閆 佳，許晶晶，陳躍元，譚為霞，雷 蕾

(1.暨南大學口腔醫(yī)學系，廣東 廣州 510630；2.深圳市南山區(qū)蛇口人民醫(yī)院，廣東 深圳 518067)

黃芩苷用于犬實驗性牙髓炎蓋髓的研究

閆 佳1，許晶晶1，陳躍元1，譚為霞2，雷 蕾1

(1.暨南大學口腔醫(yī)學系，廣東 廣州 510630；2.深圳市南山區(qū)蛇口人民醫(yī)院，廣東 深圳 518067)

目的 觀察黃芩苷糊劑對Beagle犬實驗性牙髓炎模型行直接蓋髓術的效果。方法兩只健康雄性beagle犬，分為7 d組和30 d組。各選取24顆健康牙齒，用內毒素誘導法制備牙髓炎模型，隨機分成三組：黃芩苷糊劑組、Dycal組、牙髓炎組。分別于7 d、30 d后處死Beagle犬，通過組織學方法評價牙髓修復情況。結果蓋髓后7 d，黃芩苷糊劑組的炎癥反應和組織紊亂程度較Dycal組弱，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。蓋髓后30 d，黃芩苷糊劑組的炎癥反應、組織紊亂程度及修復性牙本質形成情況均優(yōu)于Dycal組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結論黃芩苷糊劑用于犬實驗性牙髓炎直接蓋髓較Dycal療效更好。

牙髓炎；蓋髓術；黃芩苷

牙髓炎是常見的口腔疾病，活髓保存治療是牙髓治療學中最符合生物學觀點的治療方法，其中，蓋髓劑對治療成敗起著至關重要的作用。本研究將黃芩苷糊劑用于Beagle犬實驗性牙髓炎模型的直接蓋髓治療，了解黃芩苷對實驗性牙髓炎的治療效果。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑 雄性SPF級Beagle犬(廣東省高要市康達實驗動物科技有限公司)，黃芩苷(中國藥品生物制品檢定所)，Dycal(登士柏公司)，玻璃離子粉劑和液劑(3M公司)。

1.2 黃芩苷糊劑的制備 黃芩苷與生理鹽水調和成稠糊狀。

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗分組 健康雄性Beagle犬兩只，分為7 d組和30 d組。每只犬按上、下、左、右四區(qū)分組，各選擇無齲壞、牙周正常的6顆牙，共24顆牙齒編號，按隨機數表法分成3組：黃芩苷糊劑組12顆牙，Dycal組8顆牙，牙髓炎組4顆牙。

1.3.2 實驗模型的建立 根據參考文獻[1]，Beagle犬全麻下行側臥固定，去除牙面菌斑及牙石，消毒后，用裂鉆在牙齒唇、頰面頸部距牙齦緣1 mm釉質部位制備寬2 mm、高3 mm的”V”類洞(犬齒距齦緣3 mm)，近髓透紅時，用無菌生理鹽水沖洗、干燥、隔濕，將5 mg/ml內毒素緩慢注入髓腔(針頭進入髓腔約1 mm)，玻璃離子水門汀封閉窩洞。

1.3.3 實驗模型的蓋髓術 黃芩苷糊劑組、Dycal組去除玻璃離子水門汀，直徑0.5 mm球鉆在窩洞底(不進入牙髓組織)、無菌生理鹽水沖洗下制備穿髓孔，止血、溫生理鹽水沖洗、干燥窩洞，分別用黃芩苷糊劑、Dycal蓋髓，玻璃離子水門汀充填。定期觀察每只犬的飲食改變、日?；顒蛹翱谇唤M織的情況。

1.3.4 實驗標本的制備 術后7 d、30 d處死動物，4%多聚甲醛頸動脈灌注固定，分離實驗牙，截斷根尖1/3。實驗牙編號，常規(guī)固定，連續(xù)脫鈣兩周。常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋。于穿髓孔中央沿牙髓唇舌向制作切片，HE染色，顯微鏡觀察，按Josimeri等[2]的標準進行牙髓組織病理學評價，細胞炎性反應的分級標準為0～3級，0級：穿髓孔對應處牙髓組織中沒有或僅有個別炎性細胞；1級：多形及單個核細胞輕度浸潤；2級：冠髓有中度炎性細胞浸潤；3級：冠髓有重度炎性細胞浸潤或膿腫形成。組織紊亂的分級標準為0～3級，0級：正常組織；1級：成牙本質細胞層紊亂，中心牙髓組織正常；2級：全部牙髓組織失去正常形態(tài)；3級：牙髓壞死。硬組織形成的分級標準為0～3級，0級：無硬組織形成；1級：穿髓孔下有少量硬組織沉積；2級：穿髓孔下有中等量硬組織沉積；3級：穿髓孔下有大量硬組織沉積，完整的牙本質橋形成。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數據分析，各蓋髓組不同時點分級數據采用Kruskal-WallisH檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 牙髓炎組 鏡下見牙髓炎組穿髓點下方血管擴張充血，局部大量炎癥細胞浸潤，成牙本質細胞層紊亂，空泡性變。根髓基本正常(圖1)。表明本實驗成功建立了實驗性牙髓炎模型。

