關(guān)于動(dòng)物疫病檢測(cè)的探討和分析

李 斌

（廣州市從化區(qū)無(wú)規(guī)定馬屬動(dòng)物疫病區(qū)管理中心，廣東廣州 510920）

關(guān)于動(dòng)物疫病檢測(cè)的探討和分析

李 斌

（廣州市從化區(qū)無(wú)規(guī)定馬屬動(dòng)物疫病區(qū)管理中心，廣東廣州 510920）

對(duì)于動(dòng)物養(yǎng)殖而言，疾病是無(wú)法避免的，如何有效做好動(dòng)物常見(jiàn)疫病的診斷與治療是擺在我們面前的首要難題。隨著技術(shù)的進(jìn)步與發(fā)展，關(guān)于動(dòng)物常見(jiàn)疫病的檢測(cè)更是備受大家的關(guān)注。為此，文章以“動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)”為主要研究對(duì)象，展開(kāi)探討和分析，希望能為進(jìn)一步做好動(dòng)物常見(jiàn)疫病的檢測(cè)工作提供一定的依據(jù)和參考。

動(dòng)物疫病；檢測(cè)；探討；分析

1 前言

要想做好動(dòng)物疫病的治療，首要的是要準(zhǔn)確識(shí)別疫病，進(jìn)而采取準(zhǔn)確、合理的治療措施。為此，文章就豬瘟、藍(lán)耳、Elisa檢測(cè)以及布魯氏菌虎紅平板檢測(cè)等展開(kāi)探討。

2 關(guān)于幾種動(dòng)物常見(jiàn)疫病檢測(cè)的探討和分析

2.1 豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測(cè)方法

2.1.1 目的

這種方法的主要原理就是通過(guò)待檢測(cè)抗體與單克隆抗體和豬瘟病毒抗原的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，根據(jù)最終的顯色程度來(lái)進(jìn)行判別。本方法是用于檢測(cè)豬血清或血漿中豬瘟病毒抗體的一種阻斷ELISA方法，通過(guò)待測(cè)抗體和單克隆抗體與豬瘟病毒抗原的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，采用辣根過(guò)氧化物酶與底物的顯色程度來(lái)進(jìn)行判定。

2.1.2 步驟

首先要保證實(shí)驗(yàn)所需要的試劑盒組必須恢復(fù)到室溫18～25℃，至少要在使用1h之前將其置于室溫條件下。

具體操作時(shí)，分別于檢測(cè)孔和對(duì)照孔中各加入50μl的樣品稀溶液；緊接著在相應(yīng)的對(duì)照孔中分別加入陽(yáng)性對(duì)照液和陰性對(duì)照液體，劑量為50μl，但是需要注意的是，及時(shí)更換洗頭，以防造成污染，并最終影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果；最后，于剩下的檢測(cè)孔中加入50μl的被檢測(cè)樣品。待輕輕彈動(dòng)微量反應(yīng)板，直至反應(yīng)板中的溶液搖晃均勻后，封條封閉，放置于溫度大約在25℃左右的濕箱中，孵育2h之后，將反應(yīng)孔中的液體吸出后，洗滌三次。

之后，于反應(yīng)孔中加入抗CSFV酶標(biāo)二抗100μl，再次封條封閉反應(yīng)板，置于室溫條件下孵育30min。洗板后，于反應(yīng)空中加入底物溶液100μl，放置于避光的室溫條件下10min，需要注意的是，在第一反應(yīng)孔加滿(mǎn)之后，計(jì)時(shí)開(kāi)始。

10min后將終止液100μl按照加酶標(biāo)二抗的順序分別加入每一個(gè)反應(yīng)孔中，在450nm處測(cè)定樣本以及對(duì)照的吸光值，也可用450nm和620nm的雙波長(zhǎng)測(cè)定樣本以及對(duì)照的吸光度值，空氣調(diào)零。

待上述步驟完成后，按公式計(jì)算出樣本和對(duì)照的平均吸光度值，如果被檢樣本的阻斷率大于或等于40%，該樣本被判定為陽(yáng)性（有CSFV抗體存在）。如果被檢樣本的阻斷率小于或等于30%，該樣本被判定為陰性，即沒(méi)有抗體的存在。

2.2 布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)

2.2.1 目的

虎紅平板凝集實(shí)驗(yàn)的主要目的就是為了檢測(cè)布魯氏菌病。

2.2.2 步驟

該實(shí)驗(yàn)需要抗原、標(biāo)準(zhǔn)的陽(yáng)性血清和陰性血清。另外，為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，還需要準(zhǔn)備干凈的玻璃板，保證被檢測(cè)的血液務(wù)必要新鮮，沒(méi)有明顯的蛋白凝塊，更沒(méi)有溶血現(xiàn)象，沒(méi)有腐敗的氣味。

