無(wú)梗五加果實(shí)抗疲勞活性研究

管美玉，劉玉強(qiáng)，才 謙，劉禹彤，曾申磊

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,遼寧 大連 116600)

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無(wú)梗五加果實(shí)抗疲勞活性研究

管美玉，劉玉強(qiáng)，才 謙*，劉禹彤，曾申磊

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,遼寧 大連 116600)

目的：研究無(wú)梗五加果實(shí)各提取物的抗疲勞作用，為無(wú)梗五加的廣泛應(yīng)用提供依據(jù)。方法：采用小鼠力竭游泳實(shí)驗(yàn)，考察連續(xù)灌胃無(wú)梗五加果實(shí)提取物2周對(duì)小鼠抗疲勞能力的影響，并對(duì)給藥后小鼠體內(nèi)血乳酸、血尿素氮、肝糖原和肌糖原的變化進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：無(wú)梗五加果實(shí)提取物能夠延長(zhǎng)小鼠力竭游泳時(shí)間、降低小鼠運(yùn)動(dòng)后的乳酸堆積和血尿氮的生成,增加肝糖原、肌糖原的儲(chǔ)備量。結(jié)論：無(wú)梗五加果實(shí)具有抗疲勞作用，尤以無(wú)梗五加果實(shí)醇提物抗疲勞作用最顯著。

抗疲勞；無(wú)梗五加果實(shí)；血乳酸；血尿素氮；肝糖原；肌糖原

無(wú)梗五加[Acanthopanaxsessiliflorus(Ruqr.et Maxim)Seem.]又名短梗五加、烏鴉子，主要分布于東北、華北、陜西等地，與刺五加同為五加科(Araliaceae)五加屬植物，刺五加具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗疲勞、抗衰老功效[1]。并且同科屬植物藥理作用有很多相似之處，馮穎等[2]曾在研究中提到無(wú)梗五加果實(shí)多糖具有抗疲勞作用，但對(duì)無(wú)梗五加果實(shí)醇提物抗疲勞作用缺乏研究，本研究采用小鼠力竭游泳實(shí)驗(yàn)分別對(duì)無(wú)梗五加果實(shí)乙醇提取物和2種不同提取方法所得到的多糖的抗疲勞活性進(jìn)行了研究，初步明確無(wú)梗五加果實(shí)抗疲勞作用及其作用機(jī)理,為無(wú)梗五加果實(shí)抗疲勞的藥理作用的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

1 儀器和試藥

1.1 試藥

無(wú)梗五加果實(shí)購(gòu)自遼寧省丹東農(nóng)業(yè)科學(xué)院，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物教研室王冰教授鑒定為Acanthopanaxsessiliflorus(Ruqr.et Maxim)Seem.的干燥果實(shí)。1，6-二磷酸果糖購(gòu)自大連美侖生物技術(shù)有限公司(批號(hào)：20130921)。

1.2 動(dòng)物

昆明種小鼠，SPF級(jí)，體重18～22g，雄性，由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK(遼)2010-0001 。

1.3 儀器和試劑

RE-52C型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；酶標(biāo)儀(DNM9602G型號(hào)，北京普朗公司)；萬(wàn)分之一克電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公)；低溫冷凍離心機(jī)(TGL-16，大連松譜瑞特貿(mào)易公司)冷凍干燥機(jī)(LGJ-10壓蓋型，北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)；101型電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津泰斯特儀器有限公司)。尿素氮試劑盒購(gòu)自上海科興商貿(mào)有限公司(批號(hào)：201409)；血乳酸試劑盒購(gòu)自上海科興商貿(mào)有限公司(批號(hào)：201409)；肝糖原試劑盒購(gòu)自上?？婆d商貿(mào)有限公司(批號(hào)：201409)；肌糖原試劑盒購(gòu)自上?？婆d商貿(mào)有限公司(批號(hào)：201409)。

2 方法

2.1 無(wú)梗五加果實(shí)各提取物制備

2.1.1 乙醇提取物制備 干燥的無(wú)梗五加果實(shí)粉末，加80%乙醇回流提取3次，每次2h，過(guò)濾，合并提取液，濃縮至1.25g/mL,1mL無(wú)梗五加果實(shí)乙醇提取液相當(dāng)于1.25g生藥。

2.1.2 多糖1制備 醇提后的果實(shí)殘?jiān)匀涣栏珊?，?0倍的水進(jìn)行回流提取3次，每次2h，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至250mL，加入一定量95%乙醇使含醇量達(dá)到80%，靜置放置24h，除去上層溶液，留下層多糖沉淀，然后將下層沉淀濃縮一定程度后進(jìn)行冷凍干燥，得棕色的無(wú)梗五加多糖1，1g多糖1相當(dāng)于14.58g生藥。

