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    胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝生產(chǎn)性能和血液生化指標的影響

    2015-04-18 02:56:24李德生徐晗滕戰(zhàn)偉周海柱高光婁玉杰吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院吉林長春130118
    中國畜牧雜志 2015年19期
    關(guān)鍵詞:雛鵝孵化率種蛋

    李德生,徐晗,滕戰(zhàn)偉,周海柱,高光,婁玉杰(吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,吉林長春130118)

    胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝生產(chǎn)性能和血液生化指標的影響

    李德生,徐晗,滕戰(zhàn)偉,周海柱,高光,婁玉杰*
    (吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,吉林長春130118)

    本試驗旨在研究胚蛋注射蛋氨酸(Met)對朗德鵝生產(chǎn)性能和血液生化指標的影響。將300枚種蛋分為2組,每組3個重復(fù),每個重復(fù)50枚種蛋。在孵化第24天進行蛋氨酸胚蛋注射,對照組不進行任何處理,處理組注射Met 5 g/L,NaCl 7.5 g/L的營養(yǎng)液1.5 mL。出雛后,每個重復(fù)選取體重均勻和健康的雛鵝20只進行飼養(yǎng)試驗,飼養(yǎng)期28 d。結(jié)果表明:處理組對孵化率無顯著影響(P>0.10),但顯著提高朗德鵝初生重和1~14日齡平均日增重(P<0.05),同時顯著降低了飼料增重比(P<0.05);處理組對卵黃囊和肝臟指數(shù)無顯著影響(P>0.10),但顯著提高了雛鵝第28天胸肌指數(shù)(P<0.05);處理組顯著提高了雛鵝第14天血清中總蛋白的含量(P<0.05),同時有提高血清中白蛋白含量的趨勢(0.05≤P<0.10);在第28天,處理組有提高雛鵝血清中總蛋白和白蛋白的趨勢(0.05≤P<0.10);處理組顯著降低了雛鵝第14和28天血清中尿酸的含量(P<0.05)。試驗結(jié)果顯示,在孵化后期種蛋注射蛋氨酸可顯著提高朗德鵝初生重和改善1~14日齡生產(chǎn)性能,其可能與鵝體內(nèi)氨基酸利用和蛋白質(zhì)沉積提高有關(guān)。

    胚蛋注射;蛋氨酸;鵝;生產(chǎn)性能;血液生化指標

    蛋氨酸是飼喂玉米-豆粕型日糧家禽的第一性限制氨基酸,缺乏時會限制其他氨基酸以及整體營養(yǎng)物質(zhì)的利用,蛋氨酸可影響動物機體氮和脂類等營養(yǎng)物質(zhì)利用,其作用可通過血清中相關(guān)指標體現(xiàn)。蛋氨酸可通過提高氨基酸利用和改變肌肉生長相關(guān)mRNA的表達來促進肉雞胸肌合成[1]。但是蛋氨酸也是毒性最大的氨基酸,前人研究表明,日糧中蛋氨酸含量超過1.17%會對3~6周齡北京鴨產(chǎn)生毒性而影響其生長性能[2]。胚蛋注射技術(shù)是指在孵化期將外源性營養(yǎng)物質(zhì)注射到家禽的胚蛋中。研究表明,胚蛋注射營養(yǎng)物質(zhì)促進家禽出殼前后腸道發(fā)育、能量儲備和胚胎發(fā)育等,將會對出雛后生長產(chǎn)生一定的影響[3-6]。朗德鵝是優(yōu)秀的肝用品種,具有肝用性能好,耐粗飼、生長快、耗料少、抗病力強、肉質(zhì)好營養(yǎng)價值高的特點。因此,本試驗旨在探索通過孵化后期胚蛋注射蛋氨酸來提高朗德鵝初生重和生產(chǎn)性能的可行性,為胚蛋注射在鵝營養(yǎng)方面研究提供理論和實踐基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料試驗所用種蛋購于吉林省梅河口市德坤禽類食品有限公司,種蛋保存時間均在7 d以內(nèi)。DL-蛋氨酸購于諾偉司飼料添加劑(上海)有限公司,其純度純度≥99%。所用孵化器為科裕CFZ微電腦全自動孵化機(德州科裕孵化設(shè)備有限公司)。

