不同載體上微量接觸類檢材的相關(guān)問(wèn)題探究

董會(huì) 王晶 李彩霞 張濤 劉超

摘要：手部接觸類生物物證是目前案件中的主要生物物證，但關(guān)于此類物證在不同載體上DNA的檢出量和檢驗(yàn)效果、最佳前處理方法以及檢材放置不同時(shí)間后的檢出量和檢驗(yàn)效果的變化尚無(wú)詳細(xì)研究報(bào)道通過(guò)制備手部接觸類生物檢材，分別使用直接剪取法、膠帶粘取法、兩步擦拭法和真空吸取法對(duì)檢材進(jìn)行前處理，然后進(jìn)行DNA提取，用篩選出的最佳前處理方法處理放置不同時(shí)間段·的檢材，均使用常規(guī)程序?qū)z材進(jìn)行DNA提取、定量和復(fù)合擴(kuò)增，并對(duì)各項(xiàng)結(jié)果進(jìn)行分析和討論。實(shí)驗(yàn)觀察到總體上使用直接剪取法進(jìn)行前處理的檢材提取到的DNA的量大于使用兩步檫拭法和真空吸取法進(jìn)行前處理提取到的DNA的量，且這4種前處理方法在不同載體的檢材之間提取到的DNA量有差異；隨著時(shí)間的推移，在放置360d內(nèi)的DNA檢出量和檢驗(yàn)效果無(wú)較大差異；由此得出，不同載體上DNA的檢出量和檢驗(yàn)效果有差異，針對(duì)不同栽體，其最佳前處理方法也不同；檢材常溫干燥放置一年內(nèi)，其DNA無(wú)明顯降解。關(guān)鍵詞：物證；接觸類DNA；DNA分型；前處理方法；載體中圖分類號(hào)：K89 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-7847（2015）02-0145-09An Exploration on Trace Touch Related DNA Materials from Different SubstratesDONG Hui1， WANG Jing2， LI Cai-xia2，ZHANG Tao2，LIU Chao1*（1. Graduate School， Southern Medical University， Guangzhou 510515， Guangdong， China； 2. Institute of Forensic Science， Key Laboratory of Forensic Genetics， Ministry of Public Security， Beijing 100038， China）Abstract ： Hand touch DNA material evidence is currently the main biological material evidence in the forensic cases. However， researches on the detection and inspection of DNA on different substrates， the best preprocess protocol and the change of the detection and inspection results of DNA on different substrates after placed at different times of these evidences have not been detailed investigated. DNA were extracted from mock exhibits after directly cutting method， wet and dry double swab technique， stubbing procedure and vacuum cleaner method. Then the best preprocess protocol was used to deal with the exhibits after placed at different times. DNA extracted from the samples was quantified and amplified using standard manufacture 1 s procedures， and the results were analyzed and discussed. The amount of DNA using direct cutting method for pretreatment was greater than the amount of DNA using the wet and dry double swab technique and the vacuum cleaner method for pretreatment. The four preprocess protocols show differences between different substrates. As time goes on， the