新型7-O-(芳基氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素A的合成及其抗腫瘤活性*

吳植獻(xiàn)，王亞軍，陳 瑋，薛 鋒，萬(wàn)南微，鄭裕國(guó)

(浙江工業(yè)大學(xué)生物工程研究所，浙江杭州 310014)

布雷菲德菌素A(3，Chart 1)是一種具有多重生物活性，由真菌發(fā)酵產(chǎn)生的13元環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素［1］。3通過(guò)與高爾基體關(guān)聯(lián)的蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)因子結(jié)合，阻礙蛋白質(zhì)向高爾基體轉(zhuǎn)運(yùn)，從而表現(xiàn)出抗真菌、抗病毒、抗有絲分裂活性［2］，而隨著蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的積累會(huì)造成內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滲透壓的升高，最終導(dǎo)致細(xì)胞的程序性死亡，使其具有了對(duì)多種癌細(xì)胞具有抑制活性［3－4］。

Scheme 1

Chart 1

美國(guó)腫瘤研究院將3作為抗腫瘤藥物重點(diǎn)研究，視為新型抗癌候選藥物［5］。但由于3自身的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)(水溶性差、血漿半衰期短、細(xì)胞選擇性差等)不理想，阻礙了其作為抗腫瘤治療藥物的臨床研究［6］。研究發(fā)現(xiàn)，3的4-羥基是其活性的關(guān)鍵位點(diǎn)［7－9］。

本課題組曾對(duì)3的發(fā)酵和分離純化進(jìn)行過(guò)研究［10－11］。本文將芳胺(1a ～1m)或環(huán)己胺(1n)與三光氣反應(yīng)制得芳基異氰酸酯(2a～2n);2a～2n分別對(duì)3的7-羥基進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，合成了14個(gè)新型布雷菲德菌素A氨基甲酸酯類衍生物——7-O-(芳基氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素A(4a～4n)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR，13C NMR和 ESIHR-MS表征。并對(duì)其抗腫瘤活性進(jìn)行了研究。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

AvanceⅢ500 MHz型和Avance 126 MHz型核磁共振儀(CDCl3為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo));Esquire 6000型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀。

3 按文獻(xiàn)方法［10－11］制備(含量 99.5%);其余所用試劑均為分析純，其中甲苯經(jīng)干燥重蒸后使用。

1.2 合成

(1)2a～2n的合成(以2a為例)

在反應(yīng)瓶中加入三光氣60 mg(0.2 mmol)和無(wú)水甲苯20 mL，攪拌使其溶解;冰浴冷卻，于1 h內(nèi)滴加混合液［苯胺(1a)46 mg(0.5 mmol)+催化劑三乙胺40 μL+無(wú)水甲苯50 mL］，滴畢，于室溫反應(yīng)30 min;回流(80℃)反應(yīng)3 h至反應(yīng)液澄清［12］。減壓蒸除溶劑得黃色固體2a 58 mg(直接進(jìn)行下步反應(yīng))。

用類似的方法合成2b～2n。

(2)4a～4n的合成(以4a為例)

在反應(yīng)瓶中依次加入3 110 mg(0.4 mmol)，無(wú)水甲苯30 mL和吡啶200 μL，升溫至回流(90℃)使其溶解;將溶液直接倒入上述2a的濃縮圓底瓶中，回流反應(yīng)6 h［TLC跟蹤:展開劑:A=V(乙酸乙酯)∶V(石油醚)=1∶5］。減壓旋干甲苯，殘余物用二氯甲烷50 mL溶解，用飽和氯化鈉溶液(3×10 mL)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓旋干溶劑后用少量甲醇溶解，經(jīng)自制硅膠板(展開劑:A=1∶2)分離，取目標(biāo)產(chǎn)物條帶，將硅膠條帶刮下，粉碎，經(jīng)硅膠柱層析(洗脫劑:A=1∶2)純化得淡黃色粉末4a。

