基于生化指標的小鼠高尿酸血癥模型考察

田騰躍，包永睿，孟憲生*，王 帥，老驕陽

(1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600；2.遼寧省組分中藥工程技術(shù)研究中心，

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基于生化指標的小鼠高尿酸血癥模型考察

田騰躍1,2,3，包永睿1,2,3，孟憲生1,2,3*，王 帥1,2,3，老驕陽1,2,3

(1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600；2.遼寧省組分中藥工程技術(shù)研究中心，

遼寧 大連 116600；3.遼寧省現(xiàn)代中藥研究工程實驗室，遼寧 大連 116600)

目的：建立小鼠高尿酸血癥模型。方法：采用氧嗪酸鉀灌胃給藥的方式，分別考察給藥劑量為150、300、450、600、750、900、1 050mg/(kg·d)，給藥時間為1、3、5、7、9、11、13天時對小鼠高尿酸血癥模型的影響。運用半自動生化分析儀檢測小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量，通過統(tǒng)計分析，確定小鼠高尿酸血癥模型的最佳給藥劑量及給藥時間。結(jié)果：給藥劑量為750mg/(kg·d) 、給藥時間為7天時，小鼠體內(nèi)尿酸、尿素、肌酐含量與空白組比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，表明小鼠高尿酸血癥模型造模成功。結(jié)論：小鼠高尿酸血癥模型的最佳給藥劑量為750mg/(kg·d)，最佳給藥時間為7天。

高尿酸血癥模型；生化指標；給藥劑量；給藥時間

高尿酸血癥是機體長期嘌呤代謝異?；蚰蛩崤判箿p少所引起的一類代謝性疾病[1]。近年來，隨著人們生活水平的提高，高尿酸血癥的發(fā)病率也逐年上升[2-3]，且與冠心病、糖尿病、高血壓等疾病的發(fā)生關(guān)系密切[4-6]。因此，建立高尿酸血癥動物模型對于該類疾病的研究具有重要意義。目前關(guān)于高尿酸血癥模型的研究逐漸增多[7-11]，但仍不夠深入。本實驗采用氧嗪酸鉀建立小鼠高尿酸血癥模型，以生化指標為考察依據(jù)，研究小鼠高尿酸血癥模型的最優(yōu)建立方法。氧嗪酸鉀屬于三氮雜苯類化合物，可競爭性地與尿酸酶結(jié)合，抑制尿酸酶活性，從而使體內(nèi)尿酸含量增加，以達到建立高尿酸血癥動物模型的目的[12]。本實驗對氧嗪酸鉀所致小鼠高尿酸血癥模型的給藥劑量及時間進行考察，為高尿酸血癥的研究提供理想模型。

1 材料與試劑

1.1 儀器

GRT-3000系列半制動生化分析儀(濟南格利特科技有限公司)；HSS型電子恒溫水浴鍋(上海市博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)。

1.2 試藥

氧嗪酸鉀(Damas-beta公司，批號：P1050992)；尿酸(UA)測定試劑盒(長春匯力生物技術(shù)有限公司，批號：2014028)；尿素(BUN)測定試劑盒(長春匯力生物技術(shù)有限公司，批號：2014007)；肌酐(Cr)測定試劑盒(長春匯力生物技術(shù)有限公司，批號：2014050)。

1.3 動物

昆明種雄性小鼠128只，SPF級，體重(20±2)g，購自遼寧長生生物技術(shù)有限公司，動物許可證號：SCXK(遼)2010-0001。

2 方法

2.1 分組方法與給藥劑量

取昆明種雄性小鼠64只，在實驗室中適應(yīng)性喂養(yǎng)5天，稱重，隨機分為8組，每組8只，分別為空白組、150mg/(kg·d)劑量組、300mg/(kg·d)劑量組、450mg/(kg·d)劑量組、600mg/(kg·d)劑量組、750mg/(kg·d)劑量組、900mg/(kg·d)劑量組、1 050mg/(kg·d)劑量組。每天按劑量灌胃1次，連續(xù)灌胃7天，空白組小鼠灌胃同等劑量的溶劑。于末次給藥1h后眼球取血，3 000r/min離心15min，分離血清，按照尿酸、尿素、肌酐試劑盒規(guī)定的操作方法檢測血清中尿酸、尿素、肌酐含量。

