宮頸病變組織中 USP22、HIF-1α表達(dá)變化

摘要:目的　觀察宮頸病變組織中泛素特異性肽酶22(USP22)、缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)表達(dá)變化。方法選擇15例正常宮頸(對(duì)照組)、25例CIN(CIN組)、45例宮頸癌(宮頸癌組)患者的宮頸組織，分別用免疫組化法、RT-PCR法檢測(cè)各組宮頸標(biāo)本中的USP22、HIF-1α蛋白及mRNA。結(jié)果　對(duì)照組、CIN組、宮頸癌組USP22蛋白陽性表達(dá)率分別為0、32．0%、57．8%，HIF-1α蛋白陽性表達(dá)率分別為20．0%、56．0%、82．2%。各組USP22、HIF-1α蛋白陽性表達(dá)率比較，P均＜0．05。對(duì)照組、CIN組、宮頸癌組USP22 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1．047±0．339、2．214±0．866、5．822±5．489，HIF-1α mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1．048±0．315、2．305±1．083、4．313±3．122，各組USP22、HIF-1α mRNA相對(duì)表達(dá)量比較，P均＜0．05。結(jié)論　宮頸組織USP22、HIF-1α表達(dá)隨宮頸病變惡性程度提高而升高，二者共同參與宮頸惡性病變的發(fā)生發(fā)展過程。

doi: 10．3969/j．issn．1002-266X．2015．38．022

文獻(xiàn)標(biāo)志碼: B

文章編號(hào): 1002-266X(2015)38-0056-02

通信作者:孔紅霞

宮頸癌是全球最常見的婦科惡性腫瘤之一。從宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)演變成宮頸癌一般歷時(shí)數(shù)年，其間適當(dāng)干預(yù)可阻止惡變。泛素特異性肽酶22 (USP22)是一種特異性較高的去泛素化酶，在多種惡性腫瘤中普遍高表達(dá)，也是腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物之一 ［1～3］，但在宮頸疾病的表達(dá)國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)道。缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)是組織細(xì)胞在缺氧狀態(tài)下最主要的轉(zhuǎn)錄因子，在腫瘤的血管形成、能量代謝、侵襲轉(zhuǎn)移等方面起著關(guān)鍵作用 ［4］。2014年1～10月，我們檢測(cè)比較了正常宮頸、CIN、宮頸癌組織中USP22、HIF-1α蛋白及mRNA表達(dá)，探討二者在宮頸癌和CIN診斷、治療及預(yù)后判斷中的臨床價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1材料與方法

1．1臨床資料　宮頸癌組織45例(宮頸癌組)，取自行子宮全切術(shù)治療的宮頸癌患者，年齡29～65 歲;腺癌2例，鱗癌43例;臨床分期Ⅰ期18例，Ⅱ期20例，Ⅲ期及以上7例;病理分級(jí)G 1級(jí)20例，G 2級(jí)14例，G 3級(jí)11例;術(shù)前均未接受放化療。CIN標(biāo)本25例，取自行宮頸錐切術(shù)或子宮全切術(shù)的CIN患者，年齡24～55歲;正常宮頸組織標(biāo)本15例(對(duì)照組)，取自子宮肌瘤行子宮全切術(shù)患者，年齡40～59歲。

1．2 USP22、HIF-1α蛋白檢測(cè)方法　采用免疫組化法。取各組宮頸組織標(biāo)本，甲醛固定，石蠟包埋。免疫組化染色試劑盒購于武漢三鷹生物技術(shù)有限公司，嚴(yán)格按說明書操作。USP22以細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，HIF-1α以細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均出現(xiàn)棕色顆粒為陽性。高倍鏡下取10個(gè)視野，每個(gè)視野至少計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。陽性細(xì)胞數(shù)＜5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，51%～75% 為3分，≥75%為4分;陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度，細(xì)胞無顯色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，黃棕色為3分。2項(xiàng)評(píng)分乘積＜1為陰性，≥1為陽性。

1．3 USP22、HIF-1α mRNA檢測(cè)方法　采用RTPCR法，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，以GAPDH作為內(nèi)參。ΔCT = CT(目的基因)－CT(內(nèi)參基因)，以ΔCT值代表宮頸組織目的基因的表達(dá)情況，以2 －ΔΔCT代表各組宮頸組織目的基因表達(dá)相對(duì)于內(nèi)參的變化倍數(shù)。