圖1 牙髓炎(HE×10)

2.2 7 d組牙髓組織病理學評價 蓋髓后7 d，黃芩苷糊劑與Dycal組間細胞炎性反應(Z=8.385，P= 0.015)、組織紊亂程度(Z=13.424，P=0.009)差異均有統(tǒng)計學意義，硬組織形成情況(Z=5.210，P=0.266)差異無統(tǒng)計學意義。表明兩組都出現(xiàn)了不同程度的炎癥反應和組織紊亂，但黃芩苷糊劑組均輕于Dycal組，兩組未見完整牙本質橋形成，見表1。

表1 7 d組牙髓組織病理學評價(顆)

2.3 30 d組牙髓組織病理學評價 蓋髓后30 d，黃芩苷糊劑與Dycal組間細胞炎性反應(Z= 17.691，P=0.001)、組織紊亂程度(Z=17.645，P=0.001)、硬組織形成情況(Z=24.231，P=0.000)差異均有統(tǒng)計學意義。黃芩苷糊劑組的炎癥反應和組織紊亂顯著弱于Dycal組，且黃芩苷糊劑組有修復性牙本質橋形成，而Dycal組未見修復性牙本質橋形成，見表2。

表2 30 d組牙髓組織病理學評價(顆)

3 討 論

牙髓炎是一種混合細菌感染性疾病，內毒素是細菌毒性產物中的主要毒力因子，能直接或間接構成成牙本質細胞和牙髓組織的損傷。本實驗參照有關文獻[1]用內毒素誘導建立實驗性牙髓炎模型，術后第3天，鏡下呈現(xiàn)冠髓急性炎癥反應，根髓基本正常，類似可復性牙髓炎的病理變化。

牙髓保存治療中，蓋髓劑的作用至關重要。理想的蓋髓材料應具有消除感染和炎癥、誘導牙髓細胞分化、修復性牙本質形成、保存活髓的特性[3]。目前臨床使用的活髓保存材料有氧化鋅丁香酚，氫氧化鈣玻璃離子/樹脂改良型玻璃離子，礦物三氧化物凝聚體和粘結系統(tǒng)等[4]。其中，氫氧化鈣作為傳統(tǒng)的蓋髓材料，是臨床首選的蓋髓劑，以Dycal為代表的雙份糊劑型氫氧化鈣更因使用方便、性能良好得到廣泛應用。然而，這些蓋髓劑雖有諸多優(yōu)點，但均無顯著抗感染、消除炎癥的作用。

黃芩中的有效成分黃芩苷具有抗炎、抗菌、抗氧化、清除自由基、調節(jié)免疫[5]、降解細菌內毒素[6]等多種生物活性。本實驗組前期實驗[7]觀察到黃芩苷可抑制由LPS誘導的人牙髓細胞TLR4表達及TNF-α分泌，表明黃芩苷可通過阻斷LPS的作用途徑，起到保護牙髓細胞和抗炎的作用。提示黃芩苷可作為蓋髓劑用于控制牙髓炎癥。

當外界刺激引起牙髓炎癥反應時，牙髓會出現(xiàn)組織水腫，成牙本質細胞受損萎縮或消失，炎癥細胞浸潤等組織學改變。保髓治療成功與否主要通過炎癥細胞浸潤和修復性牙本質形成情況進行評定。本實驗通過HE染色對黃芩苷蓋髓效果進行評價。結果顯示：蓋髓后7 d、30 d，黃芩苷糊劑組的牙髓修復情況優(yōu)于Dycal組。提示黃芩苷可更有效的降解內毒素、保護牙髓組織。而Dycal組療效較差的原因可能是由于其呈強堿性，對牙髓細胞缺乏保護[8]，難以有效的降解內毒素、促進修復性牙本質形成。

