貓須草提取工藝研究

楊江媛云南省中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明 650000

貓須草提取工藝研究

楊江媛
云南省中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明 650000

目的：考察貓須草的最佳醇提取工藝。方法：以貓須草提取物中總黃酮的含量為指標(biāo)，對不同的提取方法及提取工藝進(jìn)行考察，以確定貓須草的最佳提取工藝。結(jié)果： 95%的乙醇提取烘干的水提藥渣，乙醇用量為15BV/次，提取次數(shù)為2次，每次2.5h。提取方法經(jīng)過中試放大試驗(yàn)后干粉收率達(dá)到20%以上，總黃酮達(dá)到70%以上。結(jié)論：收率較好，該工藝條件可行。

貓須草;總黃酮;提取工藝;收率.

貓須草Clerodendranthusspicatus(Thunb.)C.Y.Wu又名腎茶、牙努秒、貓須公，為唇形科腎茶屬植物。我國貓須草主要分布于廣東、海南、廣西南部、云南南部、臺(tái)灣及福建，常生于林下潮濕處。從上世紀(jì)起，我國多地引種栽培，其中以云南種植最多[1]。貓須草是一種藥食兩用的植物，具有利尿、抗菌、消炎、溶石、排石和抗腫瘤等多種藥理學(xué)作用[2]。有文獻(xiàn)報(bào)道貓須草中的主要化學(xué)成分為黃酮類、酚性化合物、二萜類、三萜類、木脂素類等，其中黃酮類化合物為其主要脂溶性化合物[3-4]。為提高貓須草有效成分提取效率，本實(shí)驗(yàn)以乙醇為提取溶劑，對貓須草的提取工藝進(jìn)行研究和優(yōu)化，為貓須草的優(yōu)質(zhì)開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 試驗(yàn)器材 電子天平(十萬分之一，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；電子天平(萬分之一，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；NKSY型智能恒溫水浴鍋(常州諾基儀器有限公司)；36952型紫外分光光度計(jì)(菲爾伯恩實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司)；昆山超聲清洗儀(安徽東南儀誠試驗(yàn)室設(shè)備有限公司)；R-1001-L旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀(鄭州長城儀器有限公司)；SHZ-D型真空泵(鄭州博科儀器設(shè)備有限公司)

1.2 對照品 蘆丁(中國食品藥品檢驗(yàn)所，批號：121268-200904)。

1.3 藥材 貓須草水提取后低溫干燥的藥粉。

2 方法與結(jié)果

2.1 總黃酮含量測定方法

2.1.1 對照品溶液制備 精密稱取蘆丁對照品16.42mg，甲醇適量置水浴上微熱使溶解，放冷，甲醇定容至50ml，搖勻，即得濃度為0.3284mg/ml的蘆丁對照品溶液。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對照品溶液0.5、1、1.5、2、3、4、5、6ml，分別置25ml量瓶中，各加水至6.0ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15min，以相應(yīng)的試劑為空白，按紫外-可見分光光度法(附錄ⅤA)，在509nm波長處測定吸光度。

以蘆丁含量(μg/ml)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制出總黃酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=0.0107X+0.0012，R2=0.9993，線性范圍為6.568～78.816μg/ml。

表1 總黃酮含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.1.3 供試品制備 稱取浸膏適量，精密稱定，置25 ml錐形瓶中，加甲醇10 ml超聲處理10 min，放冷，精密稱定，甲醇補(bǔ)足重量，搖勻。精密量取5 ml，置10 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取3ml，置25 ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至6 ml”起依法測定吸收度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的濃度(μg/ml)，計(jì)算即得。

2.1.4 醇提液供試品溶液的制備 稱取各個(gè)單因素考察后的干浸膏約0.05g至錐形瓶中，精密稱定，甲醇30ml浸泡1h，超聲提取30 min，放冷，過濾，回收濾液至10ml，用0.45μm的微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.2 提取工藝考察

2.2.1 乙醇濃度 取水提后烘干的藥渣10g，分別加入10倍量濃度為55%、65%、75%、85%、95%的乙醇溶液浸泡藥渣2h后，80℃加熱回流2h，過濾，收集濾液，濾渣同法提取1次，合并濾液，減壓回收溶劑至干，稱定浸膏量及測定總黃酮含量，結(jié)果見表2。