用類似的方法合成淡黃色粉末4b～4n。

7-O-(苯基氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素 A(4a):產(chǎn)率 31.7%;1H NMR δ:7.41 ～7.19(m，6H)，5.92(d，J=15.6 Hz，1H)，5.82 ～ 5.57(m，1H)，5.12(dd，J=8.7 Hz，4.5 Hz，1H)，4.85(dd，J=10.4 Hz，5.7 Hz，1H)，4.11(d，J=8.7 Hz，1H)，2.49 ～2.05(m，4H)，2.03(d，J=27.9 Hz，1H)，1.93 ～1.78(m，3H)，1.77 ～1.69(m，1H)，1.67 ～ 1.57(m，1H)，1.69 ～1.58(m，1H)，1.57 ～ 1.45(m，1H)，1.26(t，J=6.2 Hz，3H)，0.92(dd，J=19.6 Hz，12.7 Hz，1H);13C NMR δ:166.28，154.88，151.61，136.04，131.50，130.90，129.46，129.05，121.68，121.62，117.69，75.81，75.69，71.82，52.22，43.98，43.94，40.23，38.74，34.98，31.83，26.67，20.84;ESI-HR-MS m/z:Calcd for C23H29NO5Na{［M+Na］+}422.2，found 422.1。

7-O-(芐基氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素 A(4b):產(chǎn)率 26.4%;1H NMR δ:7.41 ～7.19(m，6H)，5.92(d，J=15.6 Hz，1H)，5.82 ～ 5.57(m，1H)，5.12(dd，J=8.7 Hz，4.5 Hz，1H)，4.85(dd，J=10.4 Hz，5.7 Hz，1H)，4.48 ～4.19(m，2H)，4.11(d，J=8.7 Hz，1H)，2.49 ～2.05(m，4H)，2.03(d，J=27.9 Hz，1H)，1.93 ～1.78(m，3H)，1.77 ～1.69(m，1H)，1.67 ～1.57(m，1H)，1.69 ～1.58(m，1H)，1.57 ～1.45(m，1H)，1.26(t，J=6.2 Hz，3H)，0.92(dd，J=19.6 Hz，12.7 Hz，1H);13C NMR δ:166.28，156.23，151.68，138.50，136.14，130.70，130.56，128.66，128.63，127.53，127.47，117.60，75.80，75.73，71.72，52.14，45.01，43.91，40.26，38.71，34.15，31.80，26.65，20.83;ESI-HR-MS m/z:Calcd for C24H31NO5Na{［M+Na］+}436.2，found 436.1。

7-O-(鄰甲基苯氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素A(4c):產(chǎn)率32.0%;1H NMR δ:7.54 ～7.01(m，5H)，5.91(s，1H)，5.23(d，J=64.1 Hz，2H)，4.85(s，1H)，4.41(s，1H)，4.09(s，1H)，2.31(t，J=33.2 Hz，6H)，1.86(s，3H)，1.75 ～1.62(m，3H)，1.45(d，J=80.0 Hz，2H)，1.28 ～1.08(m，3H)，0.93(s，1H);13C NMR δ:166.33，156.67，151.84，136.00，135.34，131.54，131.01，130.74，130.37，127.05，126.75，117.53，76.18，75.59，71.72，52.01，43.86，40.17，38.60，34.04，31.77，26.62，20.80，17.67;ESI-HR-MS m/z:Calcd for C24H31NO5Na{［M+Na］+}436.2，found 436.1。

7-O-(對(duì)甲苯基氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素A(4d):產(chǎn)率 31.8%;1H NMR δ:8.02 ～6.50(m，5H)，5.80(m，1H)，5.62 ～4.98(m，2H)，4.87(s，1H)，4.87(s，1H)，4.40(s，1H)，4.40(s，1H)，3.04 ～2.11(m，6H)，2.01(s，1H)，1.78(dd，J=78.0 Hz，16.3 Hz，4H)，1.50(d，J=39.1 Hz，2H)，1.25(t，J=20.2 Hz，3H)，0.93(s，1H);13C NMR δ:166.30，155.05，151.72，136.08，135.11，130.80，129.99，129.56，129.52，123.38，122.00，117.62，75.76，75.64，71.79，52.20，43.93，40.21，38.74，34.09，31.82，26.68，20.85，20.74;ESI-HR-MS m/z:Calcd for C24H31NO5Na{［M+Na］+}436.2，found 436.1。

