植物源性轉(zhuǎn)基因食品PCR衍生技術(shù)研究進(jìn)展

胡金強(qiáng)，雷俊婷，孫新城，景建洲，章銀良，董彩文，高 輝，耿 堯，姜春鵬

（1.鄭州輕工業(yè)學(xué)院食品與生物工程學(xué)院，河南鄭州450002；2.食品生產(chǎn)與安全河南省協(xié)同創(chuàng)新中心，河南鄭州450002；3.河南省食品安全國際聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，河南鄭州450002）

植物源性轉(zhuǎn)基因食品PCR衍生技術(shù)研究進(jìn)展

胡金強(qiáng)1，2，3，*，雷俊婷1，孫新城1，景建洲1，章銀良1，董彩文1，高 輝1，耿 堯1，姜春鵬1

（1.鄭州輕工業(yè)學(xué)院食品與生物工程學(xué)院，河南鄭州450002；2.食品生產(chǎn)與安全河南省協(xié)同創(chuàng)新中心，河南鄭州450002；3.河南省食品安全國際聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，河南鄭州450002）

轉(zhuǎn)基因食品尤以植物源性轉(zhuǎn)基因食品的安全性已成為公眾關(guān)注的焦點(diǎn)。針對(duì)植物源性轉(zhuǎn)基因食品甄別與安全性評(píng)估，已有多種檢測(cè)手段得到廣泛應(yīng)用。PCR衍生技術(shù)因?yàn)榫哂懈咛禺愋浴⒏呙舾行缘燃夹g(shù)優(yōu)勢(shì)，為植物源性轉(zhuǎn)基因食品的快速、準(zhǔn)確檢測(cè)提供了有效方法。PCR衍生技術(shù)包括多重PCR技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、多重巢式PCR技術(shù)以及多重PCR-DHPLC技術(shù)。本文就植物源性轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)的PCR衍生技術(shù)的研究進(jìn)展作簡要綜述。

植物源性，轉(zhuǎn)基因食品，PCR

轉(zhuǎn)基因食品（Genetically Modified Food，GMF）是由轉(zhuǎn)基因生物加工生產(chǎn)的食品和食品添加劑[1-3]。隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的推廣，轉(zhuǎn)基因食品已廣泛滲透到食物鏈中。近年來，食品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)進(jìn)行食品的商品化生產(chǎn)與加工。轉(zhuǎn)基因食品的種類迅速增加，產(chǎn)銷量與銷售額也大幅上升。雖然轉(zhuǎn)基因技術(shù)應(yīng)用于食品生產(chǎn)促使食品工業(yè)快速發(fā)展，但其安全性具有巨大爭議[4-5]。人類進(jìn)行生物種內(nèi)或近緣種間有性雜交的傳統(tǒng)育種已有百年，從未提出生物安全性評(píng)價(jià)的問題。轉(zhuǎn)基因食品是利用生物種間基因重組生產(chǎn)的，無法對(duì)其長期效應(yīng)進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)[6]。轉(zhuǎn)基因食品涵蓋植物源、動(dòng)物源以及微生物源食品。其中，植物源性轉(zhuǎn)基因食品最普遍，常用于植物源性食品的轉(zhuǎn)基因作物有玉米、大豆、油菜、水稻等。Raffaele M等[7]研究證實(shí)經(jīng)轉(zhuǎn)基因玉米喂養(yǎng)的豬，在它們的血液、脾、肝、腎等器官發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因碎片。Jeffrey S[8]研究發(fā)現(xiàn)，在老鼠食用的大豆中添加轉(zhuǎn)基因成分后，老鼠的日常行為均出現(xiàn)異常，半數(shù)以上老鼠出生時(shí)或出生3周內(nèi)死亡。因此，建立與推廣現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因食品快速、靈敏、特異、自動(dòng)化檢測(cè)，是保障食品安全的必要條件。由于傳統(tǒng)PCR技術(shù)不能進(jìn)行定量檢測(cè)，且容易產(chǎn)生假陽性與假陰性結(jié)果，因此在轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)中受到了限制[9]。相比之下，經(jīng)改進(jìn)的PCR衍生技術(shù)在轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)中具有明顯優(yōu)勢(shì)[9]。本文就植物源性轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)的PCR衍生技術(shù)進(jìn)行簡要綜述。

1 多重PCR技術(shù)