2.2 給藥方法與時間

取昆明種雄性小鼠64只，在實驗室中適應(yīng)性喂養(yǎng)5天，稱重，隨機分為8組，每組8只，分別為空白組、灌胃給藥1天組、灌胃給藥3天組、灌胃給藥5天組、灌胃給藥7天組、灌胃給藥9天組、灌胃給藥11天組、灌胃給藥13天組。每天按照750mg/(kg·d)的劑量灌胃，空白組小鼠灌胃同等劑量的溶劑，分別于1、3、5、7、9、11、13天給藥1h后眼球取血，空白組小鼠于第13天眼球取血，3 000r/min離心15min，分離血清。按照尿酸、尿素、肌酐試劑盒規(guī)定的操作方法檢測血清中尿酸、尿素、肌酐含量。

2.3 統(tǒng)計學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 給藥劑量對小鼠高尿酸血癥模型的影響

150、300、450、600、750、900、1 050mg/(kg·d)劑量組小鼠與空白組小鼠血清尿酸、尿素、肌酐含量如表1所示，變化趨勢如圖1、圖2、圖3所示。由實驗結(jié)果可知，當給藥劑量達到750mg/(kg·d)時，與空白組相比，各給藥組小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量均明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。故可確定小鼠高尿酸血癥模型的最佳給藥劑量為750mg/(kg·d)。

3.2 給藥時間對小鼠高尿酸血癥模型的影響

按照750mg/(kg·d)劑量給藥，給藥1、3、5、7、9、11、13天組小鼠與空白組小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量如表2所示，變化趨勢如圖4、圖5、圖6所示。由實驗結(jié)果可知，當給藥時間達到7天時，與空白組比較，各給藥組小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量均顯著增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。故可確定小鼠高尿酸血癥模型的最佳給藥時間為7天。

表1 空白組與不同給藥劑量組小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量比較 (±s)

注：*表示與空白組比較，各給藥組P<0.05；**表示與空白組比較，各給藥組P<0. 01。

圖1不同給藥劑量組小鼠尿酸值變化趨勢

圖2不同給藥劑量組小鼠尿素值變化趨勢

圖3不同給藥劑量組小鼠肌酐值變化趨勢

表2 空白組與不同給藥時間組小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量比較 (±s)

注：*表示與空白組比較，各給藥組P<0.05；**表示與空白組比較，各給藥組P<0. 01。

圖4 不同給藥天數(shù)組小鼠尿酸值變化趨勢

圖5 不同給藥天數(shù)組小鼠尿素值變化趨勢

圖6 不同給藥天數(shù)組小鼠肌酐變化趨勢

4 討論

高尿酸血癥的發(fā)病機制主要包括兩大類，即尿酸生成增多和尿酸排泄減少，進而導(dǎo)致體內(nèi)尿酸含量增多。嘌呤代謝過程中相關(guān)酶缺乏是尿酸生成增多的主要原因，而腎臟中參與尿酸排泄的相關(guān)轉(zhuǎn)運體，如人尿酸鹽陰離子轉(zhuǎn)運體、人尿酸鹽轉(zhuǎn)運體、人有機陰離子轉(zhuǎn)運體等表達異常則是造成機體內(nèi)尿酸排泄減少的主要原因。根據(jù)發(fā)病機制，現(xiàn)代臨床治療高尿酸血癥的藥物也主要分為以下兩類：減少尿酸生成類藥物，如嘌呤和嘧啶類似物；促進尿酸排泄類藥物，如丙磺舒、苯磺唑酮、苯溴馬隆等[13]。