7-O-(對(duì)氯苯基氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素A(4e):產(chǎn)率 30.5%;1H NMR δ:7.51 ～ 7.44(m，3H)，7.34(t，J=14.0 Hz，3H)，5.72(s，2H)，5.33 ～5.21(m，2H)，5.03(s，1H)，4.72(s，1H)，4.03(s，1H)，2.27 ～2.07(m，4H)，1.77 ～1.61(m，4H)，1.50(d，J=8.3 Hz，3H)，1.20(t，J=10.2 Hz，3H)，0.76(s，1H);13C NMR(DMSO)δ:196.96，165.63，154.11，153.12，138.26，136.43，130.59，130.03，129.11，128.59，123.44，119.60，116.94，75.49，73.96，70.88，51.90，42.69，40.02，38.29，33.45，31.42，26.53，20.70;ESI-HR-MS m/z:Calcd for C23H28NO5ClNa{［M+Na］+}456.2，found 456.1。

7-O-(鄰氯苯基氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素A(4f):產(chǎn)率 28.2%;1H NMR δ:7.33(t，J=26.3 Hz，4H)，7.11(s，1H)，7.00(s，1H)，5.94(s，J=15.7 Hz，1.8 Hz，1H)，5.74(s，J=15.0 Hz，10.2 Hz，4.6 Hz，1H)，5.33 ～ 5.22(m，1H)，5.22 ～5.12(m，1H)，4.92 ～4.79(m，1H)，4.14(d，J=9.0 Hz，1H)，2.37 ～2.27(m，3H)，1.86(d，J=6.9 Hz，3H)，1.72(d，J=6.6 Hz，2H)，1.52(d，J=16.4 Hz，2H)，1.27(t，3H)，0.96(s，1H);13C NMR δ:166.17，152.79，151.45，135.89，134.67，131.01，129.06，127.72，125.80，125.37，123.73，117.75，76.54，75.76，71.73，52.04，43.93，41.97，40.18，38.62，34.11，31.79，27.00，26.63，20.83;ESI-HR-MS m/z:Calcd for C23H28NO5ClNa{［M+Na］+}456.2，found 456.1。

7-O-(2，4-二氯苯胺氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素 A(4g):產(chǎn)率 28.9%;1H NMR δ:7.33(t，J=26.3 Hz，4H)，7.11(s，1H)，7.00(s，1H)，5.94(d，J=15.7 Hz，1.8 Hz，1H)，5.74(d，J=15.0 Hz，10.2 Hz，4.6 Hz，1H)，5.33 ～5.22(m，1H)，5.22 ～5.12(m，1H)，4.92 ～4.79(m，1H)，4.14(d，J=9.0 Hz，1H)，2.37 ～2.27(m，3H)，1.86(d，J=6.9 Hz，3H)，1.72(d，J=6.6 Hz，2H)，1.52(d，J=16.4 Hz，2H)，1.27(t，J=5.3 Hz，3H)，0.96(s，1H);13C NMR δ:166.17，165.67，152.66，151.38，147.11，136.22，135.82，133.52，131.13，128.76，127.90，117.83，75.77，71.77，52.04，43.95，40.19，38.65，34.15，31.80，26.62，20.83;ESI-HR-MS m/z:Calcd for C23H27NO5Cl2Na{［M+Na］+}490.1，found 490.4。

7-O-(對(duì)氟苯基氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素A(4h):產(chǎn)率 30.5%;1H NMR(DMSO-d6)δ:7.53(s，1H)，7.47(s，2H)，7.36(d，J=15.6 Hz，1H)，7.27(s，1H)，7.12(d，J=8.8 Hz，2H)，5.74(d，J=15.4 Hz，2H)，5.25(d，J=11.0 Hz，3H)，5.02(s，1H)，4.72(s，2H)，4.09(d，J=43.8 Hz，2H)，2.49(d，J=15.7 Hz，3H)，2.23(s，1H)，2.07(s，1H)，1.94(s，1H)，1.80(d，J=12.4 Hz，4H)，1.64(s，1H)，1.50(d，J=11.2 Hz，2H)，1.21(t，J=10.7 Hz，3H)，0.75(s，1H);13C NMR δ:166.10，157.06，154.58，153.75，136.92，131.00，130.48，125.38，125.31，116.93，115.80，115.62，75.81，74.45，71.36，52.38，43.16，41.47，38.77，33.92，31.89，26.87，21.16;ESI-HR-MS m/z:Calcd for C23H28NO5FNa{［M+Na］+}440.2，found 440.1。