    1.2 試驗設(shè)計本試驗采用單因素隨機區(qū)組設(shè)計。將300枚朗德鵝種蛋分為2組,每組3個重復(fù)(每個重復(fù)分別位于孵化箱內(nèi)的不同托盤上),每個重復(fù)50枚種蛋。于種蛋孵化第24天進行胚蛋注射,對照組不進行注射,而注射組每枚種蛋注射Met 5 g/L,NaCl 7.5 g/L的營養(yǎng)液1.5 mL。孵化30 d出雛后,每個重復(fù)選取體重均勻,健康雛鵝20只進行飼養(yǎng),飼養(yǎng)期28 d。

    1.3 種蛋選擇與孵化鵝種蛋選擇要求:選擇母鵝產(chǎn)蛋史、產(chǎn)次和營養(yǎng)攝入相近種鵝的合格種蛋300枚,根據(jù)儲存時間(7 d內(nèi))、蛋重和蛋形指數(shù)分為3個重復(fù),每個重復(fù)50枚種蛋。鵝孵化采用變溫孵化,采用全進全出制,將整個孵化期分3個階段,分別為前期1~14 d、中期15~28 d和后期29~31 d,溫度和濕度分別為37.8℃和70%、37.5℃和65%、36.5℃和72%。在孵化的第29天將胚蛋轉(zhuǎn)入出雛機內(nèi)進行出雛。由于鵝蛋蛋殼表面積相對小,氣孔小,散熱緩慢,在孵化后期,鵝胚代謝加強會產(chǎn)生大量生理熱,此時若不及時排除蛋內(nèi)過多的積熱,就會影響胚胎發(fā)育或造成死胎。因此在孵化后期要進行涼蛋,在孵化的第18~24天,每天涼蛋1次,在孵化第25~28天,每天涼蛋3次,涼蛋標準是當(dāng)?shù)皽亟抵?5℃左右時繼續(xù)孵化。翻蛋周期為2 h,翻蛋時間為180 s,孵化前期注意控溫,孵化中后期注意通風(fēng)。其他孵化管理按常規(guī)孵化程序進行。

    1.4 胚蛋注射首先,將注射液和石蠟經(jīng)高壓滅菌(121℃,15 min),注射液冷卻至孵化機內(nèi)溫度才能注射。胚蛋注射參照Tako等[7]描述的方法,并稍加修改。具體操作:注射前,通過照蛋的方法確定羊膜腔位置,用75%酒精棉在鈍端注射部位消毒,并在消毒區(qū)域鉆1 mm左右小孔,隨后用5 mL注射器垂直進針(深度為2 cm左右),將注射液注射到羊膜腔中(1.5 mL/枚),1枚胚蛋用1枚針頭。注射完畢后對鉆孔部位再次用75%酒精棉消毒,并立即用酒精燈灼燒滅菌后的石蠟封閉鉆孔處,隨后按正常孵化程序繼續(xù)孵化。

    1.5 飼養(yǎng)管理參照NRC(1994)鵝營養(yǎng)需要配制飼糧[8](表1),出殼后雛鵝分為3個重復(fù)進行飼養(yǎng),在出殼后12 h內(nèi)開水,24 h內(nèi)開食,并提供充足的光照。在出殼后的第1和5天皮下注射小鵝瘟疫苗。

    表1 基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)成分(風(fēng)干基礎(chǔ))

    1.6 樣品采集與保存在孵化的第0天(入孵前,E0)、第23天(E23)第27天(E27)、出殼當(dāng)天0天(出殼2 h以內(nèi),0 d)、第1天(出殼后24 h,1 d)、第4天(4 d)第7天(7 d)、第14天(14 d)、第21天(21 d)和第28天(28 d)從每組選取6羽(每個重復(fù)2羽)鵝胚/雛鵝進行組織樣品采集,試驗雛鵝采血結(jié)束,頸部放血致死,取組織樣品卵黃囊、肝臟整體和兩側(cè)胸肌進行稱重并記錄。在雛鵝第14和第28天頸靜脈取血液樣品5 mL于離心管中,3 000×g離心15 min,將上清液分裝與0.5 mL的Eppendorf管中,置-80℃低溫冰箱中保存待測。