amounts of DNA after placed various days had no significant differences. The detection， inspection of DNA and the best preprocess protocol on different substrates demon?strated clear differences. Under the normal temperature and dry conditions， the amounts of DNA detection in one year showed no degradation trends with time.Key words：biological evidence； touch DNA； DNA typing； preprocess method； substrate（Life Science Research， 2015，19（2）：145?153）微量接觸類是目前檢案中經(jīng)常遇到的疑難生物物證，也是目前法醫(yī)遺傳領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)和難點(diǎn)之一[1、2].由于此類物證檢驗(yàn)成功率低，往往需要反復(fù)多次檢驗(yàn)而成為案件檢驗(yàn)的限速步驟。微量接觸類物證131是通過(guò)皮膚或粘膜接觸而形成的一種物證，如刀柄、鑰匙、手機(jī)、衣帽鞋襪、手套、門把手、果核、牙刷、飲料罐等客體上可能遺留有皮膚表皮脫落細(xì)胞或粘膜上皮細(xì)胞。伴隨犯罪智能化水平的提高，血跡、毛發(fā)、精斑等明顯的生物物證常常被有意識(shí)的破壞掉，而微量接觸類物證由于量少不易被識(shí)別往往被忽略。此類潛在的生物物證由于只有少量脫落細(xì)胞或游離的DNA成份吒檢驗(yàn)時(shí)很難判斷載體上樣本的具體部位，往往盲目剪取，剪取面積過(guò)大時(shí)又會(huì)降低DNA濃度或引入污染，但其檢驗(yàn)結(jié)果往往可能成為案件偵破的關(guān)鍵線索和證據(jù)。目前關(guān)于接觸類生物物證的相關(guān)研究和報(bào)道還很局限[5]，所以本實(shí)驗(yàn)針對(duì)此類生物物證，從物證的前處理方法人手，以手部接觸類生物物證為研究對(duì)象，研究了不同載體的DNA檢出量和檢驗(yàn)效果有何不同、前處理方法對(duì)DNA檢出量和檢驗(yàn)效果的影響，以及放置不同時(shí)間后，DNA檢出量和檢驗(yàn)效果的變化。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料普通棉線手套100只，粗棉質(zhì)繩索（直徑1cm、長(zhǎng)8cm）30段，細(xì)棉質(zhì)繩索（直徑0.5cm、長(zhǎng)8cm）30段，布片（4cmx4cm）30片，模擬門把手（木質(zhì)，表面光滑附棕色油漆，直徑2.5cm、長(zhǎng)8cm）100個(gè)，玻璃片（2cmx7.5cm）60片，塑料繩索（8cm）30段，棉簽100根，生物物證粘取器100個(gè)。塑料物證袋（15cmX20cm）100個(gè)，剪刀200把，鑷子200個(gè)。1.2主要儀器和試劑AmpFLSTR?Identifiler?Plus試劑盒（Ap?pliedBiosystems公司，美國(guó)），M48QIAGEN?試劑盒（QIAGEN公司，德國(guó)），Thermomixercomfort（Eppendorf公司，德國(guó)），漩渦混合器（昊諾斯公司，中國(guó)），磁力架（Promega公司，中國(guó)），蛋白酶K（Merck公司，德國(guó)），Quantifiler?HumanDNAquantificationkit（AppliedBiosystems公司，美國(guó)），MastercyclerproEppendorf?熱循環(huán)儀（Eppendorf公司，德國(guó)），ABI3130x1遺傳分析儀（AppliedBiosystems公司，美國(guó)），7500Real-timePCRsys?tems（AppliedBiosystems公司，美國(guó)）。1.3方法1.3.1實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制每次實(shí)驗(yàn)前，對(duì)實(shí)驗(yàn)材料和部分實(shí)驗(yàn)儀器用70%乙醇和0.05%的次氯酸進(jìn)行浸泡或擦洗，在無(wú)菌的無(wú)紡布上進(jìn)行干燥，并用紫外燈照射24h以上[6]。