在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，要在干凈的玻璃板上畫(huà)上方格，準(zhǔn)備好吸管或者分裝器以及牙簽、火柴桿等。

該實(shí)驗(yàn)的具體操作方法是對(duì)待檢測(cè)的血清進(jìn)行編號(hào)后，加入0.03ml的相應(yīng)血清，然后再滴加0.03ml的抗原于待檢測(cè)血清旁，之后用牙簽或者火柴桿慢慢攪動(dòng)血清，使其與抗原結(jié)合，然后采用陰性、陽(yáng)性對(duì)照的方法進(jìn)行試驗(yàn)。

關(guān)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定，如果4min內(nèi)被檢測(cè)的血清肉眼可見(jiàn)凝集現(xiàn)象，則呈陽(yáng)性，如果未見(jiàn)凝集，而是均勻粉紅色，則為陰性。

2.3 家禽的禽流感HA、HI凝集試驗(yàn)

2.3.1 目的

HA-HI凝集試驗(yàn)主要是為了檢測(cè)流感。

2.3.2 步驟

首先要配置濃度為1%的紅細(xì)胞懸液，紅細(xì)胞必須是SPF公雞或無(wú)禽流感和新城疫等抗體的健康公雞。應(yīng)特別關(guān)注所測(cè)病原的抗體是否存在于雞體內(nèi)。雞血液的采集應(yīng)規(guī)范，保證無(wú)菌操作，避免雜菌污染，因?yàn)槲廴舅斐傻姆橇鞲衅鹪吹哪匾部膳c所有抗原血清發(fā)生非特異性反應(yīng)，同時(shí)采血時(shí)應(yīng)避免溶血和凝血現(xiàn)象發(fā)生。建議使用與血清來(lái)源相同的禽種紅細(xì)胞。

另外，血細(xì)胞應(yīng)根據(jù)所需確定所取，血細(xì)胞的洗滌應(yīng)保證上清液為透明狀為準(zhǔn)，洗滌過(guò)程中注意輕柔吹打和混勻，同時(shí)應(yīng)注意每次洗滌時(shí)更換吸管，尤其在吸取血細(xì)胞時(shí)。

1%紅細(xì)胞懸液制備中最后一次洗滌為3 000 r/min或2 000 g離心10 min進(jìn)行紅細(xì)胞壓積。

洗滌后的血細(xì)胞加入PBS配制成的1%紅細(xì)胞懸液應(yīng)放置 4℃環(huán)境中 60 min 左右進(jìn)行觀察，無(wú)溶血等異常后再置室溫中進(jìn)行試驗(yàn)。

事實(shí)上，除雞外有些禽的血清可能對(duì)雞紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性的凝集。當(dāng)確認(rèn)這種特性時(shí)，用雞紅細(xì)胞對(duì)試驗(yàn)血清進(jìn)行吸附，可以去除非特異凝集素、非特異性凝集抑制素，或者選用在調(diào)查研究中的禽種紅細(xì)胞。吸附方法是在每0.5 ml的抗血清中加入0.025 ml的雞紅細(xì)胞，輕搖后靜置至少30 min；800 g 離心 2～5 min，收集上清，即為處理后的血清。亦可用被檢禽種的紅細(xì)胞。

建議使用 90 度 V 型一次性?xún)?yōu)質(zhì)塑料反應(yīng)板進(jìn)行HA-HI試驗(yàn)。反應(yīng)試劑應(yīng)按規(guī)定保存和使用。凍干的試劑應(yīng)按照說(shuō)明中規(guī)定的體積重新溶解并保存。為避免反復(fù)凍融和細(xì)菌污染，建議以無(wú)菌操作將試劑分裝成小包裝，因?yàn)榉磸?fù)凍融比4 ℃放置更易降低反應(yīng)試劑的效價(jià)。

HA試驗(yàn)時(shí)，最好同時(shí)進(jìn)行2排病毒抗原的測(cè)定，判定結(jié)果時(shí)取平均值作為血凝終點(diǎn)滴度。

3 結(jié)語(yǔ)

從上文的論述中，我們不難看出一些先進(jìn)的技術(shù)方法在疫病的檢測(cè)方面的確有著諸多無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì)，但每一種檢測(cè)方法往往都存在一定的局限性與缺陷，在實(shí)際應(yīng)用的過(guò)程中一定要尤為注意，否則勢(shì)必會(huì)在某種程度上影響到實(shí)驗(yàn)的效果。為此，在實(shí)際應(yīng)用的過(guò)程中，一定要了解并掌握相關(guān)的注意事項(xiàng)，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，從而為進(jìn)一步做好常見(jiàn)疫病的檢測(cè)提供有力的依據(jù)和參考。

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