白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油提取工藝及抗失眠藥效學(xué)研究

薩礎(chǔ)拉，呼日樂巴根，阿拉坦敖日格樂，董 玉

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

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白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油提取工藝及抗失眠藥效學(xué)研究

薩礎(chǔ)拉，呼日樂巴根，阿拉坦敖日格樂，董 玉

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

目的：研究白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油的提取工藝，觀察其對(duì)小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用。方法：采用L9(34)正交表設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化提取條件，考察藥材粉碎粒度、提取時(shí)間、液料比對(duì)白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油得率的影響。觀察揮發(fā)油對(duì)小鼠自主活動(dòng)以及催眠劑量戊巴比妥鈉鎮(zhèn)靜催眠作用的影響。結(jié)果：根據(jù)極差分析可知，3種因素對(duì)白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油提取率的影響大小為粉碎粒度>提取時(shí)間>液料比。揮發(fā)油最佳提取工藝為粉碎粒度20目，提取4h，液料比為12倍。白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油可減少小鼠走動(dòng)時(shí)間及小鼠前肢上抬次數(shù)，縮短戊巴比妥所致小鼠入睡的潛伏時(shí)間，延長(zhǎng)睡眠持續(xù)時(shí)間。結(jié)論：采用水蒸氣提取法提取白豆蔻-白苣勝中的揮發(fā)油成分簡(jiǎn)便可行，適合工業(yè)化生產(chǎn)，所提取的白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油具有鎮(zhèn)靜催眠作用。

白豆蔻-白苣勝；揮發(fā)油；鎮(zhèn)靜；催眠；水蒸氣提取法

蘇格木勒-3湯是蒙醫(yī)臨床常用方劑，由白豆蔻 15g、白苣勝 10g、蓽茇 5g三味蒙藥組成，具有抑赫依的功效，臨床主治失眠[1]。白豆蔻為姜科植物白豆蔻AmomumkravanhPierreexGagnep和爪哇白豆蔻AmomumcompactumSoland.exMaton的果實(shí)，味辛、苦，性溫，可祛腎寒、鎮(zhèn)赫依、溫中消食，主治腎赫依病、失眠、消化不良等，收載于2010版《中華人民共和國藥典》[2]，其有效成分和質(zhì)控指標(biāo)性成分均為揮發(fā)油。白苣勝為菊科植物萵苣LactucasativaL.的種子，味微甘，性平，可清肺熱、消食開胃、抑赫依，主治肺熱咳嗽、失眠、消化不良等，有效成分為揮發(fā)油[3]。為研究蘇格木勒-3湯的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，并為該方的深入開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)，本研究對(duì)白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化并觀察其對(duì)小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與動(dòng)物

1.1 試藥

白豆蔻與白苣勝均購自當(dāng)?shù)厮幏?，?jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院圖門巴雅爾教授鑒定為真品。白豆蔻為姜科植物白豆蔻AmomumkravanhPierreexGagnep和爪哇白豆蔻AmomumcompactumSoland.exMaton的果實(shí)，其揮發(fā)油含量符合《中華人民共和國藥典》2010年版的相關(guān)要求。將藥材粉碎，分別過20、40、60目篩，備用。白苣勝為菊科植物萵苣LactucasativaL.的種子。阿普唑侖片(北京市燕京制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：020901，實(shí)驗(yàn)前采用蒸餾水配制成0.006mg/mL的混懸液)；生理鹽水；戊巴比妥(Sigma公司)。

1.2 儀器

揮發(fā)油測(cè)定器(符合2010年版中國藥典一部附錄XD揮發(fā)油測(cè)定器的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn))；98-1-B型電子調(diào)溫電熱套；T-200型電子天平；FW135型中草藥粉碎機(jī)；藥用篩。

1.3 動(dòng)物

ICR種雄性小鼠，體重18～20g，由內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證編號(hào)：SCXK(蒙)2002-0001。

2 方法與結(jié)果

2.1 白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油提取工藝研究

2.1.1 白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油提取方法 根據(jù)《中國藥典》2010版一部附錄XD，采用水蒸氣蒸餾法進(jìn)行揮發(fā)油的提取。首先將白豆蔻、白苣勝藥材粉碎過篩，分別精密稱取白豆蔻、白苣勝藥材粉末30g、20g，置于同一圓底燒瓶中，加入相應(yīng)倍數(shù)的水振搖混勻，浸泡，緩緩加熱至沸，并保持微沸至規(guī)定時(shí)間，后停止加熱，放置冷卻，接收揮發(fā)油，精密測(cè)定揮發(fā)油體積，計(jì)算揮發(fā)油得率。