7-O-(2，4-二氟苯基氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素 A(4i):產(chǎn)率 30.3%;1H NMR δ:7.32(d，J=15.6 Hz，3H)，7.27(s，1H)，7.12(d，J=8.8 Hz，2H)，5.74(d，J=15.4 Hz，2H)，5.25(d，J=11.0 Hz，3H)，5.02(s，1H)，4.72(s，2H)，4.09(d，J=43.8 Hz，2H)，2.49(d，J=15.7 Hz，3H)，2.23(s，1H)，2.07(s，1H)，1.94(s，1H)，1.80(d，J=12.4 Hz，4H)，1.64(s，1H)，1.50(d，J=11.2 Hz，2H)，1.21(t，J=10.7 Hz，3H)，0.75(s，1H);13C NMR δ:166.26，158.47，154.29，151.54，136.06，130.90，130.88，120.59，117.72，114.59，114.29，100.53，75.83，71.80，55.53，52.24，43.95，40.23，38.75，34.14，31.84，26.65，20.85;ESI-HR-MS m/z:Calcd for C23H28NO5F2Na{［M+Na］+}458.2，found 458.1。

7-O-(對(duì)二氟氧甲基苯基氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素 A(4j):產(chǎn)率 26.3%;1H NMR δ:7.41(m，2H)，7.28(t，3H)，7.18(t，1H)，7.02(d，J=4.6 Hz，2H)，5.92 ～ 5.98(d，J=15.7 Hz，1H)，5.72(s，2H)，5.33 ～5.21(m，2H)，5.03(s，1H)，4.72(s，1H)，4.03(s，1H)，2.27 ～2.07(m，4H)，1.77 ～1.61(m，4H)，1.50(d，J=8.3 Hz，3H)，1.20(t，J=10.2 Hz，3H)，0.76(s，1H);13C NMR δ:169.43，166.55，153.30，151.97，136.04，130.87，124.45，123.11，120.85，120.57，117.56，116.05，113.96，75.82，72.05，52.28，43.94，40.20，38.83，34.06，31.86，26.69，20.82;ESI-HR-MS m/z:Calcd for C23H29NO6F2Na{［M+Na］+}488.2，found 488.1。

7-O-(鄰三氟甲基苯氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素 A(4k):產(chǎn)率 28.7%;1H NMR δ:7.55(s，2H)，7.38(s，1H)，7.28(s，1H)，7.19(s，1H)，6.88(s，1H)，5.92 ～ 5.98(d，J=15.7 Hz，1H)，5.72(s，2H)，5.33 ～5.21(m，5H)，5.03(s，1H)，4.72(s，1H)，4.03(s，1H)，2.27 ～2.07(m，4H)，1.77 ～ 1.61(m，4H)，1.50(d，J=8.3 Hz，3H)，1.20(t，J=10.2 Hz，3H)，0.76(s，1H);13C NMR δ:166.26，166.19，153.06，151.43，135.81，135.61，132.93，131.07，129.17，126.10，126.05，123.61，117.80，75.79，71.77，52.02，43.95，40.19，38.54，34.14，31.81，26.61，20.83;ESI-HR-MS m/z:Calcd for C23H28NO5F3Na{［M+Na］+}490.2，found 490.5。

7-O-(對(duì)氧甲基苯氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素 A(4l):產(chǎn)率29.7%;1H NMR δ:7.37(d，J=15.7 Hz，1H)，7.28(s，1H)，6.87(d，J=5.2 Hz，1H)，5.92 ～ 5.98(d，J=15.7 Hz，1H)，5.72(s，2H)，5.33 ～ 5.21(m，2H)，5.03(s，1H)，4.72(s，1H)，4.03(s，1H)，2.27 ～2.07(m，4H)，1.77 ～1.61(m，4H)，1.50(d，J=8.3 Hz，3H)，1.20(t，J=10.2 Hz，3H)，0.76(s，1H);13C NMR δ:166.19，152.99，151.41，135.89，135.18，131.44，131.10，131.07，130.76，117.80，111.33，111.16，75.75，71.79，52.16，44.16，43.94，40.18，38.70，34.15，31.83，26.64，20.84;ESI-HR-MS m/z:Calcd for C24H31NO5Na{［M+Na］+}451.2，found 451.1。