    1.7 指標測定與方法

    1.7.1 孵化率測定待對照組與注射組雛鵝出齊后,按重復(fù)計算孵化率,其中胚蛋注射前(孵化第23天)通過照蛋檢測到的死胚不統(tǒng)計在內(nèi)。

    1.7.2 生產(chǎn)性能測定分別于出殼后第1、14、28日齡按重復(fù)數(shù)記錄體重和采食量,計算平均日采食(ADFI)量、平均日增重(ADG)和飼料增重比(F/G)。1.7.3相對組織重測定于取樣前記錄孵化第E23和E27,出殼后的第0、1、4、7、14、21、28天的胚蛋、鵝胚/雛鵝重量。將分離卵黃囊、肝臟和胸肌稱重,根據(jù)記錄胚蛋重、體重、卵黃囊、肝臟和胸肌重量,計算相對組織重。

    1.7.4 血液常規(guī)分析測定血漿中葡萄糖、甘油三酯、膽固醇、總蛋白、白蛋白、尿酸、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶含量采用日立7170A型全自動生化分析儀測定,試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。

    1.8 統(tǒng)計分析試驗數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2013整理后,用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,取樣不同時間點處理采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)進行統(tǒng)計分析,對照組與處理組間采用T-text進行差異顯著性檢驗,以P<0.05為顯著性判斷標準和0.05≤P<0.10為有趨勢判斷標準。結(jié)果以平均值±標準誤表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝種蛋孵化率和生產(chǎn)性能的影響由圖1可知,胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝受精蛋孵化率無顯著性影響(P>0.05)。但胚蛋注射顯著影響1~14日齡朗德鵝生長性能(P<0.05,圖2、表2),胚蛋注射蛋氨酸顯著提高了朗德鵝初生重和1~14日齡朗德鵝的日增重(P<0.05),同時顯著降低了飼料增重比(P<0.05),但對其采食量無顯著性影響(P>0.05)。胚蛋注射蛋氨酸對15~28、1~28日齡的生產(chǎn)性能均無顯著性影響(P>0.05)。

    圖1 胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝孵化率的影響

    圖2 胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝初生重的影響

    表2 胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝生產(chǎn)性能的影響

    2.2 胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝器官指數(shù)的影響由圖3可知,從E23到4 d卵黃囊指數(shù)顯著降低(P<0.05),但在4 d與7 d之間無顯著性差異(P>0.05),而在第7天的時候卵黃囊由于吸收完全消失。在孵化第24天注射蛋氨酸對雛鵝E27、0 d、1 d和4 d的卵黃囊指數(shù)無顯著性影響(P>0.05,表3)。

    由圖3可知,肝臟指數(shù)隨著時間的變化呈先增長在降低的變化趨勢。在第0、1、4天肝臟指數(shù)顯著性的增加(P<0.05),而從第4天到第7天達到了最大值的平臺期。隨后,在第14、28天肝臟指數(shù)顯著性的降低(P<0.05)。孵化第24天注射蛋氨酸對雛鵝第1、14、28天的肝臟指數(shù)無顯著性的影響(P>0.05,表3)。

    圖3 孵化后期和雛鵝不同日期器官指數(shù)的變化

    由圖3可知,胸肌指數(shù)隨著時間的變化呈先減少后增加的變化趨勢。在第E27和0、7 d雛鵝的胸肌指數(shù)顯著性的降低(P<0.05),而在第14天達到了最小值。隨后,在第21天雛鵝肝臟指數(shù)顯著性的提高(P<0.05)。胚蛋注射蛋氨酸顯著性的提高了雛鵝第28天胸肌指數(shù)(P<0.05),但對雛鵝第1和14天胸肌指數(shù)無顯著性影響(P>0.10,表3)。

    2.3 胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝血液生化指標的影響由表4可知,胚蛋注射蛋氨酸顯著提高了雛鵝第14天血清中總蛋白的含量(P<0.05),同時有提高血清中白蛋白含量的趨勢(0.05≤P<0.10)。在第28天,胚蛋注射蛋氨酸有提高雛鵝血清中總蛋白和白蛋白的趨勢(0.05≤P<0.10)。胚蛋注射蛋氨酸顯著降低了雛鵝第14和28天血清中尿酸含量(P<0.05)。胚蛋注射蛋氨酸對不同時間點雛鵝血清中血糖、甘油三酯、膽固醇、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶均無顯著性影響(P>0.10)。

