朱先志,劉 勇,田 雷,劉 莉,宗 浩,高 強(qiáng)*,徐 蕊,李蘭芬,張偉娜
(1.山東臨沂煙草有限公司沂水分公司,山東 沂水 276400;2.山東臨沂煙草有限公司,山東 臨沂 276000)
煙田常用殺蟲劑對煙蚜繭蜂的毒力及其保護(hù)酶的影響
朱先志1,劉勇1,田雷2,劉莉1,宗浩2,高強(qiáng)1*,徐蕊1,李蘭芬1,張偉娜1
(1.山東臨沂煙草有限公司沂水分公司,山東 沂水 276400;2.山東臨沂煙草有限公司,山東 臨沂 276000)
摘要:為了篩選對煙蚜繭蜂安全性高的藥劑并明確煙田常用殺蟲劑對煙蚜繭蜂保護(hù)酶的影響,測定了3種煙田常用殺蟲劑對煙蚜繭蜂成蟲的毒力以及不同濃度的吡蟲啉對煙蚜繭蜂成蟲體內(nèi)超氧化物歧化酶、過氧化物酶和過氧化氫酶活性的影響。結(jié)果表明,殺蟲劑對煙蚜繭蜂成蟲的毒力大小順序為:啶蟲脒>高效氯氟氰菊酯>吡蟲啉;從不同濃度的吡蟲啉對煙蚜繭蜂生命活動和防御機(jī)制的影響來看,除LC10濃度吡蟲啉促進(jìn)煙蚜繭蜂成蟲體內(nèi)POD活性提高和3個濃度處理后12 h成蟲CAT活性顯著提高外,其余處理濃度和時間對3種酶的活性呈現(xiàn)抑制作用。此結(jié)果為探明煙蚜繭蜂對殺蟲劑的防御機(jī)制提供了一定的理論依據(jù)。
關(guān)鍵詞:殺蟲劑;煙蚜繭蜂;毒力;酶活性
煙蚜Myzus persicae(Sulzer)是全國煙葉生產(chǎn)中的重要害蟲之一,其吸食煙株營養(yǎng)、排泄蜜露誘發(fā)煤煙病并傳播植物病毒病,導(dǎo)致煙葉產(chǎn)量下降、品質(zhì)變劣,給煙葉生產(chǎn)造成極大損失。目前,防治煙蚜所采取的主要措施為化學(xué)防治。隨著化學(xué)農(nóng)藥多次使用,導(dǎo)致煙蚜抗藥性越來越強(qiáng),亦將煙蚜天敵煙蚜繭蜂Aphidius gifuensis Ashmaed大量殺傷,不僅破壞了煙田生態(tài)系統(tǒng)的自控能力,而且給人體健康、生態(tài)環(huán)境以及烤煙質(zhì)量都帶來了嚴(yán)重的負(fù)面影響。
在煙葉生產(chǎn)上,如何充分保護(hù)和發(fā)揮天敵對蚜蟲的有效控制作用,盡可能地降低農(nóng)藥使用量,生產(chǎn)出安全優(yōu)質(zhì)的煙草制品,一直是煙葉生產(chǎn)害蟲防治的重大課題。通過人工規(guī)模繁殖煙蚜繭蜂可有效控制煙蚜,減少農(nóng)藥使用以及降低生產(chǎn)成本。目前,煙蚜蜂的規(guī)模繁殖與釋放技術(shù)日趨成熟,有利于推廣該項生物防治措施[1-2]。昆蟲在長期進(jìn)化過程中,除形成大量的降解外來有害化合物的解毒酶系外,還存在著超氧化物歧化酶(Superoxide dismustase,簡稱SOD)、過氧化物酶(Peroxidase,簡稱POD)和過氧化氫酶(Catalse,簡稱CAT)等各種保護(hù)酶系,其主要功能是清除昆蟲體內(nèi)的自由基,防御活性氧或其他過氧化物自由基對細(xì)胞膜系統(tǒng)的傷害[3-5]。在正常生理狀態(tài)下,昆蟲體內(nèi)的這3種酶和自由基維持在一定的平衡狀態(tài),但在受到殺蟲劑、病原菌、微孢子蟲、極端溫度等逆境條件脅迫時,會誘導(dǎo)其含量水平發(fā)生改變[6-9]。本項研究基于當(dāng)前臨沂煙區(qū)害蟲發(fā)生與防治的現(xiàn)實情況,擬通過釋放天敵煙蚜繭蜂、使用對天敵比較安全的選擇性殺蟲劑等措施,達(dá)到有效控制害蟲的天敵種群數(shù)量,使之保持相對穩(wěn)定,并能與化學(xué)防治相聯(lián)合,在煙蚜遷飛高峰期能發(fā)揮持續(xù)控制害蟲危害的作用。本研究旨在最大限度地減少化學(xué)農(nóng)藥的使用量,將化學(xué)農(nóng)藥對天敵煙蚜繭蜂的影響降到最低,充分發(fā)揮天敵的持續(xù)控制作用,達(dá)到降低農(nóng)藥殘留,生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)安全綠色煙葉的目的。