7-O-(萘基氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素 A(4m):產(chǎn)率 35.6%;1H NMR δ:7.87(d，J=7.1 Hz，2H)，7.68(d，J=8.2 Hz，1H)，7.62 ～7.43(m，3H)，7.28(s，1H)，7.08(d，J=4.3 Hz，1H)，5.92(d，J=15.6 Hz，1H)，5.82 ～5.57(m，1H)，5.12(dd，J=8.7 Hz，4.5 Hz，1H)，4.85(dd，J=10.4 Hz，5.7 Hz，1H)，4.11(d，J=8.7 Hz，1H)，2.49 ～ 2.05(m，4H)，2.03(d，J=27.9 Hz，1H)，1.93 ～ 1.78(m，3H)，1.77 ～ 1.69(m，1H)，1.67 ～ 1.60(m，1H)，1.57 ～1.45(m，1H)，1.26(t，J=6.2 Hz，3H)，0.92(s，1H);13C NMR δ:166.28，151.67，149.73，136.30，136.01，134.08，132.54，130.74，129.39，128.68，126.26，126.03，125.75，120.65，118.16，117.62，76.49，75.68，71.87，52.12，43.85，41.97，38.71，34.09，31.79，26.83，20.72;ESI-HR-MS m/z:Calcd for C27H31NO5FNa{［M+Na］+}472.2，found 472.1。

7-O-(環(huán)己烷氨基甲酸酯)-布雷菲德菌素A(4n):產(chǎn)率 18.1%;1H NMR δ:7.41 ～7.19(m，1H)，5.92(d，J=15.6 Hz，1H)，5.82 ～ 5.57(m，1H)，5.12(d，J=8.7 Hz，4.5 Hz，1H)，4.85(d，J=10.4 Hz，5.7 Hz，1H)，4.11(d，J=8.7 Hz，1H)，3.50(m，1H)，2.49 ～ 2.05(m，4H)，2.03(d，J=27.9 Hz，1H)，1.93 ～1.78(m，3H)，1.77 ～ 1.69(m，1H)，1.67 ～1.57(m，1H)，1.69 ～ 1.58(m，3H)，1.57 ～1.45(m，4H)，1.26(t，J=6.2 Hz，3H)，0.92(d，J=19.6 Hz，12.7 Hz，1H);13C NMR δ:166.34，156.75，151.63，130.73，130.61，117.65，75.83，75.19，71.73，49.18，43.96，38.74，34.13，33.96，33.46，31.82，26.68，25.63，25.50，25.47，24.95，24.80，20.86;ESI-HR-MS m/z:Calcd for C23H35NO5FNa{［M+Na］+}433.2，found 433.1。

1.3 抗腫瘤活性測(cè)定

將人食管癌細(xì)胞TE-1按5.0×103細(xì)胞/孔均勻種植于細(xì)胞培養(yǎng)96孔板中，置于5%二氧化碳培養(yǎng)箱，于37℃培養(yǎng)24 h。以DMSO為溶劑，配制不同c(4)溶液;向各孔中添加c(4)(每個(gè)重復(fù)處理3次，取平均值)，于37℃培養(yǎng)48 h。每孔中加入10 μL WST-1細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒，于37℃孵育2 h，利用酶標(biāo)儀測(cè)定每孔450 nm處的吸光度(A)，以空白細(xì)胞培養(yǎng)液作為對(duì)照組，計(jì)算c(4)處理后人食管癌細(xì)胞TE-1存活率［存活率/%=(A藥液－A培養(yǎng)液)/(A對(duì)照－A培養(yǎng)液)×100%］。

2 結(jié)果與討論

2.1 合成

本文首次采用異氰酸酯對(duì)3的7-羥基進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，合成了14個(gè)新型的布雷菲德菌素A氨基甲酸酯類衍生物。該方法具有催化劑便宜易得，反應(yīng)條件較溫和等優(yōu)點(diǎn)。

2.2 抗腫瘤活性

4g，4i～4l對(duì)食管癌TE-1細(xì)胞株的腫瘤抑制活性見表1。由表1可見，在各個(gè)用藥量時(shí)，他們中的大部份化合物均失去了對(duì)食管癌TE-1細(xì)胞株的抗腫瘤活性。