    表3 胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝器官指數(shù)的影響

    3 討論

    3.1 胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝種蛋孵化率和生產(chǎn)性能的影響孵化率是衡量胚蛋注射處理成功與否的重要指標之一。胚蛋注射對家禽營養(yǎng)調(diào)控的作用可能通過降低孵化后期胚胎死亡而提高種蛋的孵化率[5]。胚蛋注射液的滲透壓是影響孵化率的重要因素[9]。而胚蛋注射維生素C 3 mg(0.1 mL的生理鹽水溶液)能顯著提高肉雞孵化率[10]。本研究發(fā)現(xiàn),胚蛋注射蛋氨酸5 g/L、NaCl 7.5 g/L的溶液對孵化率無顯著作用,這與De Oliveira[9]在火雞上的研究一致。表明本試驗胚蛋注射蛋氨酸5 g/L、NaCl 7.5g/L的溶液處理是成功的,可用于進一步研究。

    表4 胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝血液生化指標的影響

    種蛋孵化后期胚胎快速生長,而胚胎生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)只能來源于種蛋,由于種蛋的營養(yǎng)物有限,因此不能使胚胎后期生長達到最大化。胚蛋注射3 mg維生素C能夠顯著提高肉雞的初生重和肉雞生長后期的ADFI[10]。而前人研究表明在孵化后期進行胚蛋注射營養(yǎng)物質(zhì)可提高家禽初生重和初殼后的生長[11]。蛋氨酸可通過提高肌生成因子5(Myf5)和肌細胞增強因子2B(MEF2B)mRNA,同時降低肌肉生長抑制素mRNA的表達來促進肉雞胸肌增長[1]。本試驗結(jié)果表明,胚蛋注射蛋氨酸可顯著提高朗德鵝的初生重和生長前期(1~14日齡)的ADG,同時顯著降低了F/G。這可能是胚蛋后期注射蛋氨酸提高了其腸道和肌肉的發(fā)育。

    3.2 胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝器官指數(shù)的影響器官指數(shù)是研究機體器官發(fā)育的方法之一。器官指數(shù)在一定程度上反映了器官的發(fā)育狀況。卵黃囊在禽類發(fā)育過程中具有特殊的作用,其主要作用是為機體提供大量營養(yǎng)物質(zhì),特別是在出殼前后,卵黃囊可以維持肉雞出殼后一周內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)。在家禽出殼后,卵黃囊的吸收也是影響其生長的重要因素。本試驗研究表明,從E23到4 d朗德鵝卵黃囊指數(shù)顯著降低,而在7 d卵黃囊基本完全吸收。胚蛋注射蛋氨酸并沒有影響卵黃囊指數(shù)。

    肝臟是機體重要的代謝器官,朗德鵝是世界鵝肝產(chǎn)量最高的品種,其肝臟發(fā)育直接影響機體健康和鵝肝產(chǎn)量。本試驗研究表明朗德鵝肝臟指數(shù)在胚胎后期和雛鵝生長期(1~28日齡)程先增加再減少的趨勢生長,而在出殼后第4天達到最大值。由結(jié)果可以看出,從雛鵝出殼當(dāng)天到4 d肝臟指數(shù)顯著增加,是肝臟的快速生長階段。胚蛋注射蛋氨酸沒有對肝臟指數(shù)產(chǎn)生影響。

    胸肌是家禽蛋白質(zhì)沉積的組織,其發(fā)育情況在一定程度上反映了家禽對蛋白質(zhì)的沉積情況。在孵化后期肉鴨骨骼肌發(fā)生了負增長現(xiàn)象[6]。而前人研究表明,通過胚蛋注射營養(yǎng)物質(zhì)可顯著提高胸肌的絕對和相對重量[5]。本試驗研究表明,朗德鵝胸肌指數(shù)在胚胎后期和雛鵝生長期(1~28日齡)呈先減少再增加的趨勢生長,而在出殼后第14天達到最小值。從E23到0 d胸肌指數(shù)顯著降低??赡苁窃诜趸笃谀c道快速發(fā)育和機體的代謝加強,胸肌的生長出現(xiàn)生長停滯或是出現(xiàn)胸肌負增長現(xiàn)象所致。從14 d到21 d胸肌指數(shù)出現(xiàn)了顯著的提高,此階段是機體蛋白質(zhì)的快速沉積階段。胚蛋注射蛋氨酸也顯著提高了28 d的胸肌指數(shù)。可能是蛋氨酸增加了肌肉蛋白的沉積[12-13],進而增加了胸肌指數(shù)。