表2 醇提濃度考察

由上表數(shù)據(jù)，當(dāng)用95%的乙醇提取藥渣時(shí)，總黃酮含量最高，此時(shí)的加權(quán)評分最高，因此選擇95%的乙醇提取水提藥渣。

2.2.2 乙醇用量 取水提后烘干的藥渣10g，按照提取工藝，分別加入6、8、10、12、15倍量濃度為95%的乙醇溶液浸泡藥渣2h后，80℃加熱回流2h，過濾，收集濾液，濾渣同法提取1次，合并濾液，減壓回收溶劑至干，稱定浸膏量及測定總黃酮含量，結(jié)果見表3。

表3 乙醇用量考察

由上表數(shù)據(jù)，隨著乙醇用量的增加，加權(quán)評分越高，提取藥材時(shí)每次選擇15倍量的乙醇為最適提取用量。

2.2.3 提取時(shí)間 取水提后烘干的藥渣10g，按照提取工藝，加入15倍量濃度為95%的乙醇溶液浸泡藥渣2h后，分別80℃加熱回流0.5、1.0、1.5、2.0、2.5h，過濾，收集濾液，濾渣同法提取1次，合并濾液，減壓回收溶劑至干，稱定浸膏量及測定總黃酮含量，結(jié)果見表4。

表4 醇提時(shí)間考察

由上表數(shù)據(jù)，乙醇提取時(shí)間越長，浸膏含量越高，加權(quán)評分越大，但隨著提取時(shí)間的增加，經(jīng)濟(jì)成本增加，因此本工藝選擇乙醇提取時(shí)間為每次2.5h。

2.2.4 醇提優(yōu)選試驗(yàn)方案 由以上單因素考察的結(jié)果可知，藥材的醇提最佳提取工藝條件為：95%的乙醇提取烘干的水提藥渣，乙醇用量為15BV/次，提取次數(shù)為2次，每次2.5h。

2.3 乙醇提取小試結(jié)果 取水提后烘干的藥渣5份，每份10g，加入15倍量濃度為95%的乙醇溶液浸泡藥粉1h后，分別80℃加熱回流2.5h，過濾，收集濾液，濾渣同法提取1次，合并濾液，減壓回收溶劑至干，測定浸膏出膏率及總黃酮含量，結(jié)果見表5。

表5 醇提小試結(jié)果

由小試結(jié)果看出，醇提取工藝重復(fù)提取5份藥材RSD值滿足要求，表明該提取工藝穩(wěn)定可行。

3 結(jié)論

3.1 貓須草中化合物的類型主要為總黃酮及黃酮苷類化合物，其中脂溶性成分主要為黃酮類化合物，因此本實(shí)驗(yàn)在水提取后的基礎(chǔ)上，將水提取后的藥材烘干后再用醇提取能得到純度較高的醇提取物。

3.2 采用紫外分光光度法對貓須草中總黃酮含量進(jìn)行測定，操作簡單、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好，所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍能滿足同時(shí)測定藥材、水提取物、醇提取物中總黃酮的含量。

貓須草是我國西南地區(qū)特有的少數(shù)民族藥，經(jīng)過長期實(shí)踐，貓須草在治療泌尿系統(tǒng)疾病方面具有顯著的療效。然而，由于缺乏系統(tǒng)完整的研究，大多數(shù)民族藥還停留在地區(qū)甚至更小的范圍內(nèi)用藥，一些具有顯著療效的民族藥還沒有得到充分的推廣使用。對貓須草提取工藝的研究，不僅有利于民族醫(yī)藥的推廣使用，而且也對民族醫(yī)藥的發(fā)展起到極大的推動(dòng)作用。

[1] 許娜,許旭東,楊峻山. 貓須草的研究進(jìn)展[J] .中草藥,2010,41(5):12-16.

[2] 任文輝,洪儷芳.貓須草的藥理作用研究進(jìn)展[J] .中草藥,2013,44(20):2946-2950.

[3] 高增平,王寶華,江佩芬.不同產(chǎn)地貓須草化學(xué)成分預(yù)試及熊果酸含量對比[J] . 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),1999,22(5):78-79.

[4] 顏文祝,呂于謀,沈文通.貓須草主要化學(xué)成分初步預(yù)試[J] .海峽藥學(xué),1995,7(3):3-4.

R284.2

A

1007-8517(2015)10-0020-02

2015.03.03)