結(jié)腸安腸溶片劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張葉明，繆冬冬，王 會(huì)，劉曉平

（皖南醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，安徽 蕪湖 241000）

結(jié)腸安腸溶片是以傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)理論為基礎(chǔ)，結(jié)合現(xiàn)代化學(xué)、藥學(xué)研究和臨床使用經(jīng)驗(yàn)而制成的中藥復(fù)方制劑，由黃柏、白頭翁、白芍、白術(shù)和炙甘草等五位中藥制備的腸溶片劑.臨床上用于潰瘍性結(jié)腸炎活動(dòng)期的治療，適用于傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)辨證為濕熱蘊(yùn)結(jié)型、脾虛夾濕型的慢性潰瘍性結(jié)腸炎.方中黃柏和白頭翁共為君藥，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明兩藥都具有清熱燥濕，瀉火去蒸，解毒療瘡、涼血止痢等作用，臣藥、佐藥、使藥分別為白術(shù)、白芍和炙甘草，具有補(bǔ)脾解毒之效[1-4].為了控制片劑質(zhì)量，參考相關(guān)文獻(xiàn)[5-10]，對(duì)黃柏、白頭翁和炙甘草進(jìn)行了薄層鑒別，通過HPLC法對(duì)制劑中鹽酸小檗堿進(jìn)行了定量測(cè)定.

1 材料

1.1 儀器

HeiDolph-LR400/401旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)海道爾夫公司），HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市江南儀器制造公司），KQ-250DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限責(zé)任公司），AUW-220D型底子天平（日本島津公司），LC-20AT高效液相色譜儀，色譜柱為KromasilC18(4.6mm×200mm)（大連中匯達(dá)科學(xué)儀器公司），SPD-M20A紫外檢測(cè)器（SHIMADZA），CTO-10AS柱溫箱.

1.2 藥品及試劑

結(jié)腸安腸溶片劑自制，批號(hào)為：20141201、20141202、20141203；鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品（商品號(hào)：0915-201312）購(gòu)于安徽省藥品生物制品檢定所；薄層硅膠G，青島海洋生物制品廠；乙腈是色譜純，其余試劑都是分析純，水為二重蒸餾水.

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

2.1.1 黃柏鑒別

取制劑1片，去除外層薄膜衣，研碎.精密稱得0.2g，加入10.0ml甲醇.索氏提取30.0min，濾液定容至10.0ml備用，同樣方法制得沒有黃柏藥材的陰性溶液.稱取黃柏對(duì)照藥材0.5g，按上操作配置成對(duì)照藥材溶液.稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加入甲醇配成濃度為0.5mg/ml溶液.吸取上述4種溶液各1.0μl，在薄層硅膠G板上點(diǎn)樣，用苯—乙酸乙酯—異丙醇—甲醇(12.0：6.0：3.0：3.0)作展開劑，置飽和氨蒸氣的展開缸內(nèi)，晾干，放于紫外光燈(365nm)條件下視檢.供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同黃色熒光斑點(diǎn)[11-12].如圖1所示.

圖1 黃柏鑒別TCL圖

2.1.2 白頭翁鑒別

圖2 白頭翁鑒別TCL圖

精確稱取剔除薄膜衣后研碎的粉末0.5g，與30.0ml乙醇混合，超聲30.0min，加熱濃縮過濾液至2.0ml即得，同樣方法制得藥材溶液和陰性對(duì)照品溶液.吸取上述3種溶液各3.0μl，在薄層硅膠G板上點(diǎn)樣，以氯仿—水—甲醇(16.0：2.0：5.0)下層溶液為展開劑，展開、晾干，噴10%的硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)清晰[13].供試品色譜中，在與藥材相對(duì)應(yīng)的位置上，顯示顏色相同的斑點(diǎn).如圖2所示.

2.1.3 炙甘草鑒別

精確稱取剔除薄膜衣后研碎的粉末5.0g，加1.0ml鹽酸、15.0ml氯仿，索氏提取70.0min得過濾液，用20.0ml氨試液萃取過濾液，除去氨試液，蒸干氯仿液，加2.0ml乙醇溶解殘?jiān)吹?同樣操作制成陰性樣品溶液和對(duì)照藥材溶液.稱甘草次酸對(duì)照品，加乙醇配成濃度為1.0mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液.吸取上述3種溶液各3.0μl，在薄層硅膠G板上點(diǎn)樣，以氯仿—石油醚(30～60℃)—乙酸乙酯—冰醋酸(20.0：10.0：7.0：0.5)的溶液為展開劑，展開、晾干，噴 10%磷鉬酸的乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)清晰[14].供試品色譜中，在與對(duì)照品、對(duì)照藥材色譜相對(duì)應(yīng)的位置，顯顏色相同的斑點(diǎn)，如圖3所示.

