急性闌尾炎患者闌尾病灶組織分離的病原體及其耐藥性分析

羅 標，梁結玲，劉瓊章，徐艷紅，歐陽輝妹，鄧潤欽

(東莞市茶山醫(yī)院檢驗科1、普外科2，廣東 東莞 523380)

急性闌尾炎患者闌尾病灶組織分離的病原體及其耐藥性分析

羅 標1，梁結玲1，劉瓊章1，徐艷紅1，歐陽輝妹1，鄧潤欽2

(東莞市茶山醫(yī)院檢驗科1、普外科2，廣東 東莞 523380)

目的 了解急性闌尾炎患者中常見病原體及其對抗菌藥物的耐藥性，為臨床選擇抗菌藥物治療提供參考。方法對2011年1月至2013年12月收集的415例闌尾病灶組織標本采用法國生物梅里埃公司ATB半自動微生物鑒定儀進行細菌鑒定和藥敏試驗，對藥敏結果采用WHONET5.6軟件進行統(tǒng)計分析，并對大腸埃希菌、奇異變形桿菌、肺炎克雷伯菌進行了超廣譜β-內酰胺酶(ESBL)檢測。結果從415例闌尾病灶組織中分離出348株病原體，其中G-桿菌322株(92.52%)，G+球菌26株(7.47%)；檢出率居前5位的病原菌依次為大腸埃希菌(76.14%)、銅綠色假單胞菌(6.90%)、奇異變形桿菌(3.45%)、肺炎克雷伯菌(3.16%)和糞腸球菌(1.44%)。藥敏結果顯示大腸埃希菌耐藥率較低者依次為亞胺培南（0）、哌拉西林/他唑巴坦（0）、阿米卡星(5.3%)、頭孢西丁(10.2%)和阿莫西林/克拉維酸(24.6%)，大腸埃希菌耐藥率較高者依次為青霉素類抗生素類（86.8%～90.6%）、復方新諾明(67.9%)及第一、二代頭孢菌素類藥物(60.3%～67.9%)，G+球菌對萬古霉素、替考拉寧、左旋氧氟沙星耐藥率最低，對其他抗菌藥物都有不同程度的耐藥。ESBL確證試驗結果顯示，265株大腸埃希菌檢出124株，產酶率為46.8%；奇異變形桿菌、肺炎克雷伯菌均未檢出產ESBL菌株。結論急性闌尾炎感染細菌以G-桿菌為主，特別是以大腸埃希菌居首位；此菌對青霉素類、頭孢類和喹諾酮類抗菌藥物的耐藥率逐年上升，特別是產ESBL菌株呈現(xiàn)出多藥耐藥現(xiàn)象嚴峻。應加強病原菌的檢測和藥敏試驗，合理選擇抗生素，減少耐藥菌株的產生和擴散。

急性闌尾炎；病灶組織；病原體；敏感性試驗；抗藥性

急性闌尾炎是普外科腹腔感染中最常見的急腹癥之一。由于抗菌藥物的廣泛濫用，導致闌尾感染的細菌譜和藥物敏感性的不斷變遷，增加了急性闌尾炎治療的難度，因此，正確合理使用抗菌藥物在急性闌尾炎的非手術治療和手術治療中均有重要作用。為了解2011年1月至2013年12月本院急性闌尾炎患者的病原菌分布及其耐藥性，本文對普外科送檢的415例急性闌尾炎標本中分離出的348株病原菌進行了鑒定和耐藥性分析，為臨床外科醫(yī)生在治療急性闌尾炎時合理使用抗菌藥物提供病原學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標本來源 標本來源于20l1年1月至2013年12月在本院普外科根據(jù)WHO的急性闌尾炎的診斷標準確診的415例行闌尾切除術患者?；颊哧@尾病灶組織標本全部由普外科手術時采集。

1.2 儀器與試劑 采用法國生物梅里埃公司生產的ATB細菌鑒定及藥敏分析儀以及配套試劑盒。血瓊脂平板、巧克力平板、麥康凱和MH平板購自廣東江門凱林公司。

1.3 質控菌株 金黃色葡萄球菌ATCC 25923、大腸埃希菌ATCC 25922、銅綠假單胞菌ATCC27853、糞腸球菌ATCC29212均由廣東省臨床檢驗中心提供。