隨機(jī)抽取5片布片、2段粗棉質(zhì)繩索和2段細(xì)棉質(zhì)繩索用直接剪取法[7]進(jìn)行前處理，隨機(jī)抽取2段塑料繩索用真空吸附法[8]進(jìn)行前處理，隨機(jī)抽取3只手套用膠帶粘取法[9、10]進(jìn)行前處理，隨機(jī)抽取3個(gè)模擬門把手和5個(gè)玻璃片用兩步擦拭法[11、12]，進(jìn)行前處理，隨機(jī)抽取10根棉簽和5個(gè)塑料物證袋，然后對(duì)所有檢材進(jìn)行DNA提取、定量、擴(kuò)增和毛細(xì)管電泳，檢測(cè)結(jié)果均為陰性。1.3.2滲透性栽體的微量接觸類DNA檢材制備隨機(jī)抽取8塊布片隨機(jī)分給實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)個(gè)體8名（2名女性個(gè)體，6名男性個(gè)體），每個(gè)個(gè)體手部平均用力搓捏布片10s[13]，按2cmX2cm大小，剪為4片，隨機(jī)3片分別采用直接剪取法、真空吸附法和膠帶粘取法進(jìn)行前處理。隨機(jī)抽取8段粗棉質(zhì)繩索隨機(jī)分給實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)個(gè)體8名（2名女性個(gè)體，6名男性個(gè)體），每個(gè)個(gè)體手部平均用力搓拉繩索10s，按每段2cm大小，剪為4段，隨機(jī)3段分別采用直接剪取法、真空吸附法和膠帶粘取法進(jìn)行前處理。隨機(jī)抽取8段細(xì)棉質(zhì)繩索，隨機(jī)分給實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)個(gè)體8名（2名女性個(gè)體，6名男性個(gè)體），每個(gè)個(gè)體手部平均用力搓拉繩索10s，按每段2cm大小，剪為4段，隨機(jī)3段分別采用直接剪取法、真空吸附法和膠帶粘取法進(jìn)行前處理。隨機(jī)抽取24只手套隨機(jī)分給實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)個(gè)體8名（2名女性個(gè)體，6名男性個(gè)體），每個(gè)個(gè)體3只手套，每次每個(gè)個(gè)體用右手帶一只手套且平均用力搓捏10s，對(duì)3只手套進(jìn)行相同的檢材制備過(guò)程，隨機(jī)3只手套分別采用直接剪取法、真空吸附法和膠帶粘取法進(jìn)行前處理，其中3種前處理方法處理的部位均是手套的大魚(yú)際和小魚(yú)際處。每次檢材制備時(shí)間間隔24h以上。1.3.3非滲透性載體的微量接觸類DNA檢材制備隨機(jī)抽取8段塑料繩索隨機(jī)分給實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)個(gè)體8名（2名女性個(gè)體，6名男性個(gè)體），每個(gè)個(gè)體手部平均用力搓拉繩索10s，按每段2cm大小，剪為4段，隨機(jī)分別采用直接剪取法、真空吸附法、兩步擦拭法和膠帶粘取法進(jìn)行前處理。隨機(jī)柚取24片玻璃隨機(jī)分給實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)個(gè)體8名（2名女性個(gè)體，6名男性個(gè)體），每個(gè)本3片玻璃，每次每個(gè)個(gè)體用右手平均用力按壓玻璃10s，對(duì)3片玻璃進(jìn)行相同的檢材制備過(guò)程，隨機(jī)3片玻璃分別采用兩步擦拭法、真空吸附法和膠帶粘取法進(jìn)行前處理。隨機(jī)抽取24個(gè)模擬門把手隨機(jī)分給實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)個(gè)體8名（2名女性個(gè)體，6名男性個(gè)體），每個(gè)個(gè)體3個(gè)模擬門把手，每次每個(gè)個(gè)體用右手平均用力搓捏模擬門把手10s，對(duì)3個(gè)模擬門把手進(jìn)行相應(yīng)的檢材制備過(guò)程，隨機(jī)3個(gè)模擬門把手分別采用兩步擦拭法、真空吸附法和膠帶粘取法進(jìn)行前處理。每次檢材制備時(shí)間間隔24h以上。1.3.4放置不同時(shí)間段的檢材制備滲透性檢材以手套為例，隨機(jī)抽取40只手套隨機(jī)分給實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)個(gè)體5名（4名男性個(gè)體，1名女性個(gè)體）。每個(gè)個(gè)體8只手套，每次每個(gè)個(gè)體用右手帶一只手套且平均用力搓捏30s，對(duì)8只手套進(jìn)行相同的檢材制備過(guò)程，隨機(jī)8只手套分別放入8個(gè)塑料物證袋中，分別放置2d、6d、10d、30d、60d、90d、180d和360d后，然后采用真空吸附法進(jìn)行前處理，其中前處理方法處理的部位均是手套的大魚(yú)際和小魚(yú)際處。每次檢材制備時(shí)間間隔24h以上。