多重PCR（multiplex PCR）又稱復(fù)合PCR，是由傳統(tǒng)PCR技術(shù)發(fā)展而來，即將多條引物和多條模板DNA混合在同一個(gè)反應(yīng)體系中，分別擴(kuò)增不同的目的基因片段，或者多條引物和單一模板DNA混合在同一反應(yīng)體系中擴(kuò)增同一模板的不同目的基因片斷，進(jìn)行特異性檢測(cè)。

利用多重PCR技術(shù)高通量的特點(diǎn)，能夠?qū)χ参镌葱允称分修D(zhuǎn)基因成分進(jìn)行定性與定量檢測(cè)。對(duì)于單一源性食品的檢測(cè)和通用性食品的檢測(cè)，選用篩選基因啟動(dòng)子（CaMV35S啟動(dòng)子[10-17]、Ubiquitin啟動(dòng)子[11]、FMV35S啟動(dòng)子[14]）、篩選基因終止子（如NOS基因[10-17]）、內(nèi)源基因（如大豆凝集素基因[10，17]和肌動(dòng)蛋白基因[10，17]、水稻SPS基因[11-12]、玉米zSSIIb基因[13]、油菜PEP基因[14]、柑橘肌動(dòng)蛋白基因[15]、小麥UidA基因[16]），品系特異性基因（EPSPS基因[10，13]、BAR基因[11-14，16]、PAT基因[13-14]）。為排除假陰性的檢測(cè)結(jié)果，以宿主內(nèi)部的特異性基因作為擴(kuò)增內(nèi)標(biāo)（如大豆凝集素基因[10，17]和肌動(dòng)蛋白基因[10，17]）。利用報(bào)告基因（GUS基因[12]、NPTII基因[14]）的表達(dá)產(chǎn)物標(biāo)定目的基因進(jìn)行篩選。

多重PCR技術(shù)靈敏度可達(dá)0.1%～0.9%，滿足國際標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定轉(zhuǎn)基因食品1%檢測(cè)底線的要求。該技術(shù)還具有操作簡單、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。近年來，多重PCR檢測(cè)技術(shù)涉及多種植物源性轉(zhuǎn)基因食品，包括水稻[10-12]、玉米[10，13]、油菜[10，14]、柑橘[15]、小麥[10，16]、大豆[10，17]等。

2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是由美國Applied Biosystems公司于1996年首先推出，其原理是在PCR指數(shù)擴(kuò)增期間通過連續(xù)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)出現(xiàn)的先后順序以及信號(hào)強(qiáng)弱的變化實(shí)時(shí)分析目的基因的拷貝數(shù)目，再通過與加入已知量的標(biāo)準(zhǔn)樣品比對(duì)，實(shí)現(xiàn)對(duì)未知樣品即時(shí)定量的分析檢測(cè)。

由于實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)具有精確定量與高靈敏度的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于植物源性轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)。根據(jù)內(nèi)源基因（如大豆凝集素基因[18-20]、小麥UidA基因[19，21]、水稻SPS基因[20]、GOS基因[22]與CpTI基因[26-27]、油菜FatA基因[19-20]、玉米zSSIIb基因[20，23-25]）與品系特異性基因設(shè)計(jì)特異性引物與探針，驗(yàn)證內(nèi)源基因的物種特異性與外源基因邊界序列的品系特異性。通過標(biāo)記熒光素（如FAM[18-27]）進(jìn)行可視化定量檢測(cè)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)靈敏度高，可達(dá)0.01%～ 0.1%。操作完全自動(dòng)化，大幅減少假陽性結(jié)果。該技術(shù)還具有精確定量、重現(xiàn)性好、特異性強(qiáng)、快速的特點(diǎn)[28]。目前，該技術(shù)涉及植物源性轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)，包括大豆[18-20]、油菜[19-20]、小麥[19，21]、水稻[20，22，26-27]、玉米[20，23-25]等。

3 多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)

多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是結(jié)合高特異性的多重PCR技術(shù)與高靈敏度的實(shí)時(shí)熒光定量PCR的新技術(shù)。該技術(shù)是在精確度不高的普通實(shí)時(shí)熒光定量PCR體系中加入多條特異性引物，實(shí)現(xiàn)定性與精確定量檢測(cè)深加工食品樣品中的轉(zhuǎn)基因成分。