1.4 方法

1.4.1 細菌培養(yǎng)及鑒定 將手術采集的闌尾組織標本置入增菌培養(yǎng)瓶內制成懸液，依照常規(guī)方法接種于血平板、麥康凱和巧克力平板，35℃孵育18～24 h。采用法國生物梅里埃公司生產的ATB細菌分析儀進行菌株鑒定和藥敏試驗。

1.4.2 超廣譜β-內酰胺酶(ESBL)確證試驗 按2010年版CLSI標準執(zhí)行操作：選用頭孢他啶、頭孢他啶/棒酸，頭孢噻肟、頭孢噻肟/棒酸兩對紙片進行試驗，兩個藥物中有任何一個在加克拉維酸后抑菌環(huán)直徑與不加克拉維酸的抑菌環(huán)直徑相比增大值≥5 mm時判定為產超廣譜β-內酰胺酶(ESBL)。

1.4.3 結果分析 采用WHONET 5.6軟件進行數(shù)據(jù)分析。每例患者只計算第1份標本分離的非重復株細菌。

2 結果

2.1 病原體分布 由415例闌尾組織標本培養(yǎng)標本分離出病原體共348株(83.85%)，其中，G-桿菌322株(92.52%)，檢出率居前5位的病原菌依次為大腸埃希菌265株(76.15%)、銅綠假單胞菌24株(6.90%)、奇異變形桿菌12株(3.45%)、肺炎克雷伯菌11株(3.16%)和糞腸球菌5株(1.44%)；G+球菌26株(7.47%)，其中以糞腸球菌多見，見表1。

表1 2011-2013年闌尾組織分離病原體分布構成比

2.2 藥敏試驗結果 主要G-桿菌對常見抗菌藥物的耐藥率見表2。ESBL確證試驗結果顯示，265株大腸埃希茵共檢出124株，產酶率為46.8%；奇異變形桿菌、肺炎克雷伯菌均未檢出。主要G+菌細菌對常見抗菌藥物的耐藥率見表3。

表2 主要G-桿菌對常見抗菌藥物的耐藥率[株（%）]

表3 主要G+球菌對常見抗菌藥物的耐藥率[株（%）]

3 討 論

本研究回顧分析了急性闌尾炎患者闌尾病灶組織標本普通培養(yǎng)分離出病原體的種類及主要病原體的耐藥性。急性闌尾炎患者闌尾病灶組織標本普通培養(yǎng)的陽性率為83.85%，與國內報道[1-3]接近。結果顯示，引起急性闌尾炎的病原菌以G-桿菌為主，占92.52%，與國內報道[1]接近，其次為革蘭氏陽性球菌。在革蘭氏陰性桿菌中大腸埃希菌是急性闌尾炎最常見的致病菌，居首位，占總分離率的76.15%，其次為銅綠假單胞菌、奇異變形桿菌和肺炎克雷伯菌，分別占總分離率的6.90%、3.45%、3.16%，與國內報道[1，3]接近；G+菌占7.47%，主要為糞腸球菌(1.44%)、鳥腸球菌(1.44%)、屎腸球菌(1.15%)等，接近于文獻[1]報道。265株大腸埃希菌檢出產超廣譜β-內酰胺酶(ESBL)菌124株，產酶率為46.8%，明顯高于文獻[4]報道，接近于文獻[5]報道?？赡芘c本院近年來在臨床治療中對青霉素類、頭孢類和喹諾酮類抗菌藥物的廣泛應用及其同類之間的頻繁更換使用相關。

藥敏結果顯示，大腸埃希菌耐藥率較低者依次為亞胺培南(0)、哌拉西林/他唑巴坦(0)、阿米卡星(5.3%)、頭孢西丁(10.2%)、阿莫西林/克拉維酸(24.6%)，耐藥率較高者依次為青霉素類抗生素類(86.8%～90.6%)、復方新諾明(67.9%)及第一、二代頭孢菌素類藥物(60.3%～67.9%)，而且對慶大霉素耐藥率達49.1%。這種多藥耐藥現(xiàn)象可能是產ESBIs大腸埃希菌所占比例較高所致，ESBLs菌株不僅攜帶ESBLs質粒，還同時帶有對氨基糖苷類、喹諾酮類和磺胺類等多種耐藥基因，使其具有多種不同的耐藥表型。由于ESBLs能水解β-內酰胺類抗生素，因此對產ESBLs的大腸埃希菌引起的感染不能單獨應用β一內酰胺類抗生素，需用加酶抑制劑的復合劑是用藥的較佳選擇[6]。