非滲透性檢材以模擬門把手為例，隨機(jī)抽取40個(gè)模擬門把手隨機(jī)分給實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)個(gè)體5名（4名男性個(gè)體，1名女性個(gè)體），每個(gè)個(gè)體8個(gè)模擬門把手，每次每個(gè)個(gè)體平均用力搓捏模擬門把手30s，對(duì)8個(gè)模擬門把手進(jìn)行相同的檢材制備過(guò)程，隨機(jī)8個(gè)模擬門把手分別放入8個(gè)塑料物證袋中，分別放置2d，6dJOd、30d、60d、90d、180d和360d后，然后采用真空吸附法進(jìn)行前處理。每次檢材制備時(shí)間間隔24h以上。1.3.5檢材檢驗(yàn)過(guò)程實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室溫度保持為22～24℃，空氣相對(duì)濕度為50%[7]。然后分別對(duì)已經(jīng)進(jìn)行前處現(xiàn)完畢的檢材進(jìn)行DNA提取，提取方法為磁珠法具體操作參照M48QIAGEN?試劑盒使用說(shuō)明。用7500Real-TimePCRsystems和Quan-tifiler?HumanDNAquantificationkit對(duì)提取到的DNA全部進(jìn)行定量。使用AmpFLSTR?Identi-filer?Plus試劑盒對(duì)DNA進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增，將1μL擴(kuò)增產(chǎn)物和9μL甲酰胺內(nèi)標(biāo)混合物混合變性后，應(yīng)用ABI3130XL型遺傳分析儀進(jìn)行電泳檢測(cè)，用GeneMapperIDV3.3軟件自動(dòng)分析數(shù)據(jù)每組均設(shè)置空白試劑陰性對(duì)照和9947陽(yáng)性對(duì)照甲酰胺內(nèi)標(biāo)混合物配比參照AmpFLSTR?Identi-filer?Plus試劑盒使用說(shuō)明。1.3.6數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì)全部DNA定量結(jié)果，結(jié)果以質(zhì)量的形式呈現(xiàn)。所得DNA檢測(cè)圖譜與巳知分型結(jié)果比對(duì)，以各等位基因峰高大于50RFUs者為有效分姻結(jié)果。平均等位基因數(shù)的計(jì)算為：平均等位基W數(shù)=有效分型結(jié)果總數(shù)/樣本數(shù)。檢測(cè)率的計(jì)算為：檢測(cè)率=檢測(cè)到的樣本數(shù)/樣本總數(shù)。用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法中的Studentsttest[15、16]和One-WayANOVA[17]進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)運(yùn)算。2結(jié)果2.1定量結(jié)果由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中存在無(wú)DNA、DNA童低于檢測(cè)線，或者DNA損耗等各種因素，所以本研究假定實(shí)驗(yàn)中DNA損耗量為恒量在本實(shí)驗(yàn)中，所用的載體分為兩種類型，其中棉線手套、布片和粗細(xì)棉質(zhì)繩索均為滲透性載體，而模擬門把手、玻璃片和塑料繩索均為非滲透性載體，在滲透性和非滲透性載體的實(shí)驗(yàn)中所有模擬檢材的DNA檢測(cè)率為95.5%，其中滲透性載體上的DNA檢測(cè)率為100%，非滲透性載體上的DNA檢測(cè)率為90%，其中模擬門把手的DNA檢測(cè)率為95.8%，玻璃片的DNA檢測(cè)率為79.2%，塑料繩索的DNA檢測(cè)率為93.8%。從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以得出，滲透性載體和非滲透性載體在用力搓拉1min后，用本實(shí)驗(yàn)所用到的4種前處理方法，95.5%以上的載體可以獲得DNA，且DNA檢測(cè)量均值為4.54ng，最小值為Ong，最大值為39.75ng。滲透性載體和非滲透性載體上的DNA檢測(cè)量用Studentsttest相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=3.652，p=3.522E-4），其中滲透性載體的DNA檢測(cè)量的均值為5.93ng（s=6.86），非滲遺性載體的DNA檢測(cè)量的均值為2.87ng（s=4.13），從樣本均數(shù)得出，滲透性載體的DNA檢測(cè)非滲透性載體的DNA檢測(cè)量。