一場悄無聲息的巨變
——蜜蜂孢子蟲病的變遷與防治

鄭火青陳秀賢周 婷胡福良

（1浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，杭州310058；2中國農(nóng)科院蜜蜂研究所，北京100093）

一場悄無聲息的巨變
——蜜蜂孢子蟲病的變遷與防治

鄭火青1陳秀賢1周 婷2胡福良1

（1浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，杭州310058；2中國農(nóng)科院蜜蜂研究所，北京100093）

蜜蜂孢子蟲病，又稱微粒子病，是由蜜蜂微孢子蟲引起的一種成年蜂常見的消化道傳染病。微孢子蟲是一類專營細(xì)胞內(nèi)寄生的原始的真核寄生蟲，分布廣泛，不同種寄生不同動物，對昆蟲、魚類、人類等幾乎所有動物都有影響。微孢子蟲的感染對蜜蜂、家蠶等經(jīng)濟(jì)昆蟲構(gòu)成了嚴(yán)重威脅，是蠶種檢疫的主要內(nèi)容之一。蜜蜂微孢子蟲在蜜蜂中腸上皮細(xì)胞內(nèi)生長、繁殖、破壞腸道正常功能，發(fā)病輕微時癥狀不明顯，加上蜂場不具備確診病原的條件，蜜蜂孢子蟲病常被忽視。

目前發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)的蜜蜂微孢子蟲有兩種，分別是1909年在西方蜜蜂體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的西方蜜蜂微孢子蟲（Nosema apis）與1994年在北京的中華蜜蜂體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的東方蜜蜂微孢子蟲（N.ceranae）。在相當(dāng)長一段時間內(nèi)，普遍認(rèn)為自然狀態(tài)下西方蜜蜂感染的僅是西方蜜蜂微孢子蟲。直至2006年和2007年，國際上兩個研究團(tuán)隊(duì)分別報道在西班牙和我國臺灣西方蜜蜂體上發(fā)現(xiàn)東方蜜蜂微孢子蟲的研究結(jié)果。這一研究結(jié)果影響深遠(yuǎn)，意味著東方蜜蜂微孢子蟲出現(xiàn)了宿主轉(zhuǎn)移，西方蜜蜂面臨著一個新病原的威脅。而2006年正值美國報道蜂群崩潰綜合癥（CCD），歐洲各國也相繼出現(xiàn)大量蜂群損失，人們自然就將西方蜜蜂的這一新病原和蜂群損失相聯(lián)系，關(guān)于東方蜜蜂微孢子蟲的研究出現(xiàn)井噴式的增長，成為近年來農(nóng)業(yè)研究領(lǐng)域的十大熱點(diǎn)之一。

隨后幾年關(guān)于蜜蜂微孢子蟲的研究表明，東方蜜蜂微孢子蟲已經(jīng)廣泛分布于世界各地，蜂群感染率很高，在很多地方都有取代西方蜜蜂微孢子蟲的趨勢，并成為很多國家（以西班牙為典型）蜂群驟減的主要原因。2008年周婷研究團(tuán)隊(duì)對中國主要養(yǎng)蜂地區(qū)蜜蜂微孢子蟲的種類進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)中國西方蜜蜂微孢子蟲病的病原是東方蜜蜂微孢子蟲（N.ceranae），而沒有發(fā)現(xiàn)之前廣泛認(rèn)定的西方蜜蜂微孢子蟲（N.apis）[1]。

1 兩種微孢子蟲差異明顯

兩種微孢子蟲雖然形態(tài)結(jié)構(gòu)相似（西方蜜蜂微孢子蟲孢子略大），但存在很多的不同之處，甚至東方蜜蜂微孢子蟲與胡蜂微孢子蟲的親緣關(guān)系更近，而非西方蜜蜂微孢子蟲。之前對西方蜜蜂微孢子蟲的認(rèn)識并不能直接應(yīng)用于東方蜜蜂微孢子蟲。例如，西方蜜蜂微孢子蟲感染存在明顯的季節(jié)性，在春季和秋季會出現(xiàn)高峰，而東方蜜蜂微孢子蟲感染季節(jié)性不明顯，可全年感染，在夏季感染嚴(yán)重。這一點(diǎn)可能與兩種微孢子蟲感染的溫度范圍有關(guān)，西方蜜蜂微孢子蟲溫度范圍較窄，而東方蜜蜂微孢子蟲更耐熱。由于東方蜜蜂微孢子蟲侵染西方蜜蜂的歷史較短，對于西方蜜蜂來說，這是一種新的寄生蟲，還沒有經(jīng)過一定時間的協(xié)同進(jìn)化，對西方蜜蜂造成的危害比與之經(jīng)過了長時間協(xié)同進(jìn)化的西方蜜蜂微孢子蟲更為嚴(yán)重。

