MPP8在皮膚惡性黑色素瘤中的表達(dá)及意義

袁 波，石 磊，應(yīng)振毅，林 蕾，應(yīng)孟夏，周瓊艷

(寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，浙江 寧波 315020)

●醫(yī)學(xué)研究

MPP8在皮膚惡性黑色素瘤中的表達(dá)及意義

袁 波，石 磊，應(yīng)振毅，林 蕾，應(yīng)孟夏，周瓊艷

(寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，浙江 寧波 315020)

目的:探討M-期磷蛋白8(MPP8)在皮膚惡性黑色素瘤中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。方法:采用免疫組織化學(xué)方法，對50例皮膚惡性黑色素瘤和50例色素痣組織中MPP8蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測，并結(jié)合患者臨床病理特征對檢測結(jié)果進(jìn)行綜合分析。結(jié)果:皮膚惡性黑色素瘤組織中MPP8的陽性表達(dá)率及表達(dá)水平較色素痣組織高，且表達(dá)量與黑素瘤局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成正相關(guān)。結(jié)論:測定皮膚惡性黑色素瘤組織中MPP8蛋白表達(dá)，為患者預(yù)后的判斷和分子靶向等惡性黑色素瘤治療藥物的應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)，結(jié)論值得進(jìn)一步研究。

MPP8;皮膚惡性黑色素瘤;蛋白表達(dá)

黑色素瘤是常見的皮膚癌之一，而侵襲轉(zhuǎn)移仍是導(dǎo)致惡性黑色素瘤患者死亡的最主要原因，惡性黑色素瘤在臨床上早期即可出現(xiàn)淋巴結(jié)、肝、肺、腦等處的轉(zhuǎn)移，患者一旦出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，治療上比較棘手，且預(yù)后很差［1］。本研究主要探討黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展中MPP8可能的角色。

一、資料和方法

(一)病例收集。

收集皮膚惡性黑色素瘤標(biāo)本50例(黑色素瘤組)和皮膚色素痣(對照組)50例，所有患者術(shù)前無放、化療及靶向治療，臨床及病理資料完整，所有標(biāo)本均經(jīng)病理科組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)確診。

(二)實(shí)驗(yàn)方法。

鼠抗人MPP8單克隆抗體標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，制成防脫石蠟切片，采用免疫組化SP法染色:常規(guī)脫蠟至水;檸檬酸鹽緩沖液高溫修復(fù)2min，冷卻后PBS沖洗;再用3%H202阻斷10min，PBS沖洗;擦干后迅速加入MPP8單克隆抗體(1：100)，室溫孵育1h后PBS沖洗;滴加二抗，孵育15min后PBS沖洗;DAB顯色;蘇木精復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，中性樹膠封片。顯微鏡觀察。用已知陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

(三)免疫組化的結(jié)果判斷。

MPP8的表達(dá)由染色陽性細(xì)胞的數(shù)量和染色程度來評分，陽性細(xì)胞數(shù)量(＜5%，0分;5-25%，1分;25-50%，2分;＞50%，3分)，染色強(qiáng)度(無色，0分;淡黃色，1分;黃色，2分;棕黃色，3分)，兩者評分相乘，0分定為陰性(-)，1-3分定為弱陽性(+)，4-6分定為中等陽性(++)，＞6分定為強(qiáng)陽性(+++)。

(四)統(tǒng)計(jì)分析。

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié) 果

(一)MPP8蛋白的表達(dá)和分布。

50例黑色素瘤組織中，MPP8陽性率為66.7%(33例)，顯著高于色素痣的陽性率24.0%(12例)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(見表1)。

表1 MPP8蛋白在皮膚黑色素瘤和色素痣中的陽性表達(dá)情況

(二)MPP8表達(dá)水平與黑色素瘤患者臨床病理特征的關(guān)系。

MPP8蛋白表達(dá)量與黑色素瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P＜0.05)，而與患者年齡、性別、腫瘤厚度、腫瘤厚度無顯著相關(guān)性(P＞0.05)(見表2)。

表2 皮膚黑色素瘤中MPP8蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系

三、討 論

MPP8在結(jié)構(gòu)上它含有2個(gè)功能域:氨基端染色質(zhì)域和羧基端的錨蛋白結(jié)構(gòu)域［2］，在有絲分裂期，體內(nèi)與體外實(shí)驗(yàn)均發(fā)現(xiàn)MPP8通過調(diào)節(jié)DNA甲基化和組蛋白H3甲基化之間的相互作用，調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄，參與細(xì)胞的各個(gè)生命過程［3］。MPP8結(jié)合甲基化H3K9后可以招募H3K9甲基轉(zhuǎn)移酶GLP和ESET以及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶Dnmt3a形成沉默復(fù)合體到E-cadherin基因的啟動(dòng)子上。對E-cadherin基因啟動(dòng)子的H3K9(H3K9)和DNA進(jìn)行甲基化，抑制E-cadherin的表達(dá)［3］，MPP8通過調(diào)控E-cadherin的表達(dá)，在腫瘤的惡性化過程中扮演著重要的角色。

在本研究中發(fā)現(xiàn)，人皮膚黑色素瘤組織中MPP8蛋白表達(dá)陽性率顯著高于色素痣，且MPP8的表達(dá)量與黑素瘤局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成正相關(guān)。腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位脫落是腫瘤轉(zhuǎn)移的始動(dòng)環(huán)節(jié)，這一過程與細(xì)胞黏附功能降低密切相關(guān)。鈣粘素E-cadherin可與細(xì)胞骨架相互作用，形成具有錨定作用的復(fù)合物。各種原因?qū)е翬-cadherin復(fù)合體的低表達(dá)，都將導(dǎo)致細(xì)胞間粘附連接的減弱，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤的轉(zhuǎn)移。

綜上所述，MPP8在人皮膚黑色素瘤組織中高表達(dá)，并且與局部淋巴結(jié)侵襲關(guān)系密切，作用機(jī)制可能與MET相關(guān)，MPP8在黑色素瘤組織中的作用及作用機(jī)制，需要進(jìn)一步的研究。

［1］Cancer statistics［J］.JAMA，2013，310(9):982.

［2］Chang Y，Horton J R，Bedford M T，et al.Structural insights for MPP8 chromodomain interaction with histone H3 lysine 9:potential effect of phosphorylation on methyl-lysine binding［J］.J Mol Biol，2011，408 (5):807-814.

［3］Kokura K，Sun L，Bedford M T，et al.Methyl-H3K9-binding protein MPP8 mediates E-cadherin gene silencing and promotestumour cell motility and invasion［J］.EMBO J，2010，29(21):3673-3687.

R739.5

A

1002-1701(2015)05-0123-02

2014-07

袁 波，男，碩士，主治醫(yī)師，研究方向:皮膚惡性腫瘤。

寧波市自然科學(xué)基金(編號:2014A610224)。

10.3969/j.issn.1002-1701.2015.05.065