表1 4g，4i～4l對(duì)TE-1的抑制活性Table 1 Inhibitions activities of 4g，4i～4l against TE-1 cell

為了從靶位蛋白與小分子作用關(guān)系來(lái)解釋抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們選取4i，4j和4l與蛋白進(jìn)行分子對(duì)接研究。利用DS2.5軟件中的LiDOCK模塊進(jìn)行了分子對(duì)接，結(jié)果見圖1。圖1結(jié)果表明，3被帶苯環(huán)的大基團(tuán)修飾以后，分子空間體積變大。分子4只能結(jié)合在活性區(qū)域的外表面，而不能進(jìn)入3所結(jié)合的活性區(qū)域，與特定的ASP67和TRP78兩個(gè)氨基酸作用，導(dǎo)致4與靶位蛋白的相互作用力減弱，腫瘤抑制活性降低。這就是4喪失抑制食管癌細(xì)胞株TE-1活性的原因。

圖1 4與靶點(diǎn)ARF1-GDP-GEF復(fù)合體的模擬對(duì)接圖Figure 1 Docking for 4 in the ARF1-GDP-GEF interface

3 結(jié)論

首次采用異氰酸酯對(duì)布雷菲德菌素A的7-羥基進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，合成了14個(gè)新型的布雷菲德菌素A氨基甲酸酯類衍生物。布雷菲德菌素A氨基甲酸酯類衍生物的合成及其生物活性評(píng)價(jià)，為布雷菲德菌素A衍生化研究提供借鑒。

［1］Singleton V L，Bohonos N，Ullstrup A J.Decumbin，a new compound from a species of Penicillium［J］.Nature，1958，181:1072 －1073.

［2］Sidhu G S，Singh A K and Raghunath P N.Brefeldin A inhibits the antiviral action of interferon against encephalomyocarditis virus［J］.Vir Res，1996，40:123 －133.

［3］Alexander B，Andrew I，F(xiàn)ishman M D，et al.Attenuation of androgenic regulation by brefeldin A in androgen-responsive prostate cancer cells［J］.Urol Oncol，2013，31(1):104 －109.

［4］Verfaillie T，Garg A D，Agostinis P.Targeting ER stress induced apoptosis and inflammation in cancer［J］.Cancer Letters，2013，332(2):249 －264.

［5］Nojiri H，Manya H，Isoho H.Induction of terminal differentiation and apotosis in human colonic carcinoma cells by Brefeldin A，a drug affecting fanflioside biosynthesis［J］.FEBS Letters，1999，453:140 －144.

［6］Bruening A，Ishikawa T，Kneusel R E.Brefeldin A binds to glutathione S-transferase and is secreted as glutathione and cysteine conjugates by Chinese hamster ovary cells［J］.J Biol Chem，1992，267:7726 －7732.

［7］Anadu N O，Davisson V，Cushman M.Synthesis and anticancer activity of brefeldin A ester derivatives［J］.J Med Chem，2006，49:3897 －3905.

［8］Zhu J W，Hori H，NOjiri H.Synthesis and activity of brefeldin A analogs as induces of cancer cell differentiation and apoptosis differentiation and apoptosis［J］.Bioorg Med Chem Lett，1997，7(2):139 －144.

［9］He B Y，Wang Y J，Zheng Y G，et al.Synthesis and cytotoxic evaluation of acylated brefeldin A derivatives as potential anticancer agents［J］.Chem Biol Drug Des，2013，82(3):307 －316.

［10］Wang Y J，Xue F，Wu Y F.Development of macrolide lactone antibiotic brefeldin A fermentation process with Eupenicillium brefeldianum ZJB082702［J］.J Biosci Bioeng，2012，114:262 －267.

［11］Wang Y J，Wu Y F，Xue F.Isolation of brefeldin A from Eupenicillium brefeldianum broth using macroporous resin adsorption chromatography［J］.Chromatogr B，2012，(895):146 －153.

［12］Charalambides Y C，Moratti S C.Comparison of base-promoted and self-catalyzed conditions in the synthesis of isocyanates from amines using triphosgene［J］.Synthetic Commun，2007，37:1037 －1044.