結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在診斷COPD 伴肺結(jié)核中的臨床意義

相 潔，袁益坤，王 忠，劉 丹

（1.延安大學(xué)咸陽(yáng)醫(yī)院，咸陽(yáng) 712000；2.禮泉縣人民醫(yī)院，咸陽(yáng) 712000）

慢性阻塞性肺疾?。–OPD）是呼吸內(nèi)科常見(jiàn)的疾病類(lèi)型，COPD 患者常常伴有免疫功能異常，自身抵抗力有限，而機(jī)體免疫力下降時(shí)感染肺結(jié)核在重要誘因，與此同時(shí)，COPD 患者長(zhǎng)期使用激素也會(huì)造成滿意度進(jìn)一步降低，加劇肺結(jié)核病情［1］。結(jié)核病是一種長(zhǎng)期存在的威脅人類(lèi)健康的疾病，也是一個(gè)重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題［2］。COPD 伴發(fā)肺結(jié)核會(huì)使患者的健康狀況嚴(yán)重惡化，因此及早發(fā)現(xiàn)、及早確診并采取合理的防控措施是治療疾病的關(guān)鍵所在。結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)是一個(gè)有效的結(jié)核分歧桿菌感染診斷技術(shù)［4］。為驗(yàn)證其在COPD 伴肺結(jié)核中的應(yīng)用價(jià)值，我院開(kāi)展了相應(yīng)的研究工作，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取我院2013 年6 月～2014 年12 月期間收治的90 例慢性阻塞性肺疾?。–OPD）疑似肺結(jié)核患者作為研究對(duì)象，所選患者均符合2002 年中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)制定的COPD 診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中男53例，女37 例；年齡58~76 歲，平均（67.9±4.5）歲；COPD病史3~19 年，平均（8.7±2.6）年?；颊叽嬖谝欢ǔ潭鹊目人?、呼吸困難、發(fā)熱、胸痛等癥狀，影像學(xué)檢查顯示縱膈淋巴結(jié)結(jié)節(jié)、斑片、腫大。

1.2 方法所有患者均采用結(jié)核菌素試驗(yàn)（PPD）和結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-SPOT.TB）進(jìn)行檢測(cè)。T-SPOT.TB 具體方法為：抽取5 mL 患者的外周血，進(jìn)行外周血單個(gè)核細(xì)胞分離，以全血模式進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，配制成細(xì)胞懸液，懸液濃度為25×104 單核細(xì)胞/100 μL；在各個(gè)樣板條上按順序設(shè)置陰性、抗原A、抗原B、陽(yáng)性對(duì)照，并按順序在4 個(gè)孔內(nèi)加入100 μL 細(xì)胞懸液，隨后將培養(yǎng)板放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16~20 h，培養(yǎng)箱溫度為37.5℃，CO2 濃度為5%，PBS 洗板4 次；將50 μL 酶標(biāo)二抗工作液加至各個(gè)孔內(nèi)，并置于2~8℃條件下孵育1 h，取50 μL 顯色液加至各個(gè)孔內(nèi)，避光顯色7~12 min 后，用蒸餾水終止顯色，反復(fù)4 次后濾紙拍板，待其自然干燥后讀取結(jié)果。對(duì)患者進(jìn)行胸部CT 掃描和病理學(xué)檢查，并依此作為最終檢測(cè)結(jié)果。

1.3 結(jié)果判定陽(yáng)性：若抗原A 斑點(diǎn)或抗原B 孔斑點(diǎn)-陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥2，陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)為6~10個(gè)，則判讀為陽(yáng)性結(jié)果；陰性：若抗原A 斑點(diǎn)或抗原B孔斑點(diǎn)-陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6，陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)為0~5 個(gè)，則判讀為陰性結(jié)果［5］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS18.0 軟件處理數(shù)據(jù)，使用百分?jǐn)?shù)表示計(jì)數(shù)資料并使用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。若P<0.05，說(shuō)明組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 T-SPOT.TB 試驗(yàn)與最終診斷結(jié)果比較本組90例患者均順利完成診斷。對(duì)比T-SPOT.TB 試驗(yàn)與最終診斷結(jié)果可知，T-SPOT.TB 試驗(yàn)靈敏度為79.07%，特異度為87.23%，假陽(yáng)性率為12.24%，假陰性率為20.93%。見(jiàn)表1。