圖3 炙甘草鑒別TCL圖

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件

色譜柱為 KromasilC18(4.6mm×200mm)、0.033mol/L磷酸二氫鉀—乙腈(18：7)為流動(dòng)相、檢測(cè)波長(zhǎng)為350nm、柱溫為室溫、流量為0.80ml/min、按鹽酸小檗堿峰計(jì)算理論板數(shù)應(yīng)不得低于3000[15].

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

準(zhǔn)確稱量負(fù)壓干燥24h后的鹽酸小檗堿對(duì)照品，加乙醇配成濃度為0.2mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液.

2.2.3 供試品溶液的制備

精密稱量剔除薄膜衣后的粉末0.6g，加入適量乙醇，索氏提取5.0h，蒸干提取液，到15ml大小的量瓶中定容，用0.45μm的濾膜過濾即得.

2.2.4 測(cè)定方法

準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液5μL、供試品溶液10μL，分別注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定.

2.2.5 方法學(xué)考察

2.2.5.1 線性范圍的考察

準(zhǔn)確量取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加乙醇配成每濃度為0.238mg/ml的溶液，依次準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液1μl、3μl、5μl、7μl和 9μl，分別注入高效液相色譜儀，結(jié)果如表1.

分別以進(jìn)樣量、峰面積值為橫、縱坐標(biāo)作圖，得到一條近似通過原點(diǎn)的直線（見圖4）.回歸方程為Y=4980011.617X－226631.584，r=0.9996.結(jié)果表明：鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.239mg至2.141mg之間，進(jìn)樣量與峰面積值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系.

表1 鹽酸小檗堿對(duì)照品色譜峰面積值的測(cè)定表

圖4 高效液相色譜法繪出鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.5.2 精密度考察

反復(fù)進(jìn)同一供試品溶液6次，然后計(jì)算RSD，得其結(jié)果為2.20%，如表2所示.

2.2.5.3 重現(xiàn)性考察

取第一批次的結(jié)腸安腸溶片適量，分5份，剔除薄膜衣，研碎，精密稱取，按照[含量測(cè)定]項(xiàng)下的方法操作測(cè)定結(jié)腸安腸溶片中鹽酸小檗堿的含量.測(cè)定結(jié)果如表3所示.

2.2.5.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

表2 精密度實(shí)驗(yàn)的結(jié)果

同時(shí)吸取檢測(cè)放置了 4h、8h、12h、16h、20h和 24h的供試品溶液中鹽酸小檗堿的含量.穩(wěn)定性考察相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值為2.20%，顯示供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定，如表4所示.

2.2.5.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確量出鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，配置成濃度確定的溶液.加到已知鹽酸小檗堿含量的結(jié)腸安腸溶片（第一批次藥片中鹽酸小檗堿的含量為0.3445%，詳見重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)）中，按［含量測(cè)定］操作，配制供試品溶液.用25ml的容量瓶定容.測(cè)定結(jié)腸安腸溶片中含鹽酸小檗堿的量，計(jì)算回收率（表 5）.

表3 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果

表4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果

表5 鹽酸小檗堿回收率的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果

鹽酸小檗堿回收率=（實(shí)測(cè)值－樣品含量）/對(duì)照品加入量×100%

2.2.5.6 鹽酸小檗堿含量測(cè)定

取本片劑2片，剔除薄膜衣，研碎，精密稱量0.6g，置于索氏提取器，乙醇作溶媒，加熱回流6個(gè)小時(shí)，蒸干提取液，定容到10ml的量瓶中，用大小為0.45μm的濾膜濾過，得供試品溶液.測(cè)定三批樣品中鹽酸小檗堿的含量（表6）.

表6 三批制劑中含鹽酸小檗堿測(cè)定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)得出：本制劑中鹽酸小檗堿的含量基本保持穩(wěn)定，因此總含量不超出平均含量的20%為本片劑限度.限定本制劑鹽酸小檗堿含量不得低于0.26%，即每片制劑中鹽酸小檗堿量不得低于1.8mg（每片重量為0.7g）.

3 討論

本課題處方中的五味藥材，通過薄層色譜法對(duì)黃柏、白頭翁、和炙甘草進(jìn)行了定性鑒別，通過HPLC法對(duì)黃柏進(jìn)行了定量鑒別.因本品中的白頭翁、炙甘草在進(jìn)行液相鑒別時(shí)分離度不強(qiáng)，特異性不高，所以采用薄層色譜定性鑒別.

采用HPLC法測(cè)定鹽酸小檗堿含量時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的出峰時(shí)間都在18min前后.本課題實(shí)驗(yàn)選擇了兩種流動(dòng)相乙腈與磷酸二氫鉀水溶液的配比，如20:80，25:75，30:70等，有的配比使得峰型重疊、拖尾，甚至有的配比在規(guī)定時(shí)間無峰.經(jīng)過多次探索最終得出在28:72的配比下，出峰時(shí)間和峰的形狀都比較理想.

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