HPLC法測定清熱解毒膠囊地黃中毛蕊花糖苷含量

★ 何洪偉 潘文波 何慶武 陳秋呂 (宜春市第二人民醫(yī)院藥劑科 江西宜春336000)

清熱解毒膠囊由石膏、金銀花、玄參、地黃、連翹、梔子、甜地丁、黃芩等十余味中藥材組成，具有清熱解毒之功。用于治療流感，上呼吸道感染等癥，臨床療效顯著［1］，未發(fā)現嚴重不良反應，深受廣大患者好評。為了更有效地控制清熱解毒膠囊的質量，本研究采用高效液相色譜(HPLC)法測定清熱解毒膠囊里面地黃藥材中的毛蕊花糖苷的含量，從而為建立清熱解毒膠囊的質量標準提供可靠依據。

1．1 實驗儀器 安捷倫高效液相色譜儀(美國惠普安捷倫公司);BP211D電子分析天平(德國Sartorius公司);真空干燥箱(上海一恒實驗儀器總廠);DK－S26型電動恒溫水浴鍋(上海精宏試驗設備有限公司);TP－150超聲波清洗機(天鵬電子新技術有限公司)。

1．2 藥品與試劑 清熱解毒膠囊(江西銀濤藥業(yè)有限公司;批準文號:國藥準字Z20054663);甲醇、乙腈均為色譜純;毛蕊花糖苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:121093－201303);水為超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2．1 溶液制備及色譜條件 對照品溶液的制備:精密稱取毛蕊花糖苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含毛蕊花糖苷46．3μg的對照品溶液，濾過(微孔濾膜孔徑:0．45μm)，取續(xù)濾液，即為毛蕊花糖苷對照品溶液。

供試品溶液的制備:精密量取該制劑樣本內容物2．00g，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放至室溫，再稱定其重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2mL，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即為供試品溶液［2］。

色譜條件:色譜柱:Agilent Eelipse XDB－C18(4．6mm×150mm，5μm);流動相:甲醇－乙腈－0．1%醋酸溶液(15∶50∶35);檢測波長:334nm;流速:0.8mL/min;柱溫:30℃;進樣量:10μL。

2．2 標準曲線制備 精密吸取濃度為46．3μg/mL的對照品溶液2，5，10，15，20μL，分別注入高效液相色譜儀中，測定其峰面積，分別以對照品峰面積積分值為縱坐標，以進樣量為橫坐標，進行線性回歸處理，得到回歸方程為Y=2351．1X－19．153，r=0.9998。說明毛蕊花糖苷在0．0926～0．926μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2．3 精密度試驗 精密吸取上述對照品溶液10μL，重復進樣6次，測定相應對照品峰面積積分值，結果RSD值均小于3．0%，符合要求，表明儀器、方法的精密度良好。

2．4 穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液10μL，于放置0，3，6，9，12，18h時分別進樣，測定其峰面積，得到供試品溶液的RSD值為1．25%，由此可知供試品在放置18h內性質穩(wěn)定。

2．5 重復性試驗 取同一批次的該制劑5份，依法制備供試品溶液，測定其峰面積，計算毛蕊花糖苷的RSD值為0．97%，均符合要求。

2．6 加樣回收率試驗 精密稱取6份同批次的該制劑制成供試品溶液，分別精密加入10μL的對照品溶液，照含量測定項下處理樣品溶液，依法進行加樣回收率考察，結果平均回收率為99．48%，RSD為0．21%。

2．7 毛蕊花糖苷的含量測定 取3批樣品分別制得供試品溶液，按上述方法進行含量測定，采用峰面積比較法計算毛蕊花糖苷含量，結果表明，本品每克含毛蕊花糖苷應不低于0．307mg。

3 結論與討論

通過查閱總結大量文獻發(fā)現提取毛蕊花糖苷的方法有索式提取法，回流提取法，超聲提取法等多種方法;其中回流提取法有采用甲醇回流、10%鹽酸和二氯甲烷回流等［3］，本實驗采用甲醇超聲提取，和甲醇回流提取兩種方法進行對照，結果顯示兩種方法提取效果想似，考慮到超聲提取操作更為簡單，故選擇超聲提取。

綜上所述，本研究中所建立的HPLC法測定決明子中橙黃決明素含量操作方法簡便，有良好的重復性和精密度，可為五味通心膠囊的質量控制提供有效參考。

［1］陳德金，祝晨蔯，林朝展．HPLC法測定裸花紫珠片中毛蕊花糖苷及連翹酯苷的含量［J］．中成藥，2011，33(3):449－452．

［2］蔡金平，董琳，盛琳，等．HPLC同時測定裸花紫珠藥材中毛蕊花糖苷和木犀草素［J］．中國實驗方劑學雜志，2013，19(1):81－84．

［3］吳龍．反相高效液相色譜法測定地仲強骨膠囊中毛蕊花糖苷的含量［J］．中南藥學，2012，10(6):469－471．