多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)能夠同時(shí)進(jìn)行多個(gè)樣品多個(gè)靶序列的高通量檢測(cè)。利用植物源性轉(zhuǎn)基因食品中最頻繁使用的基因，（如玉米[29-32]、大豆[29-32]、水稻[30-32]、油菜[30-32]、番茄[30-33]、小麥[31]、土豆[31-32]、甜菜[31-32]中的）內(nèi)源基因，篩選基因啟動(dòng)子（如CaMV35S啟動(dòng)子[29-34]、FMV35S啟動(dòng)子[30-32]），篩選基因終止子（如NOS基因[29-34]），品系特異性基因（如EPSPS基因[29-32]、Cry1A基因[29-32]、PAT基因[30-31]、BAR基因[30-32]）與報(bào)告基因（如NPTII基因[30-34]）設(shè)計(jì)引物。擴(kuò)增時(shí)選擇長度相近、小于20拷貝的目標(biāo)序列，G＋C含量及熔解溫度相近的引物[29-32]。通過設(shè)置陽性與陰性對(duì)照，能夠檢測(cè)出樣品間潛在的交叉污染，減少假陽性與假陰性的檢測(cè)結(jié)果，大幅提高靈敏度與特異性[29-32]。

多重實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)90%以上的已知轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)。該技術(shù)還具有穩(wěn)定性好、可視化、快速的特點(diǎn)。目前，該技術(shù)涉及植物源性的轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)，包括玉米[29-32]、大豆[29-32]、水稻[30-32]、油菜[30-32]、番茄[30-33]、小麥[31]、土豆[31-32]、甜菜[31-32]等。

4 多重巢式PCR技術(shù)

巢式PCR技術(shù)原理是先對(duì)靶DNA進(jìn)行第一次擴(kuò)增，從第一次反應(yīng)產(chǎn)物中取出少量作為第二次擴(kuò)增的反應(yīng)模板，第二次PCR引物與第一次反應(yīng)產(chǎn)物的序列是互補(bǔ)關(guān)系，則第二次PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物即為目的產(chǎn)物。多重巢式PCR技術(shù)是結(jié)合了高靈敏度的巢式PCR技術(shù)與高特異性的多重PCR技術(shù)的新技術(shù)。該技術(shù)能夠高通量檢測(cè)多條基因片段。

傳統(tǒng)巢式PCR技術(shù)只能進(jìn)行單一基因檢測(cè)（應(yīng)用巢式PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因小麥的SSP1-TiERFl基因[35]）。近年開發(fā)的多重巢式PCR技術(shù)利用植物源性轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)常用的內(nèi)源基因（通用內(nèi)標(biāo)RBCL基因[33-34]、大豆凝集素基因[36-38]），品系特異性基因（EPSPS基因[36-38]、BAR基因[37-38]、PAT基因[37-38]、Cry1A（b）基因[37-38]、Cry2A（b）基因[39]），報(bào)告基因（CaMV35SCTP結(jié)合區(qū)域基因[36]、EPSPS-NOS結(jié)合區(qū)域基因[36]、NPTII基因[39]）與篩選基因（如P-35S啟動(dòng)子[39]、NOS終止子[39]），設(shè)計(jì)多條特異性引物，通過兩輪擴(kuò)增，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)高特異性的檢出深加工食品中的轉(zhuǎn)基因成分，靈敏度高達(dá)0.005%。篩選得到的植物源性轉(zhuǎn)基因食品共有內(nèi)標(biāo)RBCL基因能夠應(yīng)用于混合食品體系的高通量檢測(cè)[33-34]。由于不同品種與不同品系中相同外源基因序列不完全相同，因此，利用轉(zhuǎn)基因食品共有外源基因上的保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物[36-39]。

多重巢式PCR技術(shù)能夠有效減少假陽性結(jié)果，靈敏度高。利用共有內(nèi)標(biāo)RBCL基因，能夠大幅減少假陰性結(jié)果，提高檢測(cè)效率。多重巢式PCR技術(shù)還具有特異性強(qiáng)、高通量等特點(diǎn)。目前，該技術(shù)應(yīng)用涉及植物源性轉(zhuǎn)基因食品包括小麥[35]、大豆[36-38]、水稻[37-38]、玉米[37-39]等。

5 多重PCR-DHPLC技術(shù)

DHPLC技術(shù)即變性高效液相色譜技術(shù)。多重PCR-DHPLC技術(shù)是利用HPLC技術(shù)原理，在非變性溫度條件下，以多重PCR技術(shù)擴(kuò)增出的不同分子量基因片段與緩沖液作為流動(dòng)相，通過DNA分離柱、檢測(cè)器，進(jìn)而利用轉(zhuǎn)換的數(shù)字信號(hào)實(shí)現(xiàn)定量分析的聯(lián)用技術(shù)。