本文通過藥膜法測定了3種煙田常用殺蟲劑對煙蚜繭蜂成蟲的毒力[10-11];測定不同濃度的吡蟲啉對煙蚜繭蜂成蟲體內(nèi)超氧化物歧化酶、過氧化物酶和過氧化氫酶活性的影響。為深入研究煙蚜繭蜂對殺蟲劑的防御機(jī)理,更好地利用殺蟲劑和天敵聯(lián)合防治、確定用藥安全劑量和濃度提供理論依據(jù)。
1.1試驗材料
1.1.1供試?yán)ハx煙蚜繭蜂由臨沂煙草天敵昆蟲繁育基地提供,該基地配備溫濕度自動控制系統(tǒng),常年可保持溫度17~27 ℃,相對濕度50%~80%,滿足煙蚜繭蜂等天敵昆蟲生長與繁殖條件。煙蚜繭蜂采用羽化24 h的成蜂供試。
1.1.2供試藥劑25 g/L高效氯氟氰菊酯乳油(利爾化學(xué)股份有限公司);200 g/L吡蟲啉可溶液劑(德國拜耳作物科學(xué)公司);5%啶蟲脒乳油(江蘇龍燈化學(xué)有限公司)。
1.2試驗方法
1.2.1毒力測定方法根據(jù)農(nóng)藥推薦使用劑量,試驗采用藥膜法進(jìn)行,將藥劑稀釋5~6個濃度,以丙酮處理做空白對照,每個濃度組重復(fù)3次。參照文獻(xiàn)[12]的方法,用移液槍吸取0.2 mL藥液滴入試管(4 cm×15 cm)中,塞上試管口,迅速傾斜并轉(zhuǎn)動試管,形成一層均勻的藥膜,待丙酮揮發(fā)后,試管內(nèi)壁放入浸有10%蜂蜜水的脫脂棉條(飽和,不滴水),隨后接入20頭煙蚜繭蜂成蟲,并用脫脂棉條封口,讓其爬行充分接觸藥膜2 h后,在人工氣候室溫度25 ℃、相對濕度80%、光周期L//D=12 h//12 h條件下,于藥劑處理后24 h檢查并記錄管中存活和死亡的成蜂數(shù)量(日光照射下輕敲試管不動即判定煙蚜繭蜂死亡)。用Abbott公式計算校正死亡率,對照組死亡率不能高于20%。
1.2.2煙蚜繭蜂成蟲處理方法根據(jù)吡蟲啉對煙蚜繭蜂成蟲生物測定的結(jié)果LC50(77.712 mg/L),選用LC10(8.524 mg/L)、LC20(18.202 mg/L)、LC30(50.203 mg/L)3個濃度作為亞致死劑量(此數(shù)據(jù)來源于1.2.1測定結(jié)果)。采用藥膜法同1.2.1。每處理20頭成蟲,重復(fù)3次。于藥劑處理后分別在飼養(yǎng)12、24、48 h收集試蟲備用。
1.2.3保護(hù)酶活力的測定方法超氧化物歧化酶(SOD)活力的測定:采用氮藍(lán)四唑光化還原法測定[13];過氧化物酶(POD)活力的測定:采用愈創(chuàng)木酚比色法[14-15];過氧化氫酶(CAT)活力的測定:采用紫外分光光度法[14]。
1.3數(shù)據(jù)處理
用DPS軟件計算LC50及95%置信區(qū)間,差異顯著性分析采用Duncan新復(fù)極差法。
2.13種殺蟲劑對煙蚜繭蜂成蟲的毒力
采用藥膜法測定了吡蟲啉、高效氯氟氰菊酯、啶蟲脒3種常用殺蟲劑對煙蚜繭蜂成蟲的毒力。由表1可知,3種供試藥劑中,200 g/L吡蟲啉可溶液劑對煙蚜繭蜂的LC50值最高,為77.712 mg/L,其次分別為25 g/L高效氯氟氰菊酯乳油(41.902 mg/L)、5%啶蟲脒乳油(26.263 mg/L)。其毒力次序為:啶蟲脒>高效氯氟氰菊酯>吡蟲啉。
表1 3種殺蟲劑對煙蚜繭蜂成蟲的毒力(藥后24 h)Tab1e 1 Toxicity of 3 insecticides to adults of Aphidius gifuensis Ashmead by spraying method (24 h after drug)
2.2吡蟲啉對煙蚜繭蜂成蟲SOD活性的影響