臨床上高尿酸血癥的判斷標準為男性血尿酸含量>416.5μmol/L(7.0mg/d)、女性>356.9μmol/ L(6.0mg/d)。高尿酸血癥的主要檢測指標為血尿酸、血肌酐、血尿素含量，因此本實驗選擇小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量作為高尿酸血癥的考察指標。

科學(xué)、合理、持久、穩(wěn)定的動物模型能為疾病的發(fā)病機制、藥物作用機制及藥效的研究等提供有利的保障。本實驗采用氧嗪酸鉀制作小鼠高尿酸血癥模型，由于氧嗪酸鉀的結(jié)構(gòu)與尿酸的嘌呤環(huán)類似，可競爭性地與尿酸酶結(jié)合，從而部分抑制尿酸酶活性，使體內(nèi)尿酸含量增加。本實驗考察了氧嗪酸鉀所致小鼠高尿酸血癥模型的給藥劑量及時間

的影響，由實驗結(jié)果可知，隨著造模時間的增加以及給藥劑量的增大，小鼠血中尿酸、尿素、肌酐含量也隨之升高。但當給藥時間與劑量到達一定程度時，小鼠血中尿酸、尿素、肌酐含量反而出現(xiàn)下降趨勢，這可能是由于機體內(nèi)環(huán)境有一定的平衡調(diào)節(jié)作用。根據(jù)以上三個指標綜合考慮，在給藥劑量為750mg/(kg·d)、給藥時間為7天時，模型組小鼠血清中尿酸、尿素、肌酐含量均明顯升高，可造出理想的高尿酸血癥小鼠模型。給藥時間過短或過長、給藥劑量過高或過低都會對模型產(chǎn)生不利影響，且給藥時間超過7天、給藥劑量超過750mg/(kg·d)時，可能會導(dǎo)致假陽性結(jié)果。

氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的高尿酸血癥小鼠模型體內(nèi)尿酸、尿素、肌酐含量明顯升高，與高尿酸血癥臨床表現(xiàn)相似，且小鼠健康狀態(tài)良好。該模型的建立為高尿酸血癥發(fā)病機制、病理基礎(chǔ)、治療藥物等研究奠定了基礎(chǔ)。

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(責任編輯：尹晨茹)

Study on the Establishment of Hyperuricemia Model in Mouse Based on Biochemical Indicators

Tian Tengyue1,2,3,Bao Yongrui1,2,3,Meng Xiansheng1,2,3,Wang Shuai1,2,3,Lao Jiaoyang1,2,3

(1.College of Pharmacy,Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Dalian 116600,China;2.Liaoning Province Component of Traditional Chinese Medicine and Engineering Research Center,Dalian 116600,China;3.Liaoning Province Modern Traditional Chinese Medicine Research and Engineering Laboratory,Dalian 116600,China)

Objective:To establish a hyperuricemia model in mouse.Methods:The oxonic acid were administrated to the mouse,and studying the impact of different administration metering 150、300、450、600、750、900、1 050mg/(kg·d) and different administration time 1、3、5、7、9、11、13d. The uric,urea and creatinine of mouse were detected by semi brake biochemical analyzer.Throught statistical analysis,to determine the best administration metering and administration time of the mice model of hyperuricemia.Results:Compared with the control group,when the administration metering was 750mg/(kg·d) and the administration time is 7d, the uric,urea and creatinine of mouse were significant differences.And the mice model of hyperuricemia was succeeed.Conclusion:The best administration metering of the model of hyperuricemia was 750mg/(kg·d) and the best administration time of the model of hyperuricemia was 7d.

Model of Hyperuricemia;Administration Metering;Administration Time;Biochemical Indicators

2015-04-22

田騰躍(1988-)，男，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，研究方向中藥藥物分析。

孟憲生(1964-)，男，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)教授，研究方向為中藥組分配伍、代謝組學(xué)及藥品質(zhì)量分析。E-mail:mxsvvv@126.com

R-332;R589.7

A

1673-2197(2015)18-0003-03

10.11954/ytctyy.201518002