降壓靈I號(hào)對(duì)原發(fā)性高血壓趨化因子CCL22調(diào)控作用的研究

符瓊方，歐奇?zhèn)ィ蠲?/p>

(1.海口市人民醫(yī)院中醫(yī)科，海口570208;2.茂名市慢性病防治中心，廣東茂名525000)

降壓靈I號(hào)對(duì)原發(fā)性高血壓趨化因子CCL22調(diào)控作用的研究

符瓊方1，歐奇?zhèn)?，李茂清2△

(1.海口市人民醫(yī)院中醫(yī)科，?？?70208;2.茂名市慢性病防治中心，廣東茂名525000)

目的:觀察降壓靈I號(hào)對(duì)原發(fā)性高血壓(DH)患者血趨化因子CCL22的調(diào)節(jié)。方法:將80例DH患者按隨機(jī)數(shù)字表法分成2組，2組給予西藥治療，治療組加服中藥降壓靈I號(hào)，治療8周。觀察2組治療前后的臨床癥狀積分、血趨化因子CCL22變化情況，并與40例健康體檢者比較。結(jié)果:EH患者血趨化因子CCL22表達(dá)升高，治療組改善臨床癥狀明顯優(yōu)于治療對(duì)照組，并能降低趨化因子CCL22的表達(dá)。結(jié)論:降壓靈I號(hào)可能通過調(diào)節(jié)血趨化因子CCL22表達(dá)而改善原發(fā)性高血壓的慢性炎癥狀態(tài)。

原發(fā)性高血壓;降壓靈I號(hào);趨化因子

原發(fā)性高血壓(Primary hypertension，PH)是發(fā)生心腦血管事件的重要因素，其免疫學(xué)核心問題是受免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)的進(jìn)展性動(dòng)脈壁炎癥［1-3］。炎癥機(jī)制作為原發(fā)性高血壓發(fā)生發(fā)展的重要基礎(chǔ)，與趨化因子(macrophage-derived chemokine)水平變化密切相關(guān)［4］。中藥治療原發(fā)性高血壓，在改善患者的臨床癥狀方面療效明確。本文采用臨床運(yùn)用多年、具有良好效果的中藥降壓靈I號(hào)聯(lián)合西藥治療原發(fā)性高血壓(陰虛陽亢型)，探討其對(duì)原發(fā)性高血壓患者趨化因子CCL22的影響，以期明確中藥作用的可能機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn)符合2005年我國(guó)衛(wèi)生部和高血壓聯(lián)盟制定的《中國(guó)高血壓防治指南》［5］中原發(fā)性高血壓診斷;中醫(yī)證型標(biāo)準(zhǔn)參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》(2002)中《中藥新藥治療高血壓的臨床研究指導(dǎo)原則》［6］中陰虛陽亢型的標(biāo)準(zhǔn)。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)合并免疫性疾病;繼發(fā)性高血壓;合并嚴(yán)重肝腎功能不全;依從性差者。

1.2 一般資料

選取2011年1月至2013年6月在?？谑腥嗣襻t(yī)院門診或住院治療的原發(fā)性高血壓患者80例，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為治療組和治療對(duì)照組各40例，組內(nèi)男女各半，同時(shí)選取同期在本院體檢健康者40例作為健康對(duì)照組。表1顯示，治療組與治療對(duì)照組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但與健康對(duì)照組在血清總膽固醇、血清LDL、血清HDL、血清甘油三酯、血壓及病程比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

1.3 方法

1.3.1 治療對(duì)照組給予原發(fā)性高血壓常規(guī)治療，給予口服硝苯地平控釋片30 mg/次，每日1次，連續(xù)服用治療8周。治療時(shí)視血壓情況調(diào)整降壓藥的用量和種類;對(duì)血壓未達(dá)標(biāo)者，可視病加服ACEⅡ類、β受體拮抗劑、利尿劑等降壓藥。同時(shí)指導(dǎo)患者減輕體質(zhì)量、合理飲食、適當(dāng)增加運(yùn)動(dòng)等。

表13 組的臨床基線比較(±s)

表13 組的臨床基線比較(±s)

注:3組間頻數(shù)比較采用非參數(shù)Mann-Whitney U檢驗(yàn);3組間計(jì)量資料比較采用單因素方差分析，組內(nèi)兩兩比較采用LSD法;高血壓病程采用非參數(shù)檢驗(yàn)Mann-Whitney U檢驗(yàn)

