海南地區(qū)人乳頭瘤病毒感染情況與亞型分析

張繼業(yè)，李曉娟，徐衛(wèi)華，符生苗

(海南省人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?570311)

海南地區(qū)人乳頭瘤病毒感染情況與亞型分析

張繼業(yè)，李曉娟，徐衛(wèi)華，符生苗

(海南省人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，海南 海口 570311)

目的 了解常見21種人乳頭瘤病毒(HPV)在海南地區(qū)的亞型分布、多重感染和不同年齡感染情況。方法使用PCR體外擴(kuò)增和膜雜交法對2013年1～12月來我院就診的10 764例女性進(jìn)行HPV分型檢查。結(jié)果10 764例樣本中陽性率為19.38%，多重感染率為4.96%，25歲以下陽性率最高，各亞型檢出率最高依次為52型、16型和58型，未檢出43型。結(jié)論海南地區(qū)主要HPV感染亞型為52型、16型和58型，HPV感染有低齡化趨勢。

人乳頭瘤病毒；基因分型；宮頸癌；多重感染

人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是一種嗜上皮性的雙股環(huán)形無包膜DNA病毒，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)超過200多種，其中超過35種能夠感染人類生殖系統(tǒng)[1]。低危型的HPV主要引起起尖銳濕疣等良性病變，而高危型HPV的持續(xù)感染則是引發(fā)宮頸上皮內(nèi)瘤變以及宮頸癌的主要病原學(xué)因素[2-3]，幾乎絕大多數(shù)子宮頸鱗狀細(xì)胞癌的患者都可以檢測到高危型HPV的感染[4]。由于不同HPV亞型在不同地區(qū)以及不同人群的分布有所區(qū)別[5]，因此本研究針對海南地區(qū)各年齡段10 764例女性進(jìn)行常見21種HPV亞型檢測，以確定海南地區(qū)HPV感染的常見類型，為HPV的防治和后續(xù)研究打下基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究所有標(biāo)本來自海南省人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室2013年1～12月自愿接受HPV分型檢查的女性患者共10 764例，其中年齡最小14歲，最大87歲。將受試對象分為＜25歲組、26～35歲組、36～45歲組、46～55歲組、56～65歲組以及＞65歲組。

1.2 儀器和試劑 分子雜交儀(潮州凱普生物化學(xué)有限公司)，PCR擴(kuò)增儀(Applied biosystems)，細(xì)胞裂解液(分離法)(潮州凱普生物化學(xué)有限公司)， HPV分型檢測試劑盒(潮州凱普生物化學(xué)有限公司)，其他分析純試劑。

1.3 樣本采集 行常規(guī)婦科檢查，以窺陰器暴露宮頸后用拭子擦拭干凈子宮頸口分泌物，拭子置于宮頸口內(nèi)2～3 cm，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5圈，獲頸管脫落細(xì)胞并存于裝有細(xì)胞保存液的洗脫管中。做好標(biāo)本相應(yīng)標(biāo)識后4℃保存并在24 h內(nèi)送檢。

1.4 樣本檢測 將宮頸脫落細(xì)胞保存液充分震蕩混勻，取500μl保存液以12 000 r/min離心5 min后棄上清液，按照細(xì)胞裂解液(分離法)試劑盒說明書操作提取樣本DNA。隨后按照HPV分型檢測試劑盒說明書進(jìn)行PCR擴(kuò)增以及21種HPV基因亞型的檢測。21種亞型包括高危型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68型，低危型6、11、42、43、44、CP8304型，其他型53型。每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)有陰性和陽性對照。

1.5 結(jié)果判讀 膜條上共24個(gè)方格，依次排列質(zhì)控點(diǎn)與21種不同的HPV型別。首先檢查膜條質(zhì)控點(diǎn)是否有藍(lán)色圓點(diǎn)出現(xiàn)，有則表示實(shí)驗(yàn)成功。隨后檢查其他方格是否藍(lán)色圓點(diǎn)出現(xiàn)，相應(yīng)方格中出現(xiàn)藍(lán)色圓點(diǎn)則判定對于對應(yīng)HPV亞型為陽性。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 用軟件Excel 2007建立數(shù)據(jù)庫并對所檢測的21種HPV亞型在不同年齡段中的感染情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述。