1．4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法　采用SPSS 16．0統(tǒng)計(jì)軟件。組間比較采用χ 2檢驗(yàn)和方差分析。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2．1 USP22、HIF-1α蛋白　對(duì)照組、CIN組、宮頸癌組USP22蛋白陽性表達(dá)率分別為0、32．0%(8/25)、57．8% (26/45)，HIF-1α蛋白陽性表達(dá)率分別為20．0% (3/15)、56．0% (14/25)、82．2% (37/45)。各組USP22、HIF-1α蛋白陽性表達(dá)率比較，P均＜0．05。。

2．2 USP22、HIF-1α mRNA對(duì)照組、CIN組、宮頸癌組USP22 mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1．047± 0．339、2．214±0．866、5．822±5．489，HIF-1α mRNA相對(duì)表達(dá)量分別為1．048±0．315、2．305±1．083、4．313±3．122;各組USP22、HIF-1α mRNA相對(duì)表達(dá)量比較，P均＜0．05。

3　討論

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤，分子靶向治療已經(jīng)成為近年來宮頸癌研究的熱點(diǎn) ［5］。USP22是泛素特異性水解酶家族成員之一，在各種惡性腫瘤中高度表達(dá)。其基因位于人類第17號(hào)染色體上，編碼的蛋白質(zhì)主要通過去泛素化的作用，調(diào)節(jié)修飾細(xì)胞內(nèi)一系列的生物化學(xué)反應(yīng)，如細(xì)胞的生長(zhǎng)分化、控制細(xì)胞周期、激活轉(zhuǎn)錄因子、調(diào)控信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等。研究 ［6］認(rèn)為，USP22可作為腫瘤干細(xì)胞新標(biāo)簽，有望成為控制腫瘤的關(guān)鍵點(diǎn)。其作用機(jī)制可能是USP22將組蛋白H2A、H2B泛素化作用降解，從而控制基因復(fù)制和表達(dá)，以此調(diào)節(jié)細(xì)胞周期 ［7］。鄧美洲等 ［8～10］采用RNA干擾技術(shù)有效沉默USP22基因表達(dá)，明顯抑制了腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，但具體機(jī)制仍不明確。胡晶等 ［10］報(bào)道，USP22表達(dá)與小細(xì)胞肺癌病理分級(jí)、臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。近年來有學(xué)者報(bào)道，USP22在直腸癌、肝癌、膀胱癌、胃癌、口腔鱗癌、食管鱗癌中高表達(dá)，但在宮頸癌中的表達(dá)國(guó)內(nèi)尚無報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，USP22蛋白、mRNA在宮頸癌組織中同樣高表達(dá)，提示USP22在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。

HIF-1α是與腫瘤缺氧微環(huán)境有關(guān)的核心轉(zhuǎn)錄因子 ［11］。正常組織中HIF-1α主要通過泛素化作用降解，若過表達(dá)則會(huì)導(dǎo)致下游的靶基因高表達(dá)。例如，HIF-1α作用于糖酵解關(guān)鍵酶為腫瘤的生長(zhǎng)提供能量，或作用于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF) ［12］等，從而為腫瘤血行轉(zhuǎn)移和淋巴轉(zhuǎn)移提供了保障。文獻(xiàn) ［13］報(bào)道，宮頸癌組織中HIF-1α表達(dá)與組織病理分級(jí)、分期等相關(guān)，可作為早期宮頸癌和宮頸癌預(yù)后的判斷指標(biāo)。尤其是HIF-1α、VEGF在宮頸癌中的表達(dá)高度相關(guān) ［13，14］，更進(jìn)一步證實(shí)，HIF-1α為宮頸癌腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)提供了血供，為腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移開辟了道路。本研究結(jié)果與之相符。本研究結(jié)果顯示，宮頸病變組織中USP22、HIF-1α表達(dá)變化趨勢(shì)一致。這可能是由于USP22去除了與HIF-1α結(jié)合的泛素，使HIF-1α高表達(dá); HIF-1α作用于下游VEGF促使血管生成，為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移開辟道路，同時(shí)激活糖酵解的關(guān)鍵酶為腫瘤提供能量。USP22過表達(dá)可調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，使腫瘤細(xì)胞無限增殖，無限增殖的腫瘤細(xì)胞就會(huì)形成缺氧微環(huán)境;這一方面誘導(dǎo)了HIF-1α的高表達(dá)，另一方面又可反過來影響機(jī)體泛素—去泛素化的平衡，激發(fā)USP22高表達(dá)。有研究 ［15］表明，當(dāng)細(xì)胞處于氧飽和度相對(duì)較高的狀態(tài)下，HIF-1α幾乎不表達(dá)。是否可以通過調(diào)節(jié)氧濃度來調(diào)控USP22的表達(dá)從而控制腫瘤發(fā)展，有待進(jìn)一步研究。