指標(biāo)例數(shù)治療組治療對(duì)照組健康對(duì)照組P＞0.05 4059.5±8.561.0±9.060.5±8.7＞0.05性別(男/女)4020/20.020/20.020/20.01.00抽煙(人)408.09.06.0＞0.05 BMI指數(shù)(kg/m2)4025.7±4.325.1±4.724.9±4.1＞0.05血清總膽固醇(mmol/L)406.6±1.36.5±1.25.6±1.4＜0.01血清LDL(mmol/L)404.4±1.24.3±1.13.4±1.2＜0.01血清HDL(mmol/L)401.4±0.51.3±0.51.6±0.5＜0.01血清甘油三酯(mmol/L)401.6±0.41.5±0.51.1±0.3＜0.01收縮壓(mmHg)40159±19.0161±20.0119±9.0＜0.01舒張壓(mmHg)4095±4.094±3.081±4.0＜0.01高血壓病程(年)406.5±4.86.8±5.1—年齡(歲)

1.3.2 治療組在治療對(duì)照組用藥基礎(chǔ)上給予口服降壓靈I號(hào):熟地15 g，山藥15 g，山萸肉15 g，枸杞子20 g，牛膝30 g，天麻10 g，石決明30 g(先煎)，黃芩12 g，地骨皮15 g?？诜咳?劑，自動(dòng)煎藥機(jī)煎成200 ml，分2次溫服，連續(xù)服用治療8周。囑其患者服藥期間忌食辛辣刺激之品，戒煙酒、暢情志。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 中醫(yī)臨床癥狀積分參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》［6］中相關(guān)內(nèi)容運(yùn)用等級(jí)癥狀資料積分法制定。即將癥狀按照發(fā)生的頻率、程度及臨床表現(xiàn)的特點(diǎn)，臨床癥狀按無、輕、中、重分別記為0、1、2、3分，記錄6個(gè)主要癥狀變化并計(jì)算治療前后癥狀總積分。

1.4.2 巨噬細(xì)胞參照文獻(xiàn)［7］進(jìn)行巨噬細(xì)胞制備。外周血肝素抗凝后Ficoll密度梯度離心法分離外周血單核細(xì)胞(PBMCs)，用RPMI1640培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞數(shù)，37℃、5%CO2孵箱貼壁3 h后，用培養(yǎng)基洗去黏附細(xì)胞，加入RPMI1640培養(yǎng)基及rhGMCSF，隔2 d半量換液培養(yǎng)7 d。

1.4.3 趨化因子CCL22依照Invitrogen公司提取總RNA操作步驟進(jìn)行提取巨噬細(xì)胞總RNA，測(cè)定RNA的濃度和純度符合要求，按照Promega公司逆轉(zhuǎn)錄操作步驟進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以βactin為內(nèi)參照，采用real-time PCR檢測(cè)CCL22 mRNA表達(dá)水平。其中PCR反應(yīng)中CCL22引物:正義鏈5'-TGC CGT GAT TAC GTC CGT TA-3'和反義鏈5'-AAG GTT AGC AAC ACC ACG CC-3'，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度101 bp。β-actin的引物序列為:正義鏈5'-GCA TGG GTC AGA AGG ATT CTT-3'和反義鏈5'-TCG TCC CAG TTG GTG ACG AT-3'。PCR反應(yīng)條件為93℃3 min，94℃30 s，56℃45 s，72℃45 s，共40循環(huán)，72℃5 min。ABI7500型熒光定量PCR儀(Applied Bio-systems，F(xiàn)oster，CA，USA)檢測(cè)及分析結(jié)果。用Invitrogen公司酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒檢測(cè)外周血中CCL22蛋白表達(dá)水平，每次設(shè)2個(gè)復(fù)孔。酶標(biāo)儀設(shè)置在450 nm處，在30 min內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè)定每個(gè)微量孔的吸光度值，以標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值在半對(duì)數(shù)紙作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣本吸光值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上所對(duì)應(yīng)的值算出相應(yīng)濃度值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)描述，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx± s)表示，3組間計(jì)數(shù)資料比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)，3組間計(jì)量資料比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 原發(fā)性高血壓治療前后中醫(yī)臨床癥狀積分比較

表2顯示，治療組治療后各中醫(yī)臨床癥狀積分較治療前顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0. 01);治療對(duì)照組治療后只有眩暈、頭痛2項(xiàng)有改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，其余各項(xiàng)評(píng)分呈現(xiàn)水平波動(dòng)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。治療組臨床癥狀總積分明顯低于治療對(duì)照組(P＜0.01)，提示治療組在改善整體臨床癥狀方面明顯優(yōu)于治療對(duì)照組。