2.1.3 多糖2制備 干燥的無(wú)梗五加果實(shí)粉末，以10倍量水進(jìn)行回流提取3次，每次2h，合并提取液，濾過(guò)、減壓濃縮至600mL,加入一定量95%乙醇使含醇量達(dá)到80%，靜置放置24h，除去上層溶液留下層多糖沉淀，然后將下層沉淀濃縮一定程度后進(jìn)行冷凍干燥，得棕色的無(wú)梗五加多糖2，1g多糖2相當(dāng)于11.90g生藥。

2.2 動(dòng)物分組與給藥

將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為8組，每組10只，分別為空白組(蒸餾水)，陽(yáng)性對(duì)照組(1,6-二磷酸果糖0.5g/(mL·d))，無(wú)梗五加果實(shí)醇提物高劑量組(0.58g/(mL·d))、無(wú)梗五加果實(shí)醇提物低劑量組(0.29g/(mL·d))、多糖1高劑量組(800mg/(kg·d))、多糖1低劑量組(400mg/(kg·d))、多糖2高劑量組(980mg/(kg·d))、多糖2低劑量組(490mg/(kg·d))，給藥體積為0.2mL/(10g·d)，給藥方式均為灌胃給藥，并且保證給藥各組生藥量相等(陽(yáng)性組除外)，每日給藥1次，連續(xù)給藥2周。

2.3 測(cè)定指標(biāo)

2.3.1 力竭游泳實(shí)驗(yàn)[3-4]末次給藥30min后，將小鼠尾巴系上一塊質(zhì)量為2g的鉛塊，將小鼠置于水深30cm的游泳箱中，水溫控制在(25±2)℃左右，強(qiáng)迫小鼠游泳直到力竭，以小鼠全身沒(méi)于水面以下，8s內(nèi)不能浮出水面即為力竭，記錄開(kāi)始游泳至力竭的時(shí)間，為小鼠力竭游泳時(shí)間，計(jì)算給藥后各組小鼠平均游泳時(shí)間。

2.3.2 血乳酸(LAC)和血清尿素氮(BUN)的含量測(cè)定 末次給藥30min后，將小鼠尾巴系上一塊質(zhì)量為2g的鉛塊，將小鼠置于水深30cm的游泳箱中，水溫控制在(25±2)℃左右，游泳30min，出水休息30min 后立即摘眼球取血，4℃下靜置1h后，5 000r·min-1離心15min，取血清，按ELISA試劑盒要求測(cè)定小鼠給藥后血清BUN、LAC的含量。

2.3.3 肝糖原和肌糖原的含量測(cè)定[5]同“2.3.2”操作，出水休息30min后立即脫頸椎處死，取肝臟和大腿肌肉并用生理鹽水清洗后，用濾紙吸干，分別稱(chēng)取小鼠肝臟和大腿肌肉約60mg，加入一定量的PBS(PH 7.4)，用勻漿器將標(biāo)本勻漿化，離心20min左右(2 000～3 000r·min-1)。仔細(xì)收集上清液，按照ELISA試劑盒要求測(cè)定小鼠給藥后肝糖原、肌糖原的含量。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 無(wú)梗五加果實(shí)各提取物對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間的影響

與空白組比較無(wú)梗五加果實(shí)醇提物、多糖1、多糖2、陽(yáng)性藥均能延長(zhǎng)小鼠力竭游泳時(shí)間，其中醇提物高劑量組、多糖2高低劑量組、陽(yáng)性藥組能顯著延長(zhǎng)小鼠力竭游泳時(shí)間，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，詳見(jiàn)表1。

表1 無(wú)梗五加果實(shí)各提取物對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間的影響

注：與空白組比較，*P<0.05。

3.2 無(wú)梗五加果實(shí)各提取物對(duì)小鼠體內(nèi)血乳酸和血尿素氮水平的影響

與空白組比較無(wú)梗五加果實(shí)醇提物高低劑量組、多糖1高低劑量組、多糖2高低劑量組、陽(yáng)性藥組均能顯著降低小鼠運(yùn)動(dòng)后乳酸的積累量和降低小鼠運(yùn)動(dòng)后血尿素氮的生成，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，詳見(jiàn)表2。

