+；1H NMR （600 MHz，DMSO） δH：12.62 （brs，H-NH），10.11 （brs，H-OH），7.83（t，J = 6.6，6.7 Hz，H-2），7.26 （brt，J = 5.1，7.2 Hz，H-5），7.12 （s，H-7），6.81 （d，J = 7.2 Hz，H-6），6.34（d，J = 7.1 Hz，H-3），3.93 （s，H-OCH3）； 13C NMR （150 MHz，CD3OD） δC：152.1 （s，C-9），151.6 （s，C-8），149.6 （s，C-3a），141.9 （d，C-2），129.3 （d，C-5），128.7 （s，C-9a），127.9 （s，C-6a），116.8 （s，C-9b），112.8 （d，C-6），97.1 （d，C-3），56.2 （q，C-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]對(duì)照基本一致，因此將化合物9鑒定為demethylaaptamine。

3 結(jié)論

筆者對(duì)南海海綿Pseudoceratina purpurea的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，共從中分離得到9個(gè)化合物，分別為hyrtiosin A （1），5-羥基-1H-吲哚-3-羧酸 （2），11-hydroxy-12-（5-hydroxy-1H-indole-3-yl）-ethanone （3），Stevensine （4），Spongiacidin A （5），Oroidin （6），2-bromoaldisine （7），Aaptamine（8），demethylaaptamine （9）。這些化合物均為首次從海綿中分離得到。這些化合物是否有活性、有何種活性，還待進(jìn)一步研究。

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