不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的吡蟲啉處理煙蚜繭蜂成蟲12、24和36 h后,對體內(nèi)超氧化物歧化酶的活性進(jìn)行了測定(圖1)。結(jié)果表明,質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8.524、18.202和50.203 mg/L在12和24 h對SOD活性均表現(xiàn)為抑制作用,除18.202 mg/L處理組在24 h差異不顯著外,其他均為顯著抑制。且3個處理組均在12 h對SOD的活性抑制作用最強(qiáng),活性分別為44.67、41.34和33.46 U/mg,比對照分別降低了36.57%、41.30%和52.49%。隨著時間的增加,各處理組對SOD活性的抑制作用均逐漸減弱。在48 h,8.524和18.202 mg/L處理組對SOD活性轉(zhuǎn)變?yōu)轱@著激活,SOD活性分別比對照提高了50.89%和35.22%。50.203 mg/L處理組仍表現(xiàn)為抑制作用,但抑制率從52.49%減小到12.99%。結(jié)果顯示,不同質(zhì)量濃度的吡蟲啉對煙蚜繭蜂成蟲體內(nèi)SOD活性在初期均表現(xiàn)為抑制作用,隨著作用時間的增加,抑制作用逐漸減弱,較低濃度對SOD活性的影響轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ钭饔谩?/p>
圖1 吡蟲啉對煙蚜繭蜂成蟲SOD活力的影響Fig. 1 Change in SOD activities in adults of Aphidius gifuensis Ashmead after exposure to imidacloprid for different time
2.3吡蟲啉對煙蚜繭蜂成蟲POD活性的影響
不同質(zhì)量濃度的吡蟲啉處理煙蚜繭蜂成蟲12、24和36 h后,對藥劑濃度與體內(nèi)POD活性之間的關(guān)系進(jìn)行了測定(圖2)。測定結(jié)果表明,質(zhì)量濃度為8.524 mg/L處理組在12、24和48 h對POD活性表現(xiàn)為激活作用,在48 h POD活性最高且激活作用最強(qiáng),為1.69 U/(mg·min),比對照提高56.48%。50.203 mg/L處理組在12、24和48 h均表現(xiàn)為抑制作用,其中在12和24 h表現(xiàn)為顯著抑制。抑制率最大(12 h)為60.19%。18.202 mg/L處理組在各個時間點(diǎn)和對照組差異不明顯。吡蟲啉對煙蚜繭蜂成蟲體內(nèi)POD活性表現(xiàn)為:低濃度誘導(dǎo),高濃度抑制,且低濃度的誘導(dǎo)作用隨時間的增加而增強(qiáng),高濃度的抑制作用隨時間的增加而減弱。
2.4吡蟲啉對煙蚜繭蜂成蟲CAT活性的影響
不同濃度的吡蟲啉對煙蚜繭蜂成蟲處理12、24和48 h后,體內(nèi)CAT活性的測定結(jié)果(圖3)顯示,質(zhì)量濃度為8.524和18.202 mg/L處理組在12 h對CAT的活性均表現(xiàn)為顯著激活作用,分別為10.22 和9.67 U/(mg·min),比對照提高66.99%和58.01%。50.203 mg/L處理組在12 h也表現(xiàn)為激活作用,但差異不明顯。隨著時間的增加,各處理組CAT的活性顯著降低,至48 h 表現(xiàn)為顯著抑制作用,分別為4.43、3.87和2.97 U/(mg·min),比對照降低30.12%、38.96%和53.15%。結(jié)果表明,吡蟲啉對煙蚜繭蜂成蟲體內(nèi)CAT的活性影響為先激活后抑制。
圖2 吡蟲啉對煙蚜繭蜂成蟲POD活力的影響Fig. 2 Change in POD activities in adults of Aphidius gifuensis Ashmead after exposure to imidacloprid for different time
圖3 吡蟲啉對煙蚜繭蜂成蟲CAT活力的影響Fig. 3 Change in CAT activities in adults of Aphidius gifuensis Ashmead after exposure to imidacloprid for different time