3.3 無(wú)梗五加果實(shí)各提取物對(duì)小鼠體內(nèi)肝糖原、肌糖原的影響

與空白組比較，無(wú)梗五加果實(shí)醇提物高低劑量組、多糖1高低劑量組、多糖2高低劑量組、陽(yáng)性藥組均能增加小鼠運(yùn)動(dòng)后體內(nèi)肝糖原、肌糖原的儲(chǔ)備量。其中無(wú)梗五加果實(shí)醇提物高劑量組、無(wú)梗五加果實(shí)多糖2高劑量組及陽(yáng)性藥組能極顯著同時(shí)增加小鼠運(yùn)動(dòng)后體內(nèi)肝糖原、肌糖原的儲(chǔ)備量(P<0.01)，具體數(shù)值見(jiàn)表3。

表2 無(wú)梗五加果實(shí)各提取物對(duì)血乳酸和血尿素氮的影響

注：與空白組比較，*P<0.05。

表3 無(wú)梗五加果實(shí)提取物對(duì)肝糖原、肌糖原的影響

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01。

4 討論

疲勞是由運(yùn)動(dòng)引起的機(jī)體一系列生化指標(biāo)改變而導(dǎo)致的肌肉力量的降低。傳統(tǒng)對(duì)運(yùn)動(dòng)疲勞產(chǎn)生機(jī)制的認(rèn)識(shí)主要在于能量耗竭學(xué)說(shuō)、代謝產(chǎn)物堆積學(xué)說(shuō)、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)失調(diào)學(xué)說(shuō)、機(jī)體突變理論、神經(jīng)疲勞學(xué)說(shuō)和自由基學(xué)說(shuō)[6],因此對(duì)疲勞的評(píng)價(jià)方法應(yīng)以耐力實(shí)驗(yàn)和生化指標(biāo)為主。耐力實(shí)驗(yàn)主要包括運(yùn)動(dòng)跑臺(tái)、爬桿和游泳[7]。生化指標(biāo)包括血乳酸、血尿素氮、肝糖原、肌糖原等。根據(jù)1996年頒布的《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢測(cè)方法》,如果14項(xiàng)或1項(xiàng)以上的耐力運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)(負(fù)重游泳和爬桿試驗(yàn))和2項(xiàng)或2項(xiàng)以上的生化指標(biāo)(血乳酸、血清尿素氮、肝糖原、肌糖原等)結(jié)果呈陽(yáng)性,就可以得出受試藥物具有抗疲勞活性。

本實(shí)驗(yàn)主要考察的是負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)、血乳酸、血尿素氮、肝糖原、肌糖原5項(xiàng)指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)，無(wú)梗五加果實(shí)各提取物能延長(zhǎng)小鼠力竭游泳時(shí)間、降低小鼠運(yùn)動(dòng)后的乳酸堆積和血尿氮的生成、增加肝糖原、肌糖原的儲(chǔ)備量，其中以無(wú)梗五加果實(shí)醇提物抗疲勞作用最顯著。但對(duì)于抗疲勞的機(jī)制尚不明確，有待進(jìn)一步深入研究。

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(責(zé)任編輯：宋勇剛)

Study on the Anti-fatigue Effect of Acanthopanax Sessiliflorus Fruits

Guan Meiyu,Liu Yuqiang,Cai Qian*,Liu Yutong,Zeng Shenlei

(College of Pharmacy,Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Dalian 116600，China)

Objective:To study on the anti-fatigue effect of the extract of Acanthopanax sessiliflorus fruits,to provide the basis for the wide application of Acanthopanax sessiliflorus.Methods:Exhaustive swimming test were employed to evaluate anti-fatigue effect of extracts of Acanthopanax sessiliflorus fruits in mice,extract orally administraded for two weekends consecutively.Further,lactic acid level and urea nitrogen level were examined,and hepatic gly-Cogen and muscle glycogen level after swimming were determined.Results:The extract of Acanthopanax sessiliflorus fruits extended swimming time,lactic acid level and urea nitrogen level were decrease-d,hepatic glycogen and muscle glycogen level were increased after Treatment.Conclusion:Acanthopanax sessiliflorus fruits have obvious anti-fatigue effects.the alcohol extract the of Acanthopanax sessiliflorus fruits showed more remarkable anti- fatigue.

Anti-fatigue;Acanthopanax Sessiliflorus Fruits; Blood Lactic Acid;Blood Urea Nitrogen;Hepatic Glycogen;Muscle Glycogen

2015-04-17

管美玉(1989-)，女，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)。

才謙(1972-)，女，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)教授，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)和中藥炮制學(xué)。E-mail：caiqianmail@sina.com

R285.5

A

1673-2197(2015)19-0010-03

10.11954/ytctyy.201519005