穿心蓮粉末飲片顆粒度適宜性研究*

★ 陸曉暉 唐芳瑞 馬志林 邵峰 黃慧蓮 劉榮華＊＊＊ (1.佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院 廣東佛山5800;.江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌0004;.江西匯仁集團有限公司 南昌005)

穿心蓮為爵床科植物穿心蓮Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees的干燥地上部分。味苦，性寒。歸心、肺、大腸、膀胱經(jīng)。具有清熱解毒、涼血、消腫之功效，主治感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、口舌生瘡、頓咳勞嗽、泄瀉痢疾、熱淋澀痛、癰腫瘡瘍、蛇蟲咬傷等癥［1］。主要含二萜內(nèi)酯類、黃酮類等活性成分［2］，其中二萜內(nèi)酯類成分穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯是其主要活性成分和質(zhì)量控制指標［1］。因其成分二萜內(nèi)酯為脂溶性成分，溶出性能較差。劉開永等［3］研究發(fā)現(xiàn)，穿心蓮超微粉體中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯溶出速度高于其常規(guī)粉體，但此研究僅針對超微粉體，且僅以穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯為指標。然而對其主要活性成分的溶出度、指紋圖譜及浸出物等多角度探討穿心蓮粉末飲片顆粒度適宜性問題，目前尚未見報道。

中藥粉末飲片包括“散劑”“煮散”“袋泡劑”等，作為傳統(tǒng)中醫(yī)藥防治疾病的重要載體之一，是中藥飲片的重要組成部分，具有用量少、效果佳、服用便捷、活性成分溶出快等優(yōu)勢。本文以穿心蓮藥材為研究對象，對其進行粉碎分級處理，以主要活性成分穿心蓮內(nèi)酯溶出度、總浸出物、HPLC指紋圖譜為指標，綜合考察分析，探討不同顆粒度對穿心蓮粉末飲片的質(zhì)量影響，旨在為穿心蓮飲片的高效臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Aglient1200高效液相色譜儀，Agilent ChemStation工作站以及VWD檢測器(美國Aglient公司);精密恒溫水浴鍋(HH-S型，中國江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠);賽多利斯BT25S十萬分之一電子天平(德國Sartorius公司);數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(Gzx-9070MBE型，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)。

1.2 試藥 穿心蓮內(nèi)酯對照品(含測用，批號110797-200307，購于中國藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純;甲醇為分析純;水為雙蒸水(自制)。

穿心蓮藥材購于江中中藥飲片有限公司，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)劉榮華教授鑒定為爵床科植物穿心蓮Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees的全草干燥品。

按照《中華人民共和國藥典》2010年版(一部)ⅡA“藥材取樣法”分別取上述試驗樣品，除去雜質(zhì)，低溫緩慢烤干或弱日光下曬干，篩去碎屑。取穿心蓮藥材干燥品若干克，經(jīng)粉碎機粉碎后，分別通過藥典篩1-9號，制備成10個同一批次藥材的不同顆粒度飲片樣品，編號依次為0-9號，備用，見表1。

表1 樣品分級表

2 穿心蓮粉末飲片中主要活性成分穿心蓮內(nèi)酯的溶出度測定

2.1 供試品溶液的制備 根據(jù)常規(guī)飲片服用方式進行模擬，對已制備的10組穿心蓮顆粒化飲片樣品分別進行提取:分別精密稱取2.0g，以飲片質(zhì)量:蒸餾水體積=1∶15，置于50mL圓底燒瓶中，加入30mL蒸餾水，稱重，以水浴進行回流提取，提取時間30min，趁熱過濾，放冷，加水補足重量，取濾液1mL，以1∶1甲醇稀釋定容至2mL，充分搖勻，吸取甲醇液若干，過0.45μm有機系濾頭，得樣品制備液，備用。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取穿心蓮內(nèi)酯對照品5.37mg，置于10mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解，定容，搖勻，制備成0.537mg/mL的對照品溶液，儲備備用。

2.3 色譜分離條件 Aglient1200高效液相色譜儀，Agilent ChemStation工作站以及VWD檢測器(美國Aglient公司);色譜柱:大連依利特-C18柱(4.6mm×200mm，5μm);流動相:乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)，梯度洗脫(0～30min，15%～30%A;30～50min，30%～75%A;50～60min，75%A);檢測波長:225nm;柱溫:25℃;進樣量:10μL;流速:1.0mL/min。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性實驗 分別精密吸取空白對照溶液、對照品溶液、供試品溶液各10μL，按“2.3項”下色譜條件依次注入高效液相色譜儀中，采用外標法測定含量，在上述條件下，得到色譜峰理論塔板數(shù)均不小于8 000，分離度均大于1.5。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密吸取一定量的穿心蓮內(nèi)酯對照品儲備溶液，用甲醇稀釋調(diào)配成系列濃度的對照品溶液，得序列對照品溶液中穿心蓮內(nèi)酯濃度(0.005 37，0.010 47，0.026 85，0.053 7，0.107 4mg/mL)，分別進樣10μL，測定峰面積，以對照品溶液的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，得到穿心蓮內(nèi)酯的線性回歸方程:Y=19122X+5.7947(r=0.9991)，線性范圍:0.0537～1.074μg。