測定了3種煙田常用殺蟲劑對煙蚜繭蜂成蟲的毒力,結(jié)果表明,200 g/L吡蟲啉可溶液劑對煙蚜繭蜂成蟲的影響較小,其次分別是5%啶蟲脒乳油、25 g/L高效氯氟氰菊酯乳油。吡蟲啉屬新煙堿類殺蟲劑,具有高效、低毒、低殘留等特點(diǎn),可選擇性抑制昆蟲中樞神經(jīng)系統(tǒng)煙酸乙酰膽堿酶受體,進(jìn)而阻斷昆蟲中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常傳導(dǎo),造成害蟲出現(xiàn)麻痹、死亡[16]。有研究發(fā)現(xiàn)吡蟲啉對天敵七星瓢蟲安全[17]。在麥田噴施啶蟲脒后3 d內(nèi),對麥蚜的主要天敵蚜繭蜂和瓢蟲影響較大,兩種天敵數(shù)量銳減,但到7 d時蚜繭蜂數(shù)量有所回升。Suh等[18]研究發(fā)現(xiàn)高效氯氟氰菊酯處理擬暗褐赤眼蜂卵至蛹期能顯著降低成蜂的羽化率。因此,在防治時可考慮選擇200 g/L吡蟲啉可溶液劑殺蟲劑以保護(hù)煙蚜繭蜂。
本試驗結(jié)果表明,吡蟲啉對煙蚜繭蜂的幾種主要保護(hù)酶的活性有明顯影響,且隨處理時間長短影響不同,煙蚜繭蜂成蟲對不同濃度吡蟲啉做出不同程度的應(yīng)激反應(yīng)。不同濃度的吡蟲啉對于POD、CAT活性的影響總體表現(xiàn)為先激活后抑制,可能是低濃度的殺蟲劑引起了煙蚜繭蜂的自身保護(hù)反應(yīng),對其體內(nèi)保護(hù)酶的活性有促進(jìn)作用,但隨著藥劑濃度的增加和處理時間的延長,煙蚜繭蜂自身防衛(wèi)能力逐漸下降,保護(hù)酶的合成能力受到抑制,對機(jī)體內(nèi)自由基的清除能力減弱,從而引起煙蚜繭蜂受到不同程度的傷害[22]。不同濃度的吡蟲啉處理后的煙蚜繭蜂成蟲SOD活性為先抑制后激活,可能與吡蟲啉的作用機(jī)制有關(guān)[16]。昆蟲的保護(hù)酶系的產(chǎn)生與生物的逆境出現(xiàn)有關(guān),在維持機(jī)體正常生理功能方面有重要作用,在面對生理逆境時,昆蟲體內(nèi)原有的保護(hù)酶系統(tǒng)平衡被破壞,導(dǎo)致自由基清除系統(tǒng)出現(xiàn)障礙,體內(nèi)自由基水平發(fā)生變化,SOD、POD、CAT參與作用響應(yīng)而改變活性[7,19]。
本研究結(jié)果與較多研究結(jié)果一致,昆蟲在遇到不利環(huán)境條件如殺蟲劑作用下,其體內(nèi)保護(hù)酶的變化規(guī)律往往表現(xiàn)不同。查黎春[20]研究了3種農(nóng)藥對天幕毛蟲、舞毒蛾幼蟲SOD、CAT活性的影響,其中阿維菌素對SOD有顯著激活作用,而對CAT有不同程度的激活或抑制。趙俊紅等[21]研究了SO2對異色瓢蟲保護(hù)酶的影響,結(jié)果表明,SO2低濃度處理可以一定程度上促進(jìn)異色瓢蟲成蟲體內(nèi)保護(hù)酶活性,但高濃度處理對保護(hù)酶活性有一定降低作用。本研究結(jié)果為探明煙蚜繭蜂對殺蟲劑的抵御反應(yīng)提供了一定的理論依據(jù),但是要明確其中的機(jī)制及保護(hù)酶的作用方式還有待深入研究。
測定了3種煙田常用殺蟲劑對煙蚜繭蜂成蟲的毒力,結(jié)果表明,200 g/L吡蟲啉可溶液劑對煙蚜繭蜂成蟲的影響較小。其次分別是5%啶蟲脒乳油、25 g/L高效氯氟氰菊酯乳油。殺蟲劑對煙蚜繭蜂成蟲體內(nèi)保護(hù)酶的活性有明顯影響,且隨處理時間長短影響不同,煙蚜繭蜂成蟲對不同濃度吡蟲啉做出不同程度的應(yīng)激反應(yīng)。總體上,低濃度的殺蟲劑對煙蚜繭蜂體內(nèi)保護(hù)酶的活性有促進(jìn)作用,但隨著藥劑濃度的增加和處理時間的延長,保護(hù)酶的合成能力受到抑制。
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中圖分類號:S435.72
文章編號:1007-5119(2015)03-0072-05
DOI:10.13496/j.issn.1007-5119.2015.03.014