在不同的載體上DNA檢出量之間有差異，其中手套與細(xì)棉質(zhì)繩索、模擬門把手、玻璃片和塑料繩索之間均有差異，從樣本均數(shù)得出，手套上的DNA檢測(cè)量大于細(xì)棉質(zhì)繩索、模擬門把手、玻璃片和塑料繩索上的DNA檢測(cè)量。在無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的載體之間，其樣本均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差仍有較大不同，詳見(jiàn)表1、表2和圖1。從表1的實(shí)際數(shù)據(jù)可以看出，滲透性載體的DNA檢測(cè)量的均值明顯高于非滲透性載體，其中玻璃片的DNA檢測(cè)率和DNA檢測(cè)量均值均為最低，由此得出，在玻璃片上不易遺留DNA。在表2中，載體之間通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)運(yùn)算，兩兩之間比較的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有部分顯著，而部分并不顯著，這是由于微量接觸類檢材中DNA檢測(cè)量普遍較低，數(shù)據(jù)通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較差異并不十分明顯，但其DNA檢測(cè)量均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差同樣能反映不同載體之間的不同。從圖1上可以明顯看出，棉線手套和布片檢測(cè)到的DNA量明顯高于玻璃片和塑料繩索檢測(cè)到的DNA量，從表2可以看出，這種差異有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從樣本均數(shù)看，DNA檢測(cè)量多少為：棉線手套>布片>粗棉質(zhì)繩索>模擬門把手>細(xì)棉質(zhì)繩索>塑料繩索>玻璃片。圖1中可以明顯看出DNA檢測(cè)量的變化，同時(shí)，也清晰地展示了7種不同載體的DNA檢測(cè)量的變化范圍情況，由圖1可知，DNA檢測(cè)量較高的載體，其變化范圍較大，而DNA檢測(cè)量較低的載體，其DNA檢測(cè)量普遍較低，變化范圍相對(duì)較小。在模擬樣本檢材的制備時(shí)，選取了6名男性個(gè)體和2名女性個(gè)體，這8個(gè)不同無(wú)關(guān)個(gè)體在DNA檢測(cè)量上的不同有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其均值分布詳見(jiàn)圖2。從圖2可以看出，8名個(gè)體之間大體無(wú)明顯差異，根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)運(yùn)算，8名個(gè)體用One-WayANOVA兩兩之間相互比較有差異（F=5.479，P=1.096E-5），主要差異表現(xiàn)在個(gè)體5與其他7名個(gè)體之間，從樣本均數(shù)看，個(gè)體5的DNA檢測(cè)量大于其他個(gè)體，詳見(jiàn)表2。實(shí)驗(yàn)中，4種前處理方法進(jìn)行處理后的DNA檢測(cè)率不同。其中，使用直接剪取法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)率為100%，使用膠帶粘取法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)率為94.6%，使用真空吸附法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)率為94.6%，使用兩步擦拭法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)率為91.7%。不同載體使用不同的前處理方法進(jìn)行處理后進(jìn)行DNA提取，這4種前處理方法在處理相同載體時(shí)獲得的DNA檢測(cè)量并不相同，且在一些載體獲得的DNA檢測(cè)量上存在明顯差異，例如實(shí)驗(yàn)中，使用3種前處理方法處理布片，應(yīng)用One-WayANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（F=4.362，P=0.026），其統(tǒng)計(jì)學(xué)差異主要表現(xiàn)在使用直接剪取法與真空吸附法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量之間，從樣本均數(shù)看，使用直接剪取法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量明顯大于使用真空吸附法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量。