雄性化黃顙魚卵睪體的研究

吳美仙　陳頁

摘要 [目的]對雄性化黃顙魚卵睪體進(jìn)行初步觀察。[方法]從形態(tài)學(xué)和組織學(xué)角度，觀察雄性化處理后黃顙魚卵睪體的發(fā)育過程。[結(jié)果] 黃顙魚卵睪體的形態(tài)結(jié)構(gòu)可分為卵巢形、上下異形、左右異形3種主要類型。[結(jié)論] 雄性化處理后黃顙魚性腺組織結(jié)構(gòu)的發(fā)展趨勢是卵巢逐漸萎縮，精巢逐步發(fā)育，最終黃顙魚可能徹底雄性化。

關(guān)鍵詞 黃顙魚；雄性化；卵睪體

中圖分類號 S9651.99 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）19-107-04

黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco Richardson），隸屬鯰型目、鲿科、黃顙魚屬，俗名昂刺。黃顙魚肉質(zhì)鮮嫩，味道鮮美，營養(yǎng)豐富，無鱗，無肌間刺，可食部分大，深受消費(fèi)者喜愛。但是，在野生狀態(tài)下黃顙魚生長速度較慢，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場需求，因此黃顙魚是目前淡水養(yǎng)殖的重要對象。研究表明，在相同養(yǎng)殖條件下雄性黃顙魚比同胞雌魚的生長速度快30% 左右[1]。杭嘉湖一帶養(yǎng)殖戶也大多養(yǎng)殖雄性化黃顙魚，以提高經(jīng)濟(jì)效益。

鑒于黃顙魚全雄魚的養(yǎng)殖推廣還需要時(shí)間[1]，目前養(yǎng)殖戶大多以雄性激素性逆轉(zhuǎn)方式育苗獲得雄性化黃顙魚。黃顙魚性腺天然的組織結(jié)構(gòu)、發(fā)育過程已有較多的研究[2-7]，但黃顙魚雄性化過程中性腺的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)變化鮮有報(bào)道[8]。筆者從形態(tài)學(xué)和組織學(xué)角度對黃顙魚卵睪體進(jìn)行了初步觀察研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料和試劑 試驗(yàn)用黃顙魚仔魚通過人工授精于2012年6月29日孵化獲得。雄性化激素為甲基睪酮。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 雄性化處理。取孵化后第5天的混性黃顙魚魚苗大約1 500尾分成3組，每組500尾，投入已消毒處理的4 m2的正方形水泥池（邊長2 m，水深60 cm），池1和池2為試驗(yàn)組，池3為對照組。3 d后魚苗的卵黃囊消失，開始投喂餌料。對照組直接用自來水拌粉料捏合成團(tuán)投喂；試驗(yàn)組用

純酒精溶化激素后拌粉料捏合成小團(tuán)，待酒精揮發(fā)后投喂。激素處理共持續(xù)52 d。投飼量根據(jù)魚苗進(jìn)食情況逐漸調(diào)整。管理過程同養(yǎng)殖生產(chǎn)。

1.2.2 性腺組織摘取。從激素處理后第60天開始，按月取材[2] ，每池隨機(jī)抓取5尾魚，第6個(gè)月抓取15尾，第13個(gè)月結(jié)束養(yǎng)殖生產(chǎn)。黃顙魚個(gè)體較小時(shí)去頭尾，采用Bouin氏固定液固定，固定后解剖取性腺，系列酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，連續(xù)切片厚度為8 μm ，H-E染色，中性樹膠封片，Leica DM6000B顯微鏡鏡檢，并拍照。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)結(jié)構(gòu) 黃顙魚的性腺位于鰾和腎臟的腹面，左右兩葉在后方合并為一體，以1個(gè)共同的開口開于生殖乳突上。天然黃顙魚未成熟性腺呈細(xì)線狀，無法區(qū)分精巢和卵巢；隨著性腺的逐步發(fā)育，精巢從幼小的齒狀分枝發(fā)展到成熟時(shí)高度分支的菊花瓣?duì)?，卵巢從狹帶狀到扁帶狀直至成熟時(shí)呈明顯膨脹的囊狀，卵粒充滿其間。

卵睪體的形態(tài)結(jié)構(gòu)與天然的精巢和卵巢有明顯的區(qū)別。出苗98 d的黃顙魚卵睪體僅憑外觀判斷是1個(gè)純粹的卵巢，呈表面光滑的狹帶狀（圖1A）；以后的卵睪體有的呈表面不光滑的圓筒狀，局部有鈍齒 （圖1B、D、I），也有的呈帶鈍齒的狹帶狀，更類似卵巢（圖1C）；發(fā)展到后期，卵睪體更趨近于扁帶狀的卵巢，但又以鈍齒有別于卵巢（圖1E、H）；還有的兩條性腺的上半部分類似卵巢，下半部分類似精巢的結(jié)構(gòu)（圖1G、K），但形似精巢的下半部分其顯微結(jié)構(gòu)還是出現(xiàn)了卵母細(xì)胞（圖2I、J）。即使外觀形態(tài)結(jié)構(gòu)是純粹的高度分枝的菊花瓣?duì)睿▓D1F），從切片的組織結(jié)構(gòu)來看還是卵睪體（圖1H）。另外。有的2個(gè)性腺中的一條類似精巢的形態(tài)，另外一條類似卵巢的形態(tài)（圖1J）。