2 結(jié)果

2.1 HPV感染的年齡分布 10 764例樣本中陽性率為19.38%，其中＜25歲組陽性率最高，達(dá)28.80%，其次為56～65歲和＞65歲組，陽性率分別為24.32%和22.76%。在不同類型HPV感染中高危型檢出率最高，為10.82%，而且在各年齡段中也是以高危型感染為主。多重感染檢出率為4.96%，但＜25歲組和＞65歲組檢出率高，分別達(dá)10.95%和9.76%。低危型染檢出率相對較低，但在＜25歲組中感染較多，檢出率為4.33%，其他型感染相對較少，見表1。

2.2 HPV感染的亞型分布 在10 764例樣本中共檢出HPV感染2 811例次，其中除44型未檢出外，其余20種均有檢出。其中52型、16型以及58型檢出率最高，分別為16.86%、13.66%和11.21%。在單一感染的患者中，除了52型、16型以及58型以外，CP8304型和53型的也較為常見。在534例多重感染的病例中最多檢出6種不同亞型HPV同時(shí)感染。在雙重感染和三重感染中52型和58型的檢出率最高。但在四重感染中檢出率最高的為16型，此外58型、CP8304型和53型也較為常見。而五重和六重感染不同亞型的HPV檢出規(guī)律不明顯，見表2。

表1 HPV感染的年齡分布[例(%)]

表2 HPV感染的亞型分布(例，n=2811)

3 討論

高危型HPV的持續(xù)感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變以及宮頸癌的重要病原學(xué)因素[2-3]，流行病學(xué)調(diào)查顯示高危型HPV感染誘發(fā)宮頸癌的概率為1%，同時(shí)93%的宮頸癌組織中能夠檢出HPV感染[3]，因此HPV的檢測是預(yù)防和治療宮頸癌的必須內(nèi)容。

研究表明，至少50%的婦女在一生中會感染HPV，但HPV在不同地區(qū)的感染率也有所區(qū)別。文獻(xiàn)報(bào)道稱HPV全球感染率約10%，亞洲感染率為8%[4]，而國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道的HPV檢出率根據(jù)地區(qū)不同，檢出率有明顯差異，其中廣東[5]、廣西[6]、貴州[7]等地的文獻(xiàn)報(bào)道HPV檢出率在24%左右，而重慶的檢出率報(bào)道稱為17.3%[8]，南京為10.79%[9]，其他地區(qū)檢出率一般在20%以上[10-11]。引起這種差異的原因除了本身地域差異外，還可能與各地衛(wèi)生條件以及當(dāng)?shù)厝巳簩PV的認(rèn)知程度不同有關(guān)，此外由于國內(nèi)還沒有規(guī)模性的普查數(shù)據(jù)，各地報(bào)道在檢測樣本總量、檢測方法等方面有所不同，因此各地HPV檢出率差異較大。但本研究通過檢測10 764例女性患者標(biāo)本，HPV陽性檢出率為19.38%，較全國報(bào)道水平略低。

除地域因素外，HPV的感染也和年齡密切關(guān)系[12]。文獻(xiàn)報(bào)道稱HPV感染的年齡近似為“U”型分布[13]，即青年、老年感染率高，而中年感染率相對低。在本研究中，HPV感染的年齡分布趨勢和文獻(xiàn)報(bào)道一致，感染的主要年齡段集中在25歲以下人群和56～65歲的人群，檢出率分別為28.8%和24.32%。而36～55歲的人群檢出率則相對較低。引起這種現(xiàn)象的原因應(yīng)該和患者的身體狀況和衛(wèi)生習(xí)慣有密切關(guān)系。一般來說，青年女性免疫力較好，HPV感染后大多為一過性感染，文獻(xiàn)報(bào)道稱年輕婦女感染HPV后有60%至70%的患者能夠在一年內(nèi)消失，而兩年內(nèi)感染清除率為90%[14]。而隨著年齡增大，HPV感染率開始上升，這可能是由于女性身體免疫力以及激素水平發(fā)生變化導(dǎo)致[15]，此外婦女更年期后生活習(xí)慣也有改變，因此容易引起持續(xù)感染。而25歲以下女性，雖然免疫力較好，但是健康意識相對淡泊，對個(gè)人性行為和個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣缺乏認(rèn)識，導(dǎo)致低年齡段女性對HPV暴露可能性大，卻又對早期癥狀不重視，使得HPV在25歲以下女性中HPV檢出率和多重感染率均最高。除此之外，低年齡段女性還可能有酗酒、抽煙[16-17]以及多性伴侶等的不良行為[18]，也增高了HPV的暴露幾率。