在4種前處理方法處理其他載體時(shí)，部分載體在這些前處理方法之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但其均值卻有明顯不同，在棉線手套中，使用真空吸附法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量明顯較大；在布片中，使用直接剪取法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量明顯較大；在粗棉質(zhì)繩索中，3種前處理方法獲得的DNA檢測(cè)量均值大小均較接近，以使用膠帶粘取法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量較高；在細(xì)棉質(zhì)繩索中，使用直接剪取法和膠帶粘取法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量明顯高于使用真空吸附法前處理獲得的DNA檢測(cè)量；在模擬門把手中，使用真空吸附法和膠帶粘取法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量高于使用兩步擦拭法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量；在玻璃片中，3種前處理方法獲得的DNA檢測(cè)量均值大小均較接近，以使用真空吸附法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量較高；在塑料繩索中，4種前處理方法獲得的DNA檢測(cè)量均值無(wú)明顯差異，但以使用直接剪取法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量較高從總體來(lái)看，使用膠帶粘取法和真空吸附法進(jìn)行前處理時(shí)，其適用檢材的類型較多；以直接剪取法進(jìn)行前處理獲得的DNA量普遍較高；使用膠帶粘法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量數(shù)值普遍較均衡，且DNA量較高，離群值較少。詳見(jiàn)表3、圖3和圖4。2.2分型結(jié)果所有樣品經(jīng)過(guò)電泳獲得分型結(jié)果，DNA檢測(cè)率為69.3%，滲透性載體的檢測(cè)率為78.1%。其中，棉線手套的檢測(cè)率為83.3%，布片的檢測(cè)率為83.3%，粗棉質(zhì)繩索的檢測(cè)率為87.5%，細(xì)棉質(zhì)繩索的檢測(cè)率為58.3%；非滲透性載體的檢測(cè)率為58.8%，其中，模擬門把手的檢測(cè)率為70.8%，玻璃片的檢測(cè)率為45.8%，塑料繩索的檢測(cè)率為45.8%。滲透性載體的檢測(cè)率明顯高于非滲透性載體的檢測(cè)率。所有檢材中29%的樣品DNA獲得了完整分型圖譜。不同載體的DNA檢驗(yàn)效果不同，其中以滲透性檢材的DNA分型結(jié)果的平均等位基因數(shù)較高，非滲透性檢材的DNA分型結(jié)果的平均等位基因數(shù)較低，但由于同是微量接觸類檢材，其DNA量均較低，多數(shù)DNA無(wú)完整分型結(jié)果，7種載體的DNA檢測(cè)到的平均等位基因數(shù)無(wú)較明顯差異，詳見(jiàn)表4。實(shí)驗(yàn)選取的8個(gè)個(gè)體產(chǎn)生的分型結(jié)果各不相同，其平均等位基因數(shù)雖然不同，但在男女個(gè)體之間并無(wú)明顯差異，且分型結(jié)果與定量結(jié)果基本一致，定量結(jié)果較高的DNA分型結(jié)果較好，平均等位基因數(shù)較多，由于個(gè)體間分型等位基因數(shù)不同，所以平均等位基因數(shù)結(jié)果與定量結(jié)果稍微不同，但總體相一致，詳見(jiàn)圖5。由于檢材DNA量較低，分型結(jié)果等位基因數(shù)均較少，但4種前處理方法處理不同載體后的DNA檢驗(yàn)效果并不相同，例如布片，使用直接剪取法與膠帶粘取法進(jìn)行前處理獲得的DNA平均等位基因數(shù)明顯高于使用真空吸附法進(jìn)行前處理獲得的DNA平均等位基因數(shù)，詳見(jiàn)圖6。2.3放置不同時(shí)間段的實(shí)驗(yàn)結(jié)果棉線手套和模擬門把手放置不同時(shí)間段后，使用真空吸附法進(jìn)行前處理，然后進(jìn)行DNA提取、定量和擴(kuò)增。其定量結(jié)果顯示，DNA檢測(cè)量在360d內(nèi)，并未隨著時(shí)間推移而降低，其DNA量未發(fā)生明顯改變。棉線手套為滲透性載體，其DNA檢測(cè)量在5個(gè)不同個(gè)體之間隨著時(shí)間推移無(wú)明顯變化；模擬門把手為非滲透性載體，其DNA檢測(cè)量在5個(gè)不同個(gè)體之間隨著時(shí)間推移無(wú)明顯降低趨勢(shì)，詳見(jiàn)圖7和圖8。