TNF-α是機體應激反應產生較早，并起核心作用的炎癥介質，可介導幾乎所有內毒素的生物學效應[7]，在牙髓炎癥過程中表達顯著增加，與被激活的單核巨噬細胞系統(tǒng)合并，介導炎癥及免疫反應。柴玉爽等[9]研究黃芩苷對模式識別受體TLR2/4-NOD2的作用及其成藥性意義，發(fā)現(xiàn)黃芩苷能夠特異性的抑制疾病過程中TLR2/4-NOD2的表達，抑制下游炎癥因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表達，從而在一定程度上抑制免疫炎性反應。

牙髓炎治療的理想效果是消除炎癥、恢復可逆性的牙髓損傷，既?；佳?，又使牙髓能行使其防御、修復和重建等功能[10]。本實驗表明，黃芩苷糊劑用于直接蓋髓，具有良好的降解內毒素和保護牙髓細胞的特點，較Dycal能更好地減輕牙髓炎癥，發(fā)揮牙本質-牙髓復合體的修復再生能力，提高蓋髓療效，對LPS引起的牙髓炎具有潛在治療作用，為黃芩苷在臨床上作為蓋髓劑的應用提供了理論基礎。

[1]Rutherford RB,Gu K.Treatment of inflamed ferret dental pulps with recombinant bone morphogenetic protein-7[J].Eur J Oral Sci, 2000,108(3):202-206.

[2]Josimeri H,Elisa MAG,Carlos ASC.Biocomp-atibility of an adhesive system applied to exposed human dental pulp[J].Journal of Endod-ontics,1999,25(10):676-682.

[3]彭 軼,劉 浩.兩種蓋髓材料用于103顆牙蓋髓術治療的效果觀察[J].重慶醫(yī)學,2013,42(9):1019-1020.

[4]金 燕,劉 茜,周紅艷,等.活髓保存材料的現(xiàn)狀和展望[J].口腔生物醫(yī)學,2011,2(2):100-103.

[5]雷 芳.黃芩苷藥理作用研究進展[J].中國藥業(yè),2010,19(15): 87-93.

[6]竇永青,杜文力,薛 毅,等.黃芩苷降解細菌內毒素的定量分析測定[J].華西口腔醫(yī)學雜志,2007,25(2):169-172.

[7]于 淼,雷 蕾,譚為霞,等.黃芩苷對LPS誘導人牙髓細胞TLR4表達及TNF-α分泌的影響[J].牙體牙髓牙周病學雜志,2009,19 (11):633-636.

[8]鐘 波,雷 蕾,于 淼,等.黃芩苷在可復性牙髓炎蓋髓術中的應用[J].臨床口腔醫(yī)學雜志,2009,25(5):310-311.

[9]柴玉爽,雷 帆,邢東明,等.黃芩苷對模式識別受體TLR2/ 4-NOD2的作用及其成藥性意義[J].中國中藥雜志,2013,38(16): 2639-2644.

[10]Trope M.Regenerative potential of dental pulp[J].J Endod,2008, 34(7):206-210.

Experimental study of baicalin as pulp capping agent in beagle dogs.

YAN Jia1,XU Jing-jing1,CHEN Yue-yuan1, TAN Wei-xia2,LEI Lei1.1.Department of Stomatology,Jinan University,Guangzhou 510632,Guangdong,CHINA;2. Shenzhen Shekou People's Hospital,Shenzhen 518067,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo observe the effect of using baicalin as pulp capping agent in experimental models of beagle dog with pulpitis.MethodsTwo healthy male beagle dogs were enrolled in the study.In each dog,24 sound teeth were selected and induced with lipopolysaccharide(LPS)to establish experimental models of pulpitis, which were then divided into 3 groups:baicalin group,Dycal group,pulpitis group.The dogs were sacrificed after 7 days(7 days group)and 30 days(30 days group).Histological methods were applied to assess the repair condition of pulps.ResultsAt 7 days after pulp capping,inflammatory reaction,disorderliness of tissue in baicalin group were slighter than those in Dycal group,and the differences were statistically significant(P＜0.05).At 30 days after pulp capping,inflammatory reaction,disorderliness of tissue and the formation of reparative dentin in baicalin group were better than those in Dycal group,and the differences were statistically significant(P＜0.05).ConclusionThe effect of baicalin as pulp capping agents on experimental dog models with pulptis might be better than Dycal.

Pulpitis;Pulp capping;Baicalin

R-332

A

1003—6350（2015）14—2037—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.14.0737

2015-01-25)

雷 蕾。E-mail：tleil@jnu.edu.cn