表1 T-SPOT.TB試驗(yàn)與最終診斷結(jié)果比較

2.2 T-SPOT.TB 試驗(yàn)與結(jié)合抗體檢測(cè)結(jié)果比較由表2 可知，對(duì)于43 例明確為COPD 伴肺結(jié)核患者，T-SPOT.TB 試驗(yàn)的陽(yáng)性檢出率為79.07%，PPD 試驗(yàn)的陽(yáng)性檢出率為48.84%。兩組相比較，T-SPOT.TB 試驗(yàn)的陽(yáng)性檢出率顯著高于對(duì)照組（P<0.01）。

表2 T-SPOT.TB試驗(yàn)與結(jié)合抗體檢測(cè)結(jié)果比較

3 討論

慢性阻塞性肺疾病是具有氣流阻塞特征的肺氣腫和（或）慢性支氣管炎，若治療不當(dāng)，可進(jìn)一步發(fā)展為呼吸衰竭和肺心病等常見(jiàn)慢性疾病，患者的致殘率和病死率極高［6］。結(jié)核病是嚴(yán)重危害人類(lèi)生命安全的慢性傳染性疾病，近些年來(lái)，結(jié)核病在全球的流行和傳播呈現(xiàn)持續(xù)蔓延之勢(shì)［7］。據(jù)第四次結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國(guó)結(jié)核分歧桿菌感染率高達(dá)44.5%，也就是說(shuō)我國(guó)約有近6 億人感染過(guò)結(jié)核分歧桿菌［8］。然而，臨床研究顯示，僅有不足10%的感染個(gè)體有進(jìn)展為結(jié)核病的可能［8］。結(jié)核病的發(fā)生是多種因素相互作用的結(jié)果，臨床研究表明COPD 患者是肺結(jié)核的易患人群，COPD伴發(fā)肺結(jié)核病例日益增多，二者并存導(dǎo)致機(jī)體免疫力進(jìn)一步降低，給疾病的控制帶來(lái)巨大難度，因此，設(shè)法提高COPD 伴肺結(jié)核的早期診斷率成為了救治患者的最佳選擇［9］。

T-SPOT.TB 試驗(yàn)結(jié)合了γ-干擾素釋放試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)，通過(guò)檢測(cè)受結(jié)核分歧桿菌抗原刺激而活化的效應(yīng)T 細(xì)胞進(jìn)行結(jié)核感染診斷。結(jié)核感染后體內(nèi)會(huì)長(zhǎng)期存在抗原特異性T 細(xì)胞，再次受到抗原刺激后，會(huì)迅速得到活化增殖，并釋放γ-干擾素［10］。試驗(yàn)利用CFP10 與ESAT6 兩種結(jié)核特異性抗原刺激外周血中結(jié)核特異性T 淋巴細(xì)胞分泌γ-干擾素，通過(guò)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)檢測(cè)γ-干擾素的釋放情況，并依此判斷機(jī)體是否感染了結(jié)核桿菌。CFP10 與ESAT6 均來(lái)自結(jié)核分歧桿菌基因組所特有的RD1 區(qū)域，因此特異性極強(qiáng)［11］。本文研究顯示T-SPOT.TB 檢測(cè)診斷肺結(jié)核的敏感度和特異性分別高達(dá)79.07%和87.23%，而其陽(yáng)性檢出率也顯著高于結(jié)核抗體檢測(cè)，可見(jiàn)，本實(shí)驗(yàn)充分證實(shí)了其在臨床診斷COPD 中的可信度和有效性。PPD 試驗(yàn)?zāi)壳拜^為認(rèn)可的結(jié)核桿菌檢測(cè)技術(shù)，PPD是一種體內(nèi)試驗(yàn)，由于BCG 技術(shù)的廣泛應(yīng)用，因BCG接種所致的PPD 試驗(yàn)假陽(yáng)性逐漸增多，而PPD 試驗(yàn)易受多種因素影響，臨床診斷精確度難以得到保障［12］。T-SPOT.TB 試驗(yàn)結(jié)果較為客觀，不易受體檢人員讀數(shù)及機(jī)體自身狀態(tài)的影響，因此能為臨床診斷提供更有保障的依據(jù)。

綜上所述，T-SPOT.TB 試驗(yàn)具有高靈敏度和高特異性等優(yōu)點(diǎn)，可以為COPD 伴肺結(jié)核的早期精確診斷提供確切的結(jié)核感染依據(jù)，具有積極的臨床意義。

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