統(tǒng)計(jì)STR分型結(jié)果，其平均等位基因數(shù)在不同時(shí)間段無(wú)明顯減少趨勢(shì)，其分型圖無(wú)明顯差異，由于檢材制備時(shí)搓拉時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，DNA檢測(cè)量較多，均獲得完整DNA分型圖譜，見(jiàn)圖9和圖10。3討論本實(shí)驗(yàn)針對(duì)7種常見(jiàn)的微量接觸類檢材載體和4種常規(guī)前處理方法，對(duì)微量接觸類檢材進(jìn)行了系統(tǒng)研究和探索。從不同載體上DNA的檢測(cè)量有何不同、不同前處理方法對(duì)DNA檢測(cè)量和檢驗(yàn)效果有何影響，以及此類檢材在常溫封閉狀態(tài)下的最佳檢驗(yàn)時(shí)效等方面進(jìn)行了一系列研究。為了更便于本實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)研究，每份檢材的制備時(shí)間約為10s，比國(guó)際報(bào)道中的檢材制備時(shí)間（2～3s）略長(zhǎng)，所以實(shí)驗(yàn)中DNA的量高于國(guó)際同行的相關(guān)報(bào)道。在實(shí)際案件中，犯罪分子與受害人之間發(fā)生爭(zhēng)執(zhí)時(shí)，多為扯拉或拖拽等用力方式，所以本實(shí)驗(yàn)為真實(shí)模擬案件檢材性質(zhì)，采用了“用力搓拉”而非國(guó)際通用的“用力緊握”的處理方法。實(shí)驗(yàn)中，滲透性載體的DNA檢測(cè)量和檢驗(yàn)效果高于非滲透性載體的DNA檢測(cè)量和檢驗(yàn)效果，且其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)總體上，滲透性載體的DNA檢測(cè)率高于非滲透性載體的檢測(cè)率。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，針對(duì)不同載體，8個(gè)無(wú)關(guān)個(gè)體進(jìn)行同樣的檢材制備，從圖1和表1中可以看出，不同載體的DNA檢測(cè)量明顯不同，從樣本均數(shù)看，DNA檢測(cè)量為：棉線手套>布片>粗棉質(zhì)繩索>模擬門把手>細(xì)棉質(zhì)繩索>塑料繩索>玻璃片。從表2可以看出，這種在不同載體之間的DNA量的不同有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。檢材制備時(shí)間相同，人員均為8個(gè)無(wú)關(guān)個(gè)體，可以得出，不同載體在同樣條件下的皮膚接觸，其DNA檢測(cè)量存在差異，即不同載體殘留DNA的能力有差異。滲透性載體較易吸附和殘留DNA，非滲透性載體不易殘留DNA。實(shí)驗(yàn)選取了同樣質(zhì)地的粗細(xì)不同的兩種繩索，在同樣的實(shí)驗(yàn)個(gè)體和同樣的前處理方法下，粗細(xì)兩種繩索的DNA檢測(cè)量和檢驗(yàn)效果并不相同。二者獲得的DNA檢測(cè)量在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)明顯差異，但粗棉質(zhì)繩索的均值為5.41ng，細(xì)棉質(zhì)繩索的均值為3.71ng，從檢驗(yàn)效果來(lái)看，粗棉質(zhì)繩索的檢驗(yàn)效果高于細(xì)棉質(zhì)繩索的檢驗(yàn)效果。這可能是由于粗棉質(zhì)繩索與手部的接觸面積相對(duì)較大，更能在其表面殘留DNA。實(shí)驗(yàn)針對(duì)8名無(wú)關(guān)個(gè)體進(jìn)行檢材制備時(shí)，其中6名為男性個(gè)體，兩名為女性個(gè)體，在這8個(gè)個(gè)體中，其DNA檢測(cè)量和檢驗(yàn)效果有差異，其差異主要表現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)個(gè)體5和其他個(gè)體之間較明顯。8個(gè)個(gè)體年齡均在20-30歲之間，身高體重指數(shù)按亞洲地區(qū)標(biāo)準(zhǔn)均在正常范圍內(nèi)，身體體檢狀態(tài)均為健康，8個(gè)個(gè)體體征和健康狀態(tài)方面均無(wú)明顯差異，均無(wú)皮膚疾病，實(shí)驗(yàn)中多次對(duì)個(gè)體5進(jìn)行重復(fù)檢材制備和DNA檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)觀察到其DNA檢測(cè)量始終較高，此種現(xiàn)象尚待進(jìn)一步研究。