目前，我國還缺乏規(guī)模性的HPV普查數(shù)據(jù)，雖然國外HPV感染以16型和18型為主，但我國地域廣闊，不同地域間的HPV感染有所不同。其中江西HPV檢出最多亞型依次為16型、58型和33型[19]，北京地區(qū)的報(bào)道常見亞型為16型、58型和52型[20]，浙江地區(qū)則是16型、52型、58型檢出率高[21]，此外在重慶地區(qū)檢出率較高的亞型是16型、43型和58型[8]，可見我國16型感染較為常見，其次58型的檢出率也高。而在本研究中發(fā)現(xiàn)海南地區(qū)HPV高危型檢出率高，依次為52型，其次為16型和58型，分別占檢出總數(shù)的16.86%、13.66%和11.21%，此外CP8304型、53型、18型和68型的檢出率也較高，均在5%以上，但在樣本中未檢出43型。說明海南地區(qū)HPV感染和國內(nèi)其他地區(qū)有一定差異，這種差異除了與各地民族、流動人口的生活習(xí)慣和衛(wèi)生習(xí)慣有關(guān)外，可能還與海南地理位置和本地自然條件有關(guān)，但目前HPV特定亞型對自然環(huán)境相關(guān)性的報(bào)道并不多[22]。

對HPV感染目前缺少標(biāo)準(zhǔn)化的治療方案，主要是進(jìn)行抗病毒治療，因此針對HPV仍然是以預(yù)防為主。目前國際上已有二聯(lián)(16型/18型)和四聯(lián)(16型/18型/6型/11型)的HPV疫苗上市，但涉及海南常見的52型、58型尚未有相關(guān)疫苗上市。同時(shí)，HPV疫苗上市時(shí)間較短，因此其作用還有待驗(yàn)證，所以目前對HVP的預(yù)防還是應(yīng)通過良好的生活衛(wèi)生習(xí)慣、定期檢查以及出現(xiàn)感染癥狀后盡早就醫(yī)、治療。通過本次研究，我們發(fā)現(xiàn)25歲以下的女性感染HPV的幾率較中、老年女性更高，同時(shí)多重感染幾率也高。這一結(jié)果表明海南HPV感染也有低齡化趨勢，提示在關(guān)注中、老年女性HPV感染的同時(shí)，也還需要在低年齡段女性中開展HPV的宣教和篩查，從而更有效降低宮頸癌的發(fā)生率。

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Prevalence and genotyping of human papillomavirus infection in females in Hainan province.

ZHANG Ji-ye,LI Xiao-juan,XU Wei-hua,FU Sheng-miao.Central Laboratory,People's Hospital of Hainan Province,Haikou 570311, Hainan,CHINA

Objective To investigate the genotypes distribution of 21 common human papillomavirus(HPV) in Hainan province,rate of multiple infections and infection rates among different age groups.MethodsA total of 10 764 samples from females in Hainan were tested for 21 DNA types of HPV by PCR and film chip blot.ResultsThe HPV positive rate was 19.38%.The multiple infection rate was 4.96%,and there was relatively high infection rate among females under 25 years old.Out of the 21 subtypes of HPV,HPV-52 was the most common subtype detected, followed by subtypes HPV-16 and HPV-58.HPV-43 was not detected.ConclusionThe most prevalent HPV subtypes are HPV-52,HPV-16 and HPV-58 in Hainan province,and the highest rate of HPV infection is found in females under 25 years old.

Human papillomavirus;Genotype;Cervical cancer;Multiple infection

R730.261

A

1003—6350（2015）10—1460—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.10.0520

2014-10-22)

符生苗。E-mail：smfu2000@126.com