DHPLC技術(shù)是能夠同時(shí)檢測(cè)不同長度引物的擴(kuò)增產(chǎn)物的新型基因分析技術(shù)?；谶@一特點(diǎn)，該技術(shù)與能夠在同管中擴(kuò)增多個(gè)引物序列的多重PCR技術(shù)聯(lián)用，能夠達(dá)到高靈敏度、高特異性、高通量、快速、準(zhǔn)確檢測(cè)目的。應(yīng)用于植物源性轉(zhuǎn)基因食品的多重PCR-DHPLC技術(shù)，是針對(duì)內(nèi)源基因和特異性外源基因進(jìn)行克隆，利用構(gòu)建成為的重組質(zhì)粒提高檢測(cè)的靈敏度與特異性[40-41]。將重組質(zhì)粒按照相同含量比例配對(duì)混合成質(zhì)粒模板作為陽性質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品，能夠解決由于基因出現(xiàn)頻次不同導(dǎo)致的多重PCR擴(kuò)增困難的問題[40]。PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物不需純化、不需電泳、不需使用有毒試劑溴化乙錠[40-44]。經(jīng)DHPLC技術(shù)分離得到的基因片段通過紫外檢測(cè)或熒光檢測(cè)進(jìn)行定量分析[40-41，44]。多重PCR-DHPLC技術(shù)能夠同時(shí)檢測(cè)數(shù)百個(gè)不同品種與不同品系的食品樣本以及多組分的食品體系的轉(zhuǎn)基因成分[40-44]。

與傳統(tǒng)凝膠電泳相比，DHPLC技術(shù)分離鑒定時(shí)間僅10～15 min，分辨率達(dá)1%。多重PCR-DHPLC技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、自動(dòng)化、快速、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)。目前，該技術(shù)檢測(cè)應(yīng)用涉及植物源性轉(zhuǎn)基因食品包括玉米[40]、大豆[41]、番茄[42]、小麥[43]、馬鈴薯[44]等。

6 PCR-ELISA技術(shù)

PCR-ELISA技術(shù)是將PCR技術(shù)與ELISA相結(jié)合的聯(lián)用技術(shù)。它的原理是以特異性探針誘捕PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，并在微孔板上運(yùn)用ELISA原理，借助酶標(biāo)抗體進(jìn)行固相或液相雜交完成對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的定性與定量檢測(cè)。

植物源性轉(zhuǎn)基因食品的PCR-ELISA檢測(cè)技術(shù)包括傳統(tǒng)技術(shù)與改進(jìn)技術(shù)。傳統(tǒng)PCR-ELISA技術(shù)，是根據(jù)目的基因設(shè)計(jì)引物，利用PCR擴(kuò)增獲得的產(chǎn)物，進(jìn)行電泳檢測(cè)，再將產(chǎn)物連接入載體，轉(zhuǎn)化為感受態(tài)細(xì)胞，進(jìn)而通過兩種方法定性檢測(cè)（利用序列鑒定檢測(cè)陽性產(chǎn)物[45-47]，或者利用從感受態(tài)細(xì)胞獲得的重組蛋白酶切、電泳、PCR反應(yīng)[48-49]），最后將定性產(chǎn)物利用ELISA進(jìn)行定量檢測(cè)[45-51]。改進(jìn)的PCR-ELISA技術(shù)是針對(duì)待測(cè)特異性基因蛋白進(jìn)行ELISA檢測(cè)，將陽性樣品的DNA提取、鑒定后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，最后進(jìn)行鑒定[52-53]。兩種PCR-ELISA技術(shù)都是利用前一種技術(shù)獲得的陽性初篩產(chǎn)物，應(yīng)用后一種技術(shù)進(jìn)一步鑒定[45-53]。PCR-ELISA檢測(cè)技術(shù)中的PCR技術(shù)可進(jìn)行如下改進(jìn)，如利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)[46，51，54]提高特異性，利用重組聚合酶擴(kuò)增（RPA）[46]提高精確度、實(shí)現(xiàn)快速溫度循環(huán)，利用PCR技術(shù)與GUS活性檢測(cè)的結(jié)合提高靈敏度[47]。PCR-ELISA技術(shù)中的ELISA技術(shù)可進(jìn)行如下改進(jìn)，如利用比色免疫法[46]、間接ELISA[48]、商品化免疫檢測(cè)試紙條[49]、DAS-ELISA[53]進(jìn)行精確定量。