2.1.2 單因素試驗(yàn) 以揮發(fā)油得率為考察指標(biāo)，采用單因素法考察提取時(shí)間、液料比對(duì)揮發(fā)油提取率的影響。

(1)提取時(shí)間對(duì)揮發(fā)油得率的影響 按照“2.1.1”項(xiàng)下方法提取揮發(fā)油，固定液料比(10倍)、藥材粒度(40目)，考察不同提取時(shí)間(2、10、20、30min、1、2、4、6、8、10h)對(duì)揮發(fā)油得率的影響，每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。結(jié)果見圖1。

由圖1可知，在2min至1h提取時(shí)間范圍內(nèi)，揮發(fā)油得率隨著提取時(shí)間的增加而迅速提高，但在1h之后揮發(fā)油得率沒有任何變化。

(2)液料比對(duì)揮發(fā)油得率的影響 按照“2.1.1”項(xiàng)下方法提取揮發(fā)油，固定提取時(shí)間(1h)、藥材粒度(40目)，考察不同液料比(6、8、10、12倍)對(duì)揮發(fā)油得率的影響，每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，得出液料比為12倍時(shí)，揮發(fā)油提取率最高，結(jié)果見圖2。

2.1.3 正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油提取工藝 以粉碎粒度(A)、提取時(shí)間(B)、液料比(C)為實(shí)驗(yàn)因素，以揮發(fā)油得率為考察指標(biāo)，進(jìn)行L9(34)正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，因素水平見表1。精密稱取白豆蔻、白苣勝藥材粉末15g、10g，按照“2.1.1”項(xiàng)下方法提取揮發(fā)油，并計(jì)算提取揮發(fā)油得率，結(jié)果見表1、表2。

圖1 不同提取時(shí)間對(duì)揮發(fā)油得率的影響

圖2 不同液料比對(duì)揮發(fā)油得率的影響

水平因素粉碎粒度(A)/目提取時(shí)間(B)/h液料比(C)/倍1200.58240210360412

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

由表2極差分析可知，3種因素對(duì)白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油提取率的影響大小為A>B>C，即粉碎粒度>提取時(shí)間>液料比；最佳揮發(fā)油提取工藝為A1B3C3，即粉碎粒度為20目，提取時(shí)間為4h，液料比為12倍。

2.1.4 單因素驗(yàn)證試驗(yàn) 為結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果，精密稱取白豆蔻、白苣勝藥材粉末30g、20g，采用正交試驗(yàn)最佳工藝提取揮發(fā)油，計(jì)算揮發(fā)油得率，重復(fù)3次，平均得率為3.4%，RSD<3%。

2.2 白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油治療失眠的藥效學(xué)研究[4]

2.2.1 白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響 將60只小鼠隨機(jī)分為空白組、蘇格木勒-3組、陽性對(duì)照組、白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油高劑量組、白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油低劑量組5組，灌胃給藥，1次/日，連續(xù)給藥5天。給藥前將小鼠投入活動(dòng)箱中適應(yīng)5min，給藥后60min記錄2min內(nèi)小鼠的走動(dòng)時(shí)間和前肢向上抬舉次數(shù)，結(jié)果見表3。與空白組比較，各劑量白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油組小鼠走動(dòng)時(shí)間及前肢上抬次數(shù)均顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

組別劑量走動(dòng)時(shí)間(s)前肢向上抬(次)空白組-111.54±12.2940.50±8.21阿普唑侖組0.12mg/kg77.73±24.37**22.87±6.70**白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油高劑量組0.5mL/kg84.44±20.86**18.56±6.67**白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油低劑量組0.3mL/kg83.80±20.30**17.70±4.88**蘇格木勒-3湯組2g/kg69.00±28.04**24.64±7.71**

注：與空白組比較**P<0.01。

2.2.2 白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油對(duì)催眠劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠時(shí)間的影響 動(dòng)物分組及處理同上。末次給藥1h后，每只鼠腹腔注射戊巴比妥鈉50mg/kg，觀察記錄入睡潛伏期(翻正反射消失時(shí)間)和睡眠持續(xù)時(shí)間(翻正反射消失至恢復(fù)的時(shí)間)，結(jié)果見表4。與空白組比較，各劑量白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油均可縮短小鼠入睡潛伏時(shí)間，延長(zhǎng)小鼠睡眠持續(xù)時(shí)間。

組別劑量入睡潛伏時(shí)間(min)睡眠持續(xù)時(shí)間(min)空白組-5.38±0.5212.67±1.75阿普唑侖組0.12mg/kg4.53±1.30*20.27±6.24**白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油高劑量組0.5mL/kg4.00±0.58*17.43±5.26*白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油低劑量組0.3mL/kg3.50±1.76*15.67±2.94*蘇格木勒-3湯組2g/kg4.31±1.03*18.79±7.93*