雖然蜜蜂微孢子蟲的毒力可能因?yàn)椴煌幕蛐投煌?，不同的蜜蜂也有不同的抗性，但綜合而言，其影響不容忽視。作為一種細(xì)胞內(nèi)寄生蟲，它的寄生、繁殖會消耗蜜蜂體內(nèi)的營養(yǎng)，破壞中腸上皮細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)，影響消化吸收能力，導(dǎo)致體質(zhì)變差，給其他病原菌的侵襲提供更多的機(jī)會。有研究表明，東方蜜蜂微孢子蟲會導(dǎo)致西方蜜蜂免疫受到抑制，而西方蜜蜂微孢子蟲則會引發(fā)蜜蜂的免疫應(yīng)答[2]。另外，微孢子蟲的感染會導(dǎo)致工蜂提早發(fā)育成采集蜂，壽命縮短；也會導(dǎo)致采集力和泌漿能力下降；對蜜蜂的行為、生理和信息素都會產(chǎn)生影響。

2 蜂花粉對微孢子蟲感染的多面影響

蜂花粉是蜜蜂蛋白質(zhì)飼料的主要來源，對蜜蜂健康和發(fā)展非常重要，但它對蜜蜂微孢子蟲感染卻有著多面的影響。其一，蜂花粉是孢子蟲傳播的重要媒介。有研究證實(shí)，染病群采集的蜂花粉極有可能攜帶有感染力的孢子[3]。隨著帶孢子的蜂花粉被其他蜜蜂食用，微孢子蟲進(jìn)一步傳播。其二，蜂花粉本身會促進(jìn)受微孢子蟲感染蜜蜂體內(nèi)孢子的繁殖。在實(shí)驗(yàn)條件下，給所有蜜蜂接種等量的孢子，分組后分別飼喂糖水或糖水和蜂花粉（經(jīng)紫外燈照射及飼喂實(shí)驗(yàn)確認(rèn)不攜帶有活力的孢子），結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼喂蜂花粉的蜜蜂體內(nèi)孢子的繁殖速度是只飼喂糖水的蜜蜂的3～5倍。這一現(xiàn)象可能是微孢子蟲周年流行規(guī)律的重要影響因素之一。其三，蜂花粉對感染孢子蟲病的蜜蜂起到了保護(hù)作用。盡管食用蜂花粉促進(jìn)了受微孢子蟲感染蜜蜂體內(nèi)孢子的繁殖，但食用蜂花粉的染病蜜蜂仍然比沒有食用花粉的染病蜜蜂壽命長，說明在染病情況下給蜜蜂提供花粉仍然是有利的[4]。

蜂花粉的這些多面影響在養(yǎng)蜂生產(chǎn)上有應(yīng)用意義。第一，給蜂群提供充足的營養(yǎng)能提高染病蜂群抵抗力；第二，在給蜂群飼喂蜂花粉時要杜絕由蜂花粉媒介的孢子傳播，特別是從市場上購買蜂花粉用來飼喂時要更加注意；第三，蜜蜂食用蜂花粉會加速孢子的繁殖，為其進(jìn)一步侵染提供更多的機(jī)會。因此，在蜂群染病時，一方面要加強(qiáng)營養(yǎng)，另一方面還要加強(qiáng)治療。

3 微孢子蟲感染的診斷

癥狀診斷：西方蜜蜂微孢子蟲感染嚴(yán)重的蜂群會有下痢的典型癥狀，箱壁上可見蜜蜂排便的污漬。但感染東方蜜蜂微孢子蟲卻少有這一典型癥狀。孢子蟲病主要作用在蜜蜂的消化系統(tǒng)，中腸病理變化引起的癥狀比較明顯。如有可疑蜂群患孢子蟲病時，可以取新鮮病蜂數(shù)只，剪去頭部，用鑷子或手夾住蜜蜂尾部末節(jié)拖拽取出蜜蜂中腸。健康蜜蜂的中腸呈赤褐色，環(huán)紋明顯，并具有彈性和光澤。如果中腸膨大，呈灰白色，環(huán)紋不清，失去彈性，可懷疑是孢子蟲病。但這一方法可靠性不高，一方面有病癥的中腸外觀可能會由其他病原引起，另一方面花粉顏色和食用量也會影響中腸外觀。也有人指出，蜜蜂在染病后食欲和饑餓水平提升，會出現(xiàn)不取食糖漿卻大量溺死在飼喂器的現(xiàn)象，這也可作為判斷感染東方蜜蜂微孢子蟲的典型標(biāo)志。