2.3.2 精密度試驗 取穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液，按上述色譜條件進樣10μL，連續(xù)5次，記錄該對照品的峰面積，計算其峰面積RSD值為0.49%，表明儀器的精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗 稱取樣品4號，按“2.1”方法制備供試溶液，按上述色譜條件，分別在0，2，4，8，12h進樣10μL測定，得到穿心蓮內(nèi)酯的峰面積，計算其峰面積RSD值為1.27%，表明樣品在12h內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗 分別取6號穿心蓮顆粒化飲片樣品5份，按“2.1”方法制備供試溶液，按上述色譜條件，分別進樣10μL分別得出穿心蓮內(nèi)酯峰面積，計算其峰面積RSD值0.74%，表明樣品重現(xiàn)性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的穿心蓮粉末飲片5號樣品5份，各2.0g，分別加入與樣品量之比約為1∶1的對照品，按“2.1”項下方法制備得供試品，各進樣10μL，分別計算得回收率，結(jié)果見表2。由以下結(jié)果表明，穿心蓮內(nèi)酯的回收率符合實驗要求，表明本實驗方法的準確定良好。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果(n=5)

2.3.6 實驗結(jié)果 根據(jù)上述方法測定了10種穿心蓮粉末飲片中穿心蓮內(nèi)酯的溶出度，結(jié)果見表3。

表3 穿心蓮粉末飲片穿心蓮內(nèi)酯溶出度

3 穿心蓮顆粒化飲片浸出物測定

分別精密稱定穿心蓮粉末化飲片組，各10.0g，每組平行測定3次，以飲片質(zhì)量:蒸餾水體積=1∶15，置于500mL圓底燒瓶中，加入150mL蒸餾水，以水浴回流提取，時間30min，趁熱過濾，放冷，水浴蒸發(fā)，減壓干燥，至恒重，采用減重法進行稱定。結(jié)果見表4。

表4 穿心蓮粉末飲片熱水提取浸膏得率(n=3)

4 穿心蓮顆?；嬈琀PLC指紋圖譜測定與分析

4.1 樣品前處理 分別精密稱取穿心蓮粉末飲片各組樣品，各1.0g，以飲片質(zhì)量:蒸餾水體積=1∶30，按“2.1”項下制備供試溶液的方法處理，得樣品制備液，備用。

4.2 色譜條件 按照“2.3項”下的色譜條件測定10組穿心蓮粉末飲片樣品的HPLC指紋圖譜，并進行分析。

4.3 實驗結(jié)果 按上述色譜分析法測定10組穿心蓮粉末飲片的HPLC色譜指紋圖譜，見圖1。

圖1 穿心蓮粉末飲片HPLC色譜指紋圖譜

圖2 穿心蓮粉末飲片對照指紋圖譜共有峰的標定

4.3.1 共有峰的標定 利用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A版”軟件，以穿心蓮原飲片(0號)為參照峰生成穿心蓮粉末飲片共有模式的對照指紋圖譜，如圖2。以5號峰為參照峰(S)，其保留時間為1，各共有峰的相對保留時間、相對峰面積見表5、6所示，結(jié)果表明RSD值小于3%，符合指紋圖譜的要求。

4.3.2 共有峰相對峰面積

4.3.3 非共有峰面積 通過對10組穿心蓮粉末飲片樣品的HPLC指紋圖譜結(jié)果測定，統(tǒng)計各組粉末飲片非共有峰面積占總峰面積比值，其共有峰面積百分比在15.32%～20.90%，非共有峰面積的百分比在79.10%～84.68%，結(jié)果見表7。

表5 10組穿心蓮粉末飲片共有峰相對保留時間

表6 10組穿心蓮飲片共有峰相對峰面積

表7 10組穿心蓮粉末飲片指紋圖峰面積表

5 小結(jié)

穿心蓮粉末飲片粉碎度對穿心蓮內(nèi)酯溶出呈現(xiàn)隨著粉碎度的增加而增長的趨勢。原因可能是穿心蓮飲片屬草本植物，淀粉含量較低，水煎煮不易糊化，有利于有效成分物質(zhì)的溶出，但當粉碎度達到一定程度后(120目以上)，穿心蓮內(nèi)酯基本能完全溶出。穿心蓮粉末飲片浸出物同樣隨顆粒度減小而增加的趨勢，但在80目以上時浸膏得率基本達到穩(wěn)定值。指紋圖譜分析表明，隨著顆粒度的越細，穿心蓮指紋圖譜總峰面積出現(xiàn)先增加后降低的趨勢，并在80～120目時達到最大值，大于200目時，總峰面積降低更明顯。綜合分析以上結(jié)果，我們擬定120～150目為穿心蓮粉末飲片的最佳顆粒度，此時其粉末飲片質(zhì)量最佳。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典﹒一部［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:251-252.

［2］蔣珍藕.穿心蓮屬植物化學(xué)成分研究進展［J］.中成藥，2011，33(8):1 382-1 388.

［3］劉開永，張敏，李道敏，等.微粉化穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的溶出特性［J］.中成藥，2010，32(4):673-675.