注：與空白組比較*P<0.05，**P<0.01。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用水蒸氣蒸餾法對(duì)白豆蔻-白苣勝的揮發(fā)油成分進(jìn)行了提取。水蒸氣蒸餾法是指將含有揮發(fā)性成分的藥材與水共蒸餾，使揮發(fā)性成分隨水蒸氣一并餾出，后經(jīng)冷凝分離的浸提方法。該法適用于具有揮發(fā)性、能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞、在水中穩(wěn)定且難溶或不溶于水的藥材成分的浸提。該法穩(wěn)定可靠、操作簡(jiǎn)單，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。在白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油的提取過程中，白豆蔻揮發(fā)油的含量較高，而白苣勝揮發(fā)油的含量較低，且在混合提取中，白苣勝會(huì)降低白豆蔻揮發(fā)油的提取量。未來本課題組將采用GC-MS法研究其有效成分及含量相互配伍后的變化情況。

采用水蒸氣法提取白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油時(shí)，提取量主要受藥材粉碎粒度及提取時(shí)間的影響。藥材粉碎粒度為20目時(shí)，白豆蔻-白苣勝的揮發(fā)油得率最高，且隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油得率不再增加，趨于穩(wěn)態(tài)。

本研究結(jié)果表明，白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油的最佳提取工藝為粉碎粒度20目，提取4h，液料比為12倍。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油可減少小鼠的走動(dòng)時(shí)間及小鼠前肢上抬次數(shù)，縮短戊巴比妥所致小鼠入睡的潛伏時(shí)間，延長(zhǎng)睡眠持續(xù)時(shí)間。采用水蒸氣提取法提取白豆蔻-白苣勝中的揮發(fā)油成分簡(jiǎn)便可行，適合工業(yè)化生產(chǎn)，所提取的白豆蔻-白苣勝揮發(fā)油具有鎮(zhèn)靜催眠作用。

[1] 內(nèi)蒙古自治區(qū)衛(wèi)生廳.內(nèi)蒙古蒙成藥標(biāo)準(zhǔn)[M].赤峰:內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社,1984:56.

[2] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[M].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:156.

[3] 蒙古學(xué)百科全書編輯委員會(huì)《醫(yī)學(xué)卷》編輯委員會(huì).蒙古學(xué)百科全書醫(yī)學(xué)卷[M].呼和浩特:內(nèi)蒙古人民出版社,2002:196.

[4] 曹欣冬,范吉平,朱陵群,等.神安湯治療失眠的藥效學(xué)研究[J].中藥藥理與臨床,2005,21(5):53.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Extraction Process of the Essential Oil from Baidoukou-Baijusheng and Pharmacodynamics Research for the Treatment of Insomnia

Sa Chula,Hurilebagen,Alatengorgol,Dong Yu

(Inner Mongolia Medical University,Hohhot 010110,China)

Objective:To observe the pharmacodynamics for the treatment of insomnia Baidoukou-Baijusheng essential oil and To study the Extraction process of the essential oil from Baidoukou-Baijusheng.Methods:To observe the influence of autonomic activities and sleeping time of baidoukou-baijusheng essential oil at Hypnotic dose of sodium pentobarbital in mice. Using the L9(34) orthogonal experimental design，the extraction conditions were optimized. To investigate the influence of baidoukou-baijusheng essential oil receiving rate of the fineness of pulverization,extraction time and Liquid than.Results:The baidoukou-baijusheng essential oil were decreased the moving time and raise forelimbs,cut downed the latent time at Hypnotic dose of sodium pentobarbital in mice,extended the sleeping time.Based on the range analysis,The influence of three factor of the baidoukou-baijusheng essential oil receiving rate were the fineness of pulverization>extraction time>Liquid than.The Best Group of Extraction process of the baidoukou-baijusheng essential oil was 20 sieve mesh. The extraction time was 4 time. The Liquid than was 12 times. Conclusion:The baidoukou-baijusheng essential oil has a sedative and hypnotic effects. The extraction process of the essential oil from Baidoukou-Baijusheng was feasible and simple. Suitable for industrial production.

Baidoukou-Baijusheng;Essential Oil;Sedative;Hypnotic;Steam Extraction

2014-03-10

2013年內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)青年創(chuàng)新基金項(xiàng)目(YKD2013QNCX016)；內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)博士啟動(dòng)基金項(xiàng)目(YKD2013QNCX016)；2014年內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)“英才培育”項(xiàng)目

薩礎(chǔ)拉(1984-)，女，博士，內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)講師，研究方向?yàn)槊?中)藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)及新藥創(chuàng)制。E-mail:haisachula@126.com

R284.2;R285.5

A

1673-2197(2015)14-0008-03

10.11954/ytctyy.201514004