鏡檢：鏡檢是比較準(zhǔn)確的鑒定方法。在巢門口抓取30只采集蜂，取腹部研磨，加30 ml水制成懸濁液，取10 μl或1滴置于血球計(jì)數(shù)板或載玻片上，蓋上蓋玻片在400倍光學(xué)顯微鏡下觀察，若發(fā)現(xiàn)有橢圓形，帶有折光性的大米粒狀孢子，即可確診為孢子蟲病?？筛鶕?jù)特定的計(jì)數(shù)方式或視野下的孢子數(shù)判斷蜂群感染程度。鏡檢結(jié)果可靠，但靈敏性有一定限制。為了增加靈敏性，取樣時要抓取采集蜂進(jìn)行檢測。因內(nèi)勤蜂可能雖然有感染，但孢子數(shù)量不多，不足以在顯微鏡下看到。

其他檢測方法：免疫反應(yīng)法和分子生物學(xué)法。這兩種方法相對復(fù)雜，但優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，且能夠區(qū)分兩種微孢子蟲的種類。

4 防治方法

煙曲霉素對防治孢子蟲病有效，是目前北美合法登記的防治蜜蜂微孢子蟲病的藥劑。但它是由煙曲霉菌產(chǎn)生的抗生素，歐盟法規(guī)禁止在防治蜂病上使用抗生素，日本對進(jìn)口蜂產(chǎn)品中抗生素殘留也有嚴(yán)格限量。煙曲霉素在蜂群和蜂產(chǎn)品中的降解規(guī)律還不清楚，所以不適合在國內(nèi)推廣使用。

黃文誠老師2009年總結(jié)了一些防治蜜蜂微孢子蟲病的藥劑，包括金維他飼料、蜜蜂草藥、諾茲維特、普羅托非、百里酚等。這些藥劑都是在歐洲已有應(yīng)用的植物提取物，值得借鑒。還有人嘗試用用漂白粉防治孢子蟲病[5]，他們用10%次氯酸鈉100 ml混合入250 ml高果糖漿，再加100 ml蒸餾水，在每個蜂路中滴注5 ml，每周滴注2次，據(jù)報道效果不錯。

利用蜜蜂微孢子蟲在酸性環(huán)境下不利于孢子萌發(fā)的特點(diǎn)，大量飼喂添加了檸檬酸或米醋的酸飼料（1 kg糖水中加入檸檬酸1 g或米醋50 ml），是常用的一種防治方法。但也有人指出這一方法效果不理想。

對于該病，目前主要以預(yù)防和切斷傳染源為主，以下幾點(diǎn)供參考：

（1）增強(qiáng)蜜蜂抵抗力：加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高蜂群抗病能力來降低發(fā)病率。其他減輕蜂群壓力的措施都有助于增加抵抗力。

（2）切斷飼料傳染：由感染群生產(chǎn)的蜂產(chǎn)品很有可能受到孢子污染，會成為新的感染源。飼喂蜂群時要對飼料進(jìn)行消毒，尤其是購進(jìn)的飼料用花粉，應(yīng)采用高溫蒸汽消毒（不少于10分鐘）。

（3）切斷蜂具傳染：對蜂箱、巢脾、蜂具等定期清洗消毒，特別是對有孢子蟲病史的蜂場或與染病蜂群接觸的蜂具等要加強(qiáng)消毒，明顯污漬的巢脾要及時淘汰。

（4）杜絕引種帶入病原：微孢子蟲會感染蜂王，如果種蜂場蜂群有患孢子蟲病，新培育的蜂王很有可能攜帶病原，引種后會通過垂直傳播導(dǎo)致蜂群感染。因此種蜂場要特別注意防治孢子蟲病。

（5）利用孢子蟲的弱項(xiàng)：東方蜜蜂微孢子蟲孢子抗寒能力差，孢子冷凍數(shù)天就大量失活，可以利用這一特性，在冬季把用過的蜂箱、巢脾等放在室外存放。另外研究表明紫外線照射5分鐘能殺滅約50%的孢子[4]，太陽光含有紫外線，可在對蜂具等清洗后，放在陽光下暴曬殺滅孢子。

[1]劉鋒,王強(qiáng),代平禮,等.蜜蜂微孢子蟲在中國的自然種系構(gòu)成初探.昆蟲知識.2008,45(6):963-966.

[2]Antúnez K,Martín-Hernández R,Prieto L,et al.Immune suppression in the honey bee (Apis mellifera)following infection by Nosema ceranae(Microsporidia).Environmental Microbiology,2009, 11(9):2284-2290.

[3]Higes M,Martín-Hernández R,Garrido-Bailón E,et al.Detection of infective Nosema ceranae(Microsporidia)spores in corbicular pollen of forager honeybees.J Invertebr Pathol,2008,97,76-8.

[4]鄭火青,藺哲廣,黃少康,等.花粉對東方蜜蜂微孢子蟲感染的影響.第十屆海峽兩岸蜜蜂與蜂產(chǎn)品學(xué)術(shù)研討會.2013.

[5]Oliver R．The"Nosema Twins"Part V— Alternative Treatments and Preventions.American Bee Journal,2008,148(5):349-354.