PCR-ELISA技術(shù)適用于定性與定量檢測(cè)。該技術(shù)具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性好、高通量、快速的特點(diǎn)[54]。目前，該技術(shù)應(yīng)用涉及植物源性轉(zhuǎn)基因食品包括玉米[45-46，49，52-53]、大豆[45-46，48]、油菜[45，47]、花生[46]、番茄[46]、土豆[50]、木瓜[51]、水稻[51]等。

7 多重PCR-毛細(xì)管電泳技術(shù)

毛細(xì)管電泳技術(shù)是以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，利用傳統(tǒng)電泳的基本原理，結(jié)合氣相色譜中毛細(xì)管柱的高分離度與高效液相色譜操作的自動(dòng)化，以毛細(xì)管為分離通道，依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配系數(shù)的不同進(jìn)行高效、快速分離的液相分離技術(shù)。

多重PCR-毛細(xì)管電泳技術(shù)是結(jié)合高通量的多重PCR技術(shù)與高分離度的毛細(xì)管電泳技術(shù)的聯(lián)用技術(shù)，適用于同時(shí)檢測(cè)含有多種類、微量轉(zhuǎn)基因成分的復(fù)雜食品體系[55-58]。利用多重PCR-毛細(xì)管電泳技術(shù)與紫外可見光譜技術(shù)聯(lián)用或?qū)Χ嘀豍CR體系進(jìn)行熒光修飾，使檢測(cè)結(jié)果可視化，大大縮短檢測(cè)時(shí)間[55-56]。改進(jìn)的多重?zé)晒釶CR技術(shù)中，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物無需純化，使用等量樣品可得到比傳統(tǒng)多重PCR-瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)更加清晰的電泳圖譜，靈敏度高[55]。基于激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器具有較好的聚焦性能與單色性的特點(diǎn)，利用該檢測(cè)器作為毛細(xì)管電泳技術(shù)的檢測(cè)器，與多重PCR-毛細(xì)管電泳技術(shù)聯(lián)用，能夠顯著提高靈敏度，一次反應(yīng)即可達(dá)到篩選、鑒定的目的[57-58]。

與傳統(tǒng)多重PCR-瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)相比，多重PCR-毛細(xì)管電泳技術(shù)應(yīng)用于植物源性轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)，具有高特異性、高靈敏度、高通量、可視化、快速、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)。該技術(shù)應(yīng)用涉及植物源性轉(zhuǎn)基因食品包括玉米[56-57]、大豆[55，58]等。

8 數(shù)字PCR技術(shù)

數(shù)字PCR技術(shù)是利用PCR技術(shù)結(jié)合微流控或微滴化方法進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸絕對(duì)定量技術(shù)。它的原理是將稀釋后的核酸溶液分散至微反應(yīng)器或微滴中，經(jīng)PCR擴(kuò)增后，含有目標(biāo)DNA模板的反應(yīng)器能夠發(fā)出熒光信號(hào)，根據(jù)計(jì)算熒光反應(yīng)的微反應(yīng)器或微滴的數(shù)目進(jìn)行定量檢測(cè)。

應(yīng)用于植物源性轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)的數(shù)字PCR技術(shù)，包括微滴數(shù)字PCR技術(shù)和微流控芯片數(shù)字PCR技術(shù)。微滴數(shù)字PCR技術(shù)是將預(yù)混合的PCR反應(yīng)體系隨機(jī)分散到數(shù)萬至數(shù)十萬個(gè)微滴中形成油包水的結(jié)構(gòu)，擴(kuò)增產(chǎn)物發(fā)出的熒光信號(hào)根據(jù)泊松分布公式進(jìn)行計(jì)算，進(jìn)而進(jìn)行定量檢測(cè)[59-60]。微滴反應(yīng)能夠大幅度分散反應(yīng)體系，有效降低抑制因子的作用，保證檢測(cè)過程中的擴(kuò)增效率，對(duì)于含有微量目標(biāo)DNA的樣品具有良好檢測(cè)效果，適用于復(fù)雜食品體系與深加工食品中轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)[59-60]。微流控芯片技術(shù)是把各基本操作步驟集成到一塊幾平方厘米的芯片上進(jìn)行精確定量檢測(cè)[61-62]。相對(duì)于傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)，微流控芯片技術(shù)能夠檢出實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)無法檢出的樣品，靈敏度很高[62]。