從本組資料可以看出，哌拉西林/他唑巴坦、亞胺培南、阿米卡星、頭孢西丁及頭孢吡肟具有很強的抗菌活性，故可作為急性闌尾炎G-桿菌的經驗用藥。雖然臨床上亞胺培南和阿米卡星都效果顯著，但前者作為廣譜抗生素極易產生二重感染，一般不作為首選藥物，只用于產ESBLs菌株的治療，后者因其具有腎毒性，在臨床中也應慎重使用。本組數(shù)據(jù)顯示，腸球菌屬對紅霉素高度耐藥，對萬古霉素、替考拉寧、左旋氧氟沙星保持高度敏感，雖然對耐萬古霉素的腸球菌(VRE)未發(fā)現(xiàn)，但國內外對VRE均有報道[7]，因此臨床治療腸球菌引起的感染時應慎重使用萬古霉素，以減少耐萬古霉素腸球菌產生。

綜上所述，由于廣譜類抗菌藥物的廣泛應用，導致病原菌感染率及耐藥性的不斷增高，特別是產ESBL菌株呈現(xiàn)出多藥耐藥現(xiàn)象嚴峻。臨床在進行治療時應結合病原菌檢測及藥敏結果，同時重視對產ESBLs菌株的檢測，合理選擇抗菌藥物，避免盲目的經驗性用藥，減少耐藥菌株的產生和擴散。

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Pathogens isolated from lesion in patients of acute appendicitis and drug resistance analysis.

LUO Biao1,LIANG Jie-ling1,LIU Qiong-zhang1,XU Yan-hong1,OUYANG Hui-mei1,DENG Run-qin2.Department of Clinical Laboratory1,Department of General Surgery2,Dongguan Chashan Hospital,Dongguan 523380,Guangdong,CHINA

Objective To investigate the common pathogens isolated from lesion in patients of acute appendicitis and to analyze their drug resistance,in order to provide guidance for clinical selection of reasonable antibiotics.MethodsA total of 415 samples of appendicitis lesions from January 2011 to December 2013 were collected.The bacteria identification and microbial sensitivity were performed using BioMerieux semi-automatic bacteria identification analyzer.The results of microbial sensitivity were analyzed by WHONET5.6 software.Extended spectrum beta lactamases(ESBL)onEscherichia coli,proteus,Klebsiella pneumoniaewere also detected.ResultsA total of 348 strains of pathogens were isolated,including 322 strains of Gram-negative bacilli(92.52%),and 26 strains of Gram-positive cocci(7.47%).The top five pathogens detected wereEscherichia coli(76.15%),Pseudomonas aeruginosa(6.90%),Proteus mirabilis(3.45%),Klebsiella pneumoniae(3.16%)andEnterococcus faecalis(1.44%).The microbial sensitivity results showed that the drugs showed low resistance rate to E.coli included imipenem(0%),piperacillin-tazobactam(0%),amikacin(5.3%),cefoxitin(10.2%),amoxicillin-clavulanic acid 24.6%).and that the drugs with high resistance were penicillin antibiotic(86.6%～90.6%),and compound sulfamethoxazole(67.9%)and first and second generation cephalosporin drugs(60.3%～67.9%).G+cocci showed extremely low resistance to vancomycin,teicoplanin,levofloxacin,and were resistant to other antimicrobial agents to varying degrees.Results of ESBL confirmatory test showed that 124 of the 265 strains(46.8%)ofEscherichia coliwere ESBL-producing.No ESBL-producing strains were detected inProteus mirabilisandKlebsiella pneumoniae.ConclusionAcute appendicitis is mainly caused by G-nagative bacilli,especiallyEscherichia coli.The bacteria show increasing resistance to penicillin,cephalosporin and quinolone year by year,and the ESBL-producing strains,especially,show multi-resistance.We should strengthen pathogen detection and drug sensitivity test,choose antibiotics reasonably to reduce the generation and diffusion of drug-resistant strains.

Acute appendicitis;Lesions;Pathogens;Sensitivity test;Drug resistance

R656.8

A

1003—6350（2015）10—1466—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.10.0522

2014-10-08)

梁結玲。E-mail：csyyjyk@yeah.net