2.2 組織結(jié)構(gòu) 出苗98 d和出苗121 d的黃顙魚，切片中可清晰看到卵巢和精巢各據(jù)一方，二者的面積比大約是1∶1（圖2A～B）。卵母細(xì)胞周圍發(fā)現(xiàn)有敗育的性細(xì)胞（圖2C）。

出苗121 d的黃顙魚（圖2D），有的精巢組織完全把卵巢包圍；出苗200 d的和340 d的都有類似的結(jié)構(gòu)（圖2E～F）。精巢組織面積明顯大于卵巢組織。隨著發(fā)育時(shí)間的延續(xù)，精巢的發(fā)育越來越成熟，而大多數(shù)卵母細(xì)胞都處于第II時(shí)相[2-5，7，9-11] ，有較多的卵母細(xì)胞出現(xiàn)退化的跡象（圖2C，G～H）。

卵睪體總的發(fā)展趨勢是卵巢面積逐漸減少，精巢面積逐漸增加，到發(fā)育后期只出現(xiàn)屈指可數(shù)的幾個(gè)卵母細(xì)胞。出苗397 d，偶有幾個(gè)卵母細(xì)胞（圖2G）和只有3個(gè)卵母細(xì)胞（圖2H）的，其中2個(gè)敗育；出苗340 d的只有2個(gè)卵母細(xì)胞（圖2I）和1個(gè)卵母細(xì)胞（圖2J）。但也有例外，出苗228 d的1個(gè)樣本，卵巢面積遠(yuǎn)大于精巢面積，精巢呈現(xiàn)一細(xì)條狀偏居一隅（圖2K）。

前述卵睪體中精巢和卵巢多是各自集中分布，這與Bubley W J等[12]在石斑魚中觀察到的一致。但是，在出苗212 d的黃顙魚體內(nèi)觀察到1個(gè)精巢和卵巢相間分布的樣本（圖2L）。

3 討論

3.1 激素處理開始時(shí)間 魚類的性腺發(fā)育存在一個(gè)對外源激素誘導(dǎo)的敏感期，這個(gè)過程發(fā)生在性腺分化以前，決定性別向某一特定表型分化的方向[13]。尹洪濱等[6]認(rèn)為黃顙魚性分化最早發(fā)生于出苗13 d左右。該試驗(yàn)激素處理開始于出苗后7 d應(yīng)該仍處于未分化前的敏感期。

3.2 形態(tài)結(jié)構(gòu)和組織結(jié)構(gòu) 該試驗(yàn)雄性激素處理后黃顙魚性腺較多地呈現(xiàn)卵睪體的結(jié)構(gòu)。典型卵睪體的形態(tài)結(jié)構(gòu)可以基本分成3類：①卵巢形卵睪體：2條性腺都接近于卵巢的各個(gè)發(fā)育時(shí)期，或狹帶狀、或囊狀、或扁帶狀；②上下異形卵睪體：2條性腺的上半部分類似囊狀的卵巢，下半部分類似分枝狀的精巢；③左右異形卵睪體，其中一條是精巢，另一條是卵巢。

第一類卵睪體的組織結(jié)構(gòu)，除1個(gè)樣本的卵巢面積遠(yuǎn)大于精巢面積外，其余的隨著發(fā)育的持續(xù)，二者從面積比大致相等到卵巢面積逐漸減少，精巢面積逐漸增加；及至發(fā)育到第二類卵睪體的組織結(jié)構(gòu)，卵巢只以少數(shù)幾個(gè)細(xì)胞殘留在精巢組織中。第三種類型的卵睪體，2條異形的性腺主體部分分別做切片，其顯微結(jié)構(gòu)是單純的精巢或卵巢。

4 結(jié)論

樓允東[11]發(fā)現(xiàn)黑鯛（Mylio macrocephalus）幼魚的性腺是精巢，年長后反轉(zhuǎn)成卵巢，中間存在著一個(gè)雌雄同體的過渡期。綜上所述，卵睪體總的發(fā)展趨勢是卵巢面積逐漸減少，精巢面積逐漸增加，直至卵巢只以少數(shù)幾個(gè)卵母細(xì)胞甚至1個(gè)卵母細(xì)胞殘留在精巢組織中。卵睪體中的卵母細(xì)胞比較一致地處于第II時(shí)相，有的卵母細(xì)胞周圍發(fā)現(xiàn)有敗育的性細(xì)胞，多數(shù)可以清楚地判斷是退化的卵母細(xì)胞。在外源雄性激素的作用下，卵巢逐漸萎縮，大多數(shù)終止在第II時(shí)相；精巢逐步發(fā)育，最終黃顙魚可能徹底雄性化。

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