    3.3 胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝血液生化指標的影響血清中總蛋白、白蛋白、甘油三酯、膽固醇和葡萄糖表示了一般的營養(yǎng)狀態(tài)。尿酸的含量通常用來表示家禽對氨基酸的利用。本研究表明,胚蛋注射蛋氨酸顯著提高了血清中總蛋白的含量和有提高血清中白蛋白的趨勢,同時顯著降低了血清中尿酸的含量。此結(jié)果表明,胚蛋注射蛋氨酸提高了朗德鵝對蛋白質(zhì)的利用。日糧氨基酸對泰和烏骨雞血清尿素氮含量影響中發(fā)現(xiàn),總蛋白濃度高說明沉積于體內(nèi)的蛋白質(zhì)水平高[14],血清中轉(zhuǎn)氨酶的活性可反映肝細胞損傷程度,因此檢測轉(zhuǎn)氨酶是判斷肝臟損害程度的重要依據(jù)。當(dāng)肝細胞遭受破壞或細胞膜通透性增加時,谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶酶等酶滲入血液,致使血液中這些酶的活性顯著升高。飼料中添加高于1%的蛋氨酸可顯著降低肉仔雞日增重和采食量[15],飼料中過量的蛋氨酸可通過氧化損傷和DNA高度甲基化而對北京鴨肝臟造成損傷[16]。本試研究表明,胚蛋注射蛋氨酸的量沒有影響血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的含量。由此說明,胚蛋注射蛋氨酸5 g/L、NaCl 7.5 g/L的溶液對朗德鵝的肝臟沒有造成損傷。

    4 結(jié)論

    本研究表明,胚蛋注射蛋氨酸對朗德鵝孵化率無顯著性影響,因此在本試驗注射條件可進行研究。胚蛋注射蛋氨酸提高了朗德鵝的初生重和1~14日齡的平均日增重,降低了飼料增重比;提高了28日齡朗德鵝的胸肌指數(shù);提高了血清中總蛋白和白蛋白的含量,而且降低了血清中尿酸的含量。

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    Effect of in Ovo Injection of Methionine on Growth Performance and Serum Profile in Landaise Geese

    LI De-sheng,XU Han,TENG Zhan-wei,ZHOU Hai-zhu,GAO Guang,LOU Yu-jie*
    (College of Animal Science and Technology,Jilin Agricultural University,Jilin Changchun 130118,China)

    The aim of the present study was to investigate the effect of in ovo injection of methionine on growth performance and serum profile in Landaise geese.A total of 300 hatching eggs hatched by Landaise geese breeders were randomly divided into 2 treatments(Con and Met)with 3 replicates per treatment and 50 eggs in each replicate.At 24 d of incubation,fertile eggs were injected with 1.5 mL of 5 g/L methionine in 0.75%saline,with controls not injected. After 30 days hatching,20 healthy goslings with similar body weight were selected from each replicate and then fed. The feeding period was 28 days.Results showed that the Met had no significantly effects on hatchability(P<0.10),but the body weight and average daily gain of geese from 1 to 14 d of age,meanwhile lower(P<0.05)feed/gain.The Met had no significant effects on yolk sac index and liver index of geese at 14 and 28 d of age(P>0.05),but higher breast muscle index of geese at 28 d of age(P<0.05).The Met increased(P<0.05)the concentrations of total protein in serum at 14 d of age,at the same time exhibited a tendency(0.05≤P<0.10)towards higher serum albumin concentrations.The Met exhibited a tendency(0.05≤P<0.10)towards higher serum total protein and albumin concentrations at 28 d of age.The Met had lower(P<0.05)serum uric acid concentrations at 14 and 28 d of age.In conclusion,in ovo injection of methionine could increase the utilize of amino acid and protein deposition to improve body weight and average daily gain,feed/gain of Landaise geese from 1 to 14d of age.

    in ovo injection;methionine;geese;growth performance;serum profile

    S835.5

    :A

    :0258-7033(2015)19-0043-06

    2015-01-20;

    2015-03-09

    國家自然科學(xué)基金(31372331)

    李德生(1986-),男,遼寧海城人,博士研究生,動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)專業(yè),E-mail:lidesheng0726521@126.com

    *通訊作者:婁玉杰,教授,博士生導(dǎo)師,E-mail:lyjjlau@163.com

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