數(shù)字PCR技術(shù)能夠精確定量，適用于復(fù)雜食品體系中低含量轉(zhuǎn)基因目標(biāo)序列成分的檢測(cè)。該技術(shù)還具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、微型化、自動(dòng)化、快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)。目前，該技術(shù)應(yīng)用涉及植物源性轉(zhuǎn)基因食品包括玉米[59-62]、大豆[59-62]、水稻[59-62]等。

9 結(jié)論

國內(nèi)外食品安全形勢(shì)嚴(yán)峻，食品安全事件頻發(fā)，嚴(yán)重影響人民的身心健康與安全，植物源性轉(zhuǎn)基因食品已對(duì)食品安全構(gòu)成了潛在危脅。因此，建立精確實(shí)用、方便快捷的檢測(cè)技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)植物源性轉(zhuǎn)基因食品的安全監(jiān)測(cè)、甄別與風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)估，成為國內(nèi)外植物源性食品安全研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)與難題。PCR衍生技術(shù)由于具有特異、靈敏、可重復(fù)性等優(yōu)勢(shì)，已廣泛應(yīng)用于植物源性轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)，對(duì)保障植物源性轉(zhuǎn)基因食品安全起著至關(guān)重要的作用。然而，PCR衍生技術(shù)受到自動(dòng)化、簡便快捷、高通量等方面的局限性，在一定程度上限制了在植物源性轉(zhuǎn)基因食品安全中的推廣與應(yīng)用。近年來，電化學(xué)納米生物傳感器、納米金光學(xué)分子探針等技術(shù)在植物源性轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)中的應(yīng)用，加速了植物源性轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)技術(shù)升級(jí)，對(duì)我國食品安全監(jiān)管體系的建立以及植物源性轉(zhuǎn)基因食品安全性的提升起到重大的推動(dòng)與保障作用?？傊?，開發(fā)集高靈敏度、高特異性、高自動(dòng)化、高通量、簡便快捷、低成本為一體的定量檢測(cè)手段將是今后植物源性轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)。

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Advance in PCR-derived technologies for plant-derived genetically modified food

HU Jin-qiang1，2，3，*，LEI Jun-ting1，SUN Xin-cheng1，JING Jian-zhou1，ZHANG Yin-liang1，DONG Cai-wen1，GAO Hui1，GENG Yao1，JIANG Chun-peng1
（1.School of Food and Bioengineering，Zhengzhou University of Light Industry，Zhengzhou 450002，China；2.Henan Collaborative Innovation Center for Food Production and Safety，Zhengzhou 450002，China；3.Henan International Joint Laboratory for Food Safety，Zhengzhou 450002，China）

Safety of genetically modified food especially plant-derived genetically modified food are increasingly becoming attentive focus of the public.Many detection methods have been developed for the detection of discrimination and safe evaluation of plant-derived genetically modified food.PCR-derived technologies are sensitive and specific and so have provided rapid，accurate detection methods for plant-derived genetically modified food.PCR-derived technologies include multiplex PCR，real-time PCR，multiplex real-time PCR，multiplex nested PCR，multiple PCR-DHPLC.In this review，these PCR-derived methods should be summarized in brief.

plant-derived；genetically modified food；PCR

TS207.3

A

1002-0306（2015）22-0379-06

10.13386/j.issn1002-0306.2015.22.070

2015－03－20

胡金強(qiáng)（1979-），男，博士，副教授，研究方向：病原生物學(xué)、免疫學(xué)與食品安全，E-mail：jqhu@hotmail.com。

國家自然科學(xué)基金（31201901）；教育部留學(xué)回國人員科研啟動(dòng)基金（第46批，教外司留[2013]693號(hào)）；河南省教育廳科學(xué)技術(shù)重點(diǎn)研究項(xiàng)目（14A180025）；鄭州市科技攻關(guān)項(xiàng)目（20130857）；鄭州輕工業(yè)學(xué)院博士基金項(xiàng)目（2011BSJJ033）；鄭州輕工業(yè)學(xué)院青年骨干教師資助計(jì)劃項(xiàng)目（2013QNGG02）；鄭州輕工業(yè)學(xué)院研究生創(chuàng)新基金（2014031）。