2.2 原發(fā)性高血壓與健康對(duì)照組趨化因子CCL22表達(dá)差異

圖1、2顯示，提取治療前原發(fā)性高血壓與健康對(duì)照組外周血中巨噬細(xì)胞總RNA，采用real-time PCR檢測(cè)CCL22 mRNA表達(dá)水平;用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)外周血中CCL22蛋白表達(dá)水平。結(jié)果提示，原發(fā)性高血壓(治療組、治療對(duì)照組) CCL22 mRNA/CCL22蛋白表達(dá)高于健康對(duì)照組(P＜0.01)。

2.3 中藥干預(yù)對(duì)原發(fā)性高血壓常規(guī)治療趨化因子CCL22蛋白水平的影響

圖3顯示，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)治療后外周血中CCL22蛋白表達(dá)水平，結(jié)果提示治療后原發(fā)性高血壓治療組CCL22蛋白表達(dá)低于治療對(duì)照組(P＜0.05)。?

表22 組治療前后癥狀積分比較(±s)

表22 組治療前后癥狀積分比較(±s)

注:同組別治療前后比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;同時(shí)點(diǎn)不同組別比較:△△P＜0.01

癥狀治療組(n=40)治療對(duì)照組(n=40)治療前治療后治療前治療后眩暈2.15±0.520.95±0.24＊＊△△2.10±0.491.55±0.46＊＊頭痛2.05±0.400.75±0.21＊＊△△2.00±0.421.65±0.38＊＊腰膝酸軟2.10±0.460.85±0.33＊＊△△2.20±0.482.15±0.43五心煩熱1.95±0.630.80±0.28＊＊△△1.90±0.531.95±0.49耳鳴1.95±0.571.15±0.27＊＊△△2.00±0.551.90±0.57失眠2.00±0.560.75±0.17＊＊△△2.10±0.532.05±0.49總積分12.2±1.905.25±0.85＊＊△△12.30±1.85 11.25±1.83*

圖1 realtime PCR檢測(cè)3組CCL22 mRNA表達(dá)比較

圖2 ELISA檢測(cè)2組CCL22蛋白水平比較

圖3 ELISA檢測(cè)治療后CCL22蛋白水平比較

2.4 高血壓治療后血壓下降與CCL22水平相關(guān)性

采取與指標(biāo)抽血同一時(shí)間段、同一體位對(duì)高血壓患者治療前后進(jìn)行測(cè)量血壓，計(jì)算出用藥前后血壓改變數(shù)值，與治療前后CCL22蛋白水平差值進(jìn)行兩變量相關(guān)分析，結(jié)果顯示兩變量相關(guān)，但相關(guān)系數(shù)偏低(r=0.53，P＜0.05)。

3 討論

隨著我國(guó)人民生活水平提高和飲食習(xí)慣改變，心血管疾病已經(jīng)成為人民健康的最大威脅因素。目前我國(guó)18歲以上高血壓患病人數(shù)達(dá)1.6億人，已經(jīng)成為心血管疾病中最重要的病種。研究資料表明，原發(fā)性高血壓的發(fā)生發(fā)展受多種因素(炎癥因素、基因遺傳因素、飲食環(huán)節(jié)因素等)調(diào)控，其形成過程是一個(gè)循序、綜合性的過程，一旦形成即可能成為持續(xù)性的狀態(tài)。在此過程中，機(jī)體在分子、細(xì)胞學(xué)水平將會(huì)發(fā)生各種變化，其中慢性炎癥機(jī)制導(dǎo)致的動(dòng)脈粥樣硬化成為關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

趨化因子是一類對(duì)不同靶細(xì)胞具有趨化作用的細(xì)胞因子，主要作用是趨化細(xì)胞的遷移，使靶細(xì)胞沿著趨化因子濃度增加的信號(hào)向趨化因子源處的遷徙。大部分趨化因子家族成員分子含4個(gè)保守的半胱氨酸，根據(jù)其氨基端(N端)半胱氨酸的排列方式，分CXC、CC、C、CX3C 4個(gè)亞家族。CC類趨化因子受體是單核細(xì)胞表面最主要的趨化因子受體，該受體的表達(dá)受炎癥介質(zhì)的調(diào)控，而CCL22是CC亞家族中的重要成員［8］。原發(fā)性高血壓中動(dòng)脈粥樣硬化病變的第一步是單核細(xì)胞向動(dòng)脈壁中的滲透。當(dāng)單核細(xì)胞黏附在血管內(nèi)皮后將向內(nèi)膜遷移，在內(nèi)膜細(xì)胞能下分化成巨噬細(xì)胞，并吞噬脂質(zhì)最后變成泡沫細(xì)胞。巨噬細(xì)胞是包含CCL22在內(nèi)的趨化因子、生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子的主要來源，這些因子有助于巨噬細(xì)胞在內(nèi)皮下間隙聚集。上述過程主要由趨化因子及其細(xì)胞表面受體調(diào)控。國(guó)外研究顯示［9-10］，CCL22和其受體CCR4參與呼吸道的過敏性炎癥、過敏性皮膚炎、內(nèi)毒素性休克等多種疾病的發(fā)生和發(fā)展，并對(duì)單核細(xì)胞的遷徙招募或者血小板活性的激活起到重要的介導(dǎo)作用。