針對(duì)同一種載體，4種前處理方法所獲得的DNA檢測(cè)量從統(tǒng)計(jì)學(xué)角度無(wú)明顯差異，但其均值和標(biāo)準(zhǔn)差卻直觀表明其差異，由于微量接觸類檢材的DNA檢測(cè)量普遍較低，從統(tǒng)計(jì)學(xué)角度比較數(shù)值，其差異性并不明顯，但從DNA檢測(cè)量的均值來(lái)看，不同的前處理方法用于不同檢材時(shí)，其DNA檢測(cè)量和檢驗(yàn)效果不同。圖4更直觀地表明了4種前處理方法獲得的DNA檢測(cè)量的均值的不同，實(shí)驗(yàn)中共有7種載體，其中4種載體為滲透性載體，3種為非滲透性載體。使用直接剪取法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量較高，使用直接剪取法進(jìn)行前處理的5種載體中，4種為滲透性載體；使用真空吸附法和膠帶粘取法進(jìn)行前處理的為全部7種載體；使用兩步擦拭法進(jìn)行前處理的3種載體均為非滲透性載體。滲透性載體的DNA檢測(cè)量普遍高于非滲透性載體，同樣，使用直接剪取法進(jìn)行前處理的基本都是滲透性載體，使用真空吸附法和膠帶粘取法進(jìn)行前處理的為全部載體，而使用兩步擦拭法進(jìn)行前處理均為非滲透性載體，其DNA檢測(cè)量均值則如圖4所示。由此可見(jiàn)，4種前處理方法在處理不同載體時(shí)，膠帶粘取法和真空吸附法普遍適用于各種類型的載體，且DNA檢測(cè)量在針對(duì)不同類型的載體時(shí)也較均衡。但在針對(duì)滲透性載體時(shí)，其二者獲得的DNA檢測(cè)量和檢驗(yàn)效果低于使用直接剪取法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量和檢驗(yàn)效果。在針對(duì)非滲透性載體時(shí)，其二者獲得的DNA檢測(cè)量和檢驗(yàn)效果高于使用兩步擦拭法進(jìn)行前處理獲得的DNA檢測(cè)量和檢驗(yàn)效果。微量接觸類檢材常溫干燥和封閉狀態(tài)下放置不同時(shí)間后，其DNA檢測(cè)量和檢驗(yàn)效果隨著時(shí)間推移（在360d內(nèi)）無(wú)明顯變化，無(wú)明顯降解趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)選擇了滲透性載體和非滲透性載體的兩種載體作為代表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其DNA檢測(cè)量和檢驗(yàn)效果在兩種載體之間無(wú)明顯差異和變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明干燥的微量接觸類載體在常溫干燥的環(huán)境下放置，其DNA在360d內(nèi)無(wú)明顯降解。放置不同時(shí)間段的檢材，其檢材制備時(shí)搓拉時(shí)間較長(zhǎng)，DNA檢測(cè)量和檢驗(yàn)效果較好，說(shuō)明微量接觸類檢材DNA的殘留與載體和皮膚的接觸時(shí)間長(zhǎng)短有明顯關(guān)系，其DNA檢測(cè)量與皮膚和載體接觸時(shí)間的具體關(guān)系尚待進(jìn)一步研究?？傊狙芯客ㄟ^(guò)針對(duì)微量接觸類檢材進(jìn)行一系列研究，從不同載體上DNA的檢出量和檢驗(yàn)效果的不同，不同前處理方法對(duì)微量接觸類檢材的DNA檢出量和檢驗(yàn)效果的影響，以及微量接觸類檢材的最佳檢驗(yàn)時(shí)效等角度出發(fā)對(duì)此類檢材進(jìn)行了系統(tǒng)探討。首先本實(shí)驗(yàn)明確了不同載體的DNA檢出量和檢驗(yàn)效果不同，滲透性載體的DNA檢測(cè)量高于非滲透性載體的DNA檢測(cè)量，不同的前處理方法在針對(duì)不同類型的載體時(shí)存在差異，微量接觸類檢材在常規(guī)條件下放置時(shí)，360d內(nèi)間其DNA檢測(cè)量和檢驗(yàn)效果無(wú)明顯變化。近年來(lái)，微量接觸類檢材占據(jù)了案件中檢材的主要部分，本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果將有助于指導(dǎo)針對(duì)微量接觸類檢材的檢驗(yàn)方法和處理辦法，為此類檢材的快速檢驗(yàn)提供新的途徑，為存放不同時(shí)間后的檢材的檢驗(yàn)的必要性提供了數(shù)據(jù)證明，為公安機(jī)構(gòu)和科[11]研院所針對(duì)此類檢材的檢驗(yàn)提供了可靠的數(shù)據(jù)支持和理論依據(jù)，提高了微量接觸類檢材的物證證明力，為案件偵破和科學(xué)研究提供了有力支持。參考文獻(xiàn)（References）：[1]WIEGAND 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