基金項目:山東省煙草專賣局項目“山東煙區(qū)蚜繭蜂防治煙蚜技術(shù)推廣應(yīng)用”(KN227)
作者簡介:朱先志,男,農(nóng)藝師,主要從事烤煙新技術(shù)推廣工作。E-mail:13563940038@163.com。*通信作者,E-mail:lyysgq@139.com
收稿日期:2014-12-25修回日期:2015-05-20
Effects of Conventional Insecticides on Aphidius Gifuensis Ashmead and Its Protective Enzymes in Tobacco Fields
ZHU Xianzhi1, LIU Yong1, TIAN Lei2, LIU Li1, ZONG Hao2,GAO Qiang1*, XU Rui1, LI Lanfen1, ZHANG Weina1
(1. Linyi Tobacco Company of Shandong Province, Yishui, Shandong 276400, China; 2. Linyi Tobacco Company of Shandong Province, Yishui Branch Linyi, Shandong 276000, China )
Abstract:In order to screen for safer insecticides to Aphidius gifuensis Ashmead and know about the effects of conventional insecticides on protective enzymes of Aphidius gifuensis Ashmead in tobacco fields, toxicity of three conventional insecticides to Aphidius gifuensis Ashmead was determined via the residual film method. Effects of different concentrations of imidacloprid on SOD,POD and CAT activities of Aphidius gifuensis Ashmead was also determined. The results showed that the order from high toxicity to low toxicity was: acetamiprid >lambda-cyhalothrin >imidacloprid. In terms of the effects of different concentrations of imidacloprid on the life activities of Aphidius gifuensis Ashmead and their defense mechanisms, all the treatments showed inhibition on enzyme activities except that the LC10concentration of imidacloprid improved POD activities in adults and CAT activities increased significantly in adults after 12h treatment of three concentrations. This result provides theory basis for understanding the defense mechanisms of Aphidius gifuensis Ashmead against insecticides.
Keywords:insecticides; Aphidius gifuensis Ashmead; toxicity; enzyme activity