本研究結(jié)果顯示，原發(fā)性高血壓患者較健康對(duì)照組外周血CCL22表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.01)。由此我們推測(cè)，原發(fā)性高血壓患者外周血中增高的CCL22可能參與單核細(xì)胞向動(dòng)脈壁中的滲透，并使其在內(nèi)膜分化成巨噬細(xì)胞，在促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。此外，本研究在常規(guī)治療后發(fā)現(xiàn)，外周血CCL22蛋白水平下降，而聯(lián)合中藥降壓靈I號(hào)后外周血中CCL22蛋白水平下降，且下降幅度較單純常規(guī)治療顯著(P＜0.05)。這一結(jié)果提示，中西藥聯(lián)合干預(yù)比單純西藥常規(guī)治療更減少機(jī)體的慢性炎癥，對(duì)于原發(fā)性高血壓的進(jìn)展起到延緩作用。我們對(duì)治療前后血壓下降差值和CCL22蛋白差值進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示具有相關(guān)性，但相關(guān)系數(shù)偏低(r=0.53)，提示高血壓的形成和發(fā)展不但與CCL22的表達(dá)相關(guān)，也受其他多因素的影響。

降壓靈I號(hào)方中熟地、山藥、山萸肉滋陰補(bǔ)腎;枸杞子補(bǔ)益肝腎;牛膝強(qiáng)腎益精，引藥入腎;天麻祛風(fēng)潛陽、止頭痛、眩暈;石決明清肝鎮(zhèn)肝潛陽，兩藥并用平肝潛陽;黃芩、地骨皮清肝瀉火，全方共奏滋補(bǔ)肝腎、養(yǎng)陰填精之功效。本研究結(jié)果證實(shí)，降壓靈I號(hào)對(duì)于改善原發(fā)性高血壓患者眩暈、頭痛、腰膝酸軟、五心煩熱、耳鳴失眠等臨床癥狀起到良好的治療作用。而單純西藥干預(yù)對(duì)于腰膝酸軟、五心煩熱、耳鳴失眠等癥狀改善不明顯。

綜上所述，降壓靈I號(hào)聯(lián)合西藥干預(yù)原發(fā)性高血壓可明顯改善患者的癥狀，其作用機(jī)制之一可能是通過調(diào)節(jié)趨化因子CCL22表達(dá)，降低原發(fā)性高血壓慢性炎癥狀態(tài)而實(shí)現(xiàn)。

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Study on Jiang Ya Ling No．I in regulating the essential hypertension chemokine CCL22

FU Qiong-fang1，OU Qi-wei1，LI Mao-qing2△

(1．People’s hospital of Haikou，Haikou Hainan 570208，China; 2．NCD prevention center of Maoming，Maoming Guangdong，525000，China)

Objective:To observe the regulation of Jiangyaling I on Primary hypertension(PH)patients’blood chemokine CCL22.Methods:80 patients with pH were randomly divided into two groups.Both groups were given western medicine，and the treatment group were added traditional Chinese medicine Jiangyaling I，8 weeks of treatment.Clinical symptom scores and blood chemokine CCL22 levels changes before and after treatment in both groups were observed，and compared with 40 cases physical examination.Results:Patients with PH blood chemokine CCL22 expression factor elevated;and the treatment group improved clinical symptoms significantly better than the control group，and can reduce chemotaxis CCL22 expression factor.Conclusion:Jiangyaling I may regulate blood chemokine CCL22 expression to reduce primary hypertension chronic inflammatory state.

Primary hypertension;Jiangyaling I;Chemokines

R544.1

:B

:1006-3250(2015)05-0553-04

2015-02-23

符瓊方(1982-)，女，海南海口人，主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)科疾病的臨床與研究。

△通訊作者:李茂清(1978-)，男，醫(yī)學(xué)博士，從事中醫(yī)內(nèi)科慢性疾病的臨床與研究，Tel:18023538365，E-mail:329473003@ qq.com。