石榴皮炮制前后總鞣質(zhì)及鞣花酸、安石榴苷含量變化研究

崔園園,陳志敏,張 美,熊 瑞,李文兵,胡昌江*

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué),四川 成都 611137；2.四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川 成都 610081)

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石榴皮炮制前后總鞣質(zhì)及鞣花酸、安石榴苷含量變化研究

崔園園1,陳志敏1,張 美1,熊 瑞1,李文兵2,胡昌江1*

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué),四川 成都 611137；2.四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川 成都 610081)

目的：比較石榴皮炮制前后總鞣質(zhì)、鞣花酸、安石榴苷的含量變化，擬闡明炮制對(duì)石榴皮中鞣質(zhì)類成分的影響。方法：采用紫外可見分光光度計(jì)法測(cè)定鞣質(zhì)的含量，高效液相色譜法測(cè)定鞣花酸、安石榴苷的含量，對(duì)石榴皮生品、炒黃品和炒炭品進(jìn)行比較。結(jié)果：不同批次石榴皮炮制前后鞣質(zhì)的平均含量分別為：生品15.03%、炒黃品17.54%、炒炭品11.07%；鞣花酸的平均含量分別為：生品4.33%、炒黃品4.20%、炒炭品4.48%；安石榴苷的平均含量分別為：生品38.76%、炒黃品50.23%、炒炭品16.45%。結(jié)論：炮制對(duì)石榴皮中鞣質(zhì)類成分的含量有顯著影響。

石榴皮；炮制；鞣質(zhì)；鞣花酸；安石榴苷

石榴皮為石榴科植物石榴PunicagranammL.的干燥果皮，其性溫，味酸、澀，具有澀腸止瀉、止血、驅(qū)蟲等作用，在民族醫(yī)藥中得到廣泛使用：石榴皮生品長于驅(qū)蟲、澀精、止帶，多用于治療蟲積腹痛、滑精、白帶、脫肛、疥癬[1]；炒后收澀作用增強(qiáng)[2]，多用于指腸風(fēng)下血。

石榴皮中鞣質(zhì)類成分占總重量的10%～20%[3]，是石榴皮的重要組成成分，是影響石榴皮質(zhì)量的主要因素。國內(nèi)外研究[4-6]結(jié)果表明，安石榴苷、鞣花酸是石榴皮鞣質(zhì)類成分的主體，其含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于沒食子酸等其他鞣質(zhì)成分，可用來評(píng)價(jià)石榴皮的質(zhì)量。而炮制后以上兩種成分有何變化、對(duì)石榴皮功效、質(zhì)量有無影響目前尚無報(bào)道。為此，本實(shí)驗(yàn)以總鞣質(zhì)、安石榴苷和鞣花酸為指標(biāo)，建立含量測(cè)定方法，擬作為石榴皮飲片炮制后評(píng)價(jià)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AT型高效液相色譜儀(日本島津)，TU-1950型紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)，KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，BP211D型電子天平，高速粉碎機(jī)(永康市溪岸五金藥具廠)。

1.2 藥材與試劑

3個(gè)批次的石榴皮生品、炒黃品和炒炭品購自四川國強(qiáng)中藥飲片有限公司，批號(hào)分別為141101、141102、141103，編號(hào)1、2、3。沒食子酸(批號(hào) TOOP-Z871)，鞣花酸(批號(hào)14668)，安石榴苷(批號(hào) P0023)對(duì)照品，甲醇(色譜純)，水(純凈水)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 鞣質(zhì)含量測(cè)定

按照2010年版中國藥典一部石榴皮項(xiàng)下鞣質(zhì)含量測(cè)定法測(cè)定，結(jié)果見表1。

2.2 鞣花酸、安石榴苷含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 分別精密量取鞣花酸、安石榴苷對(duì)照品1.07mg、5.40mg，置5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

表1 石榴皮不同炮制品鞣質(zhì)類成分的含量測(cè)定 (%)

2.2.2 供試品溶液制備 分別精密稱定各樣品粉末(過3號(hào)篩)約0.2g，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50mL蓋塞稱重，超聲30min(250W,25kHz)，放冷，再次稱重，補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3 色譜條件 Phenomenex C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相甲醇-0.4%磷酸梯度洗脫，如表2所示，流速1.0mL·min-1，檢測(cè)器檢測(cè)波長270nm，柱溫25℃。

表2 流動(dòng)相梯度洗脫程序 (%)

2.2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液和供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，結(jié)果對(duì)照品色譜峰與其他峰均能達(dá)到基線分離，供試品色譜峰的保留時(shí)間和峰形與對(duì)照品一致，表明此分析條件可行。結(jié)果見圖1。

A．安石榴苷和鞣花酸混合對(duì)照品；B．供試品；1.α-安石榴苷；2.β-安石榴苷；3.鞣花酸

圖1 混合對(duì)照品和供試品溶液的液相色譜

2.2.5 線性關(guān)系考察 取上述混合對(duì)照品溶液適量，過0.45μm微孔濾膜，分別進(jìn)樣4、6、8、10、12、14、16μL，按上述條件進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定各色譜峰的峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。鞣花酸：Y=393 731x+431 721(r=0.999 4)；安石榴苷：Y=14 544x+7 415.5(r=0.999 5)和Y=18 836x+38 867(r=0.999 5)。結(jié)果表明鞣花酸、安石榴苷分別在0.856～3.424μg、4.32～17.28μg線性關(guān)系良好。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，按色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量為10μL，計(jì)算得RSD分別為0.99%、1.19%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取石榴皮生品樣品，按照供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量10μL，計(jì)算得RSD分別為1.34%、1.91%，表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取石榴皮生品0.2g，精密稱取5份，按照供試品溶液的制備方法制備，分別按色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10μL，計(jì)算得RSD分別為1.00%、1.05%。表明本方法的重復(fù)性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取石榴皮生品樣品5份，各20mg，精密稱定，分別精密加入混合對(duì)照品鞣花酸0.963mg,安石榴苷7.960mg，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備，按含量測(cè)定方法測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表3、表4。

2.2.10 樣品含量測(cè)定 取3批石榴皮不同炮制品樣品，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件進(jìn)樣10μL測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果見表1。由表1可見，石榴皮不同炮制品中鞣質(zhì)和安石榴苷的含量顯著不同，炒黃品中鞣質(zhì)、鞣花酸和安石榴苷的總百分含量較炒炭品高，說明加熱炮制對(duì)石榴皮中鞣質(zhì)類成分含量有顯著影響。

3 結(jié)論

中國藥典規(guī)定石榴皮中所含鞣質(zhì)不得低于10.0%[7]。本試驗(yàn)所得：石榴皮3種炮制規(guī)格飲片中鞣質(zhì)的含量都達(dá)到藥典要求，且炒炭品中鞣質(zhì)含量降低，鞣花酸含量升高。這與文獻(xiàn)[8-9]報(bào)道的在加熱炮制過程中，石榴皮可水解鞣質(zhì)的苷鍵或酯鍵斷裂，分解產(chǎn)生游離的鞣花酸等成分的試驗(yàn)結(jié)果相吻合。中藥炒炭主要發(fā)揮止血的作用，傳統(tǒng)認(rèn)為：鞣質(zhì)是“炭藥止血”的物質(zhì)基礎(chǔ)，鞣質(zhì)增加則止血作用增強(qiáng)；有研究[10]表明鞣花酸具有凝血作用，是一種有效的凝血?jiǎng)?，且小分子的鞣花酸更有利于人體吸收。石榴皮炒炭后止血作用增強(qiáng)是鞣質(zhì)和鞣花酸等成分共同作用的結(jié)果，但石榴皮炭炮制加工到何種程度時(shí)止血作用最強(qiáng)還有待研究。

表3 鞣花酸加樣回收率 (mg)

表4 安石榴苷加樣回收率 (mg)

大量現(xiàn)代藥理研究表明石榴皮鞣質(zhì)類成分可有效預(yù)防和治療心腦血管疾病，在抗菌、抗病毒，治療腫瘤、胃腸道疾病，調(diào)節(jié)免疫等方面具有顯著效果[11]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，以總鞣質(zhì)、安石榴苷和鞣花酸為指標(biāo)，石榴皮炒黃品中鞣質(zhì)類成分含量較炒炭品高。而兩種炮制品在主治、功效上有何差異，還需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。本實(shí)驗(yàn)建立同時(shí)測(cè)定石榴皮中安石榴苷和鞣花酸含量的高效液相色譜方法，靈敏度高，分離度好，測(cè)定迅速，結(jié)果準(zhǔn)確，為石榴皮飲片的炮制和質(zhì)量控制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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(責(zé)任編輯：余 婷)

Study on the Variation in Content of Tannins 、Ellagic acid and Punicalagin in Granatum Before and After Processing

Cui Yuanyuan,Hu Changjiang,Chen Zhimin1,Zhang Mei1,Xiong Rui2,Wen Jianxia1*

(Chengdu University of Chinese Medicine,Chengdu 611137,China)

Objective:to compare the content changes of Granatum before and after processing of the tannins,ellagic acids,punicalagins,intends to clarify the influence of processing on Granatum in tannins chemical composition. Methods:UV method for determining the content of tannins,HPLC method for determining the content of ellagic acid,punicalagins,to compare the raw materials for Granatum,the fried yellow goods and the fried carbon products. Results:The average content of tannins in different batches of Granatum before and after processing are as foiiows:Raw product 15.03%,Fried yellow product 17.54%,Fried carbon products 11.07%;The average content of ellagic acids:Raw product 4.33%,Fried yellow product 4.20%,Fried carbon products 4.48%;The average content of punicalagins:Raw product 38.76%,Fried yellow product 50.23%,Fried carbon products 16.45%。Conclusion:there is a significant effect of processing on the content of tannins compounds in Granatum.

Granatum;Processing;Tannin;Ellagic Acid;Punicalagin

2015-05-30

崔園園(1991-)，成都中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幣谥婆c制劑。

胡昌江(1952-)，成都中醫(yī)藥大學(xué)教授、博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幣谥茖W(xué)。E-mail：hhccjj@hotmail.com

R284

A

1673-2197(2015)21-0038-03

10.11954/ytctyy.201521016