腫痛安膠囊水提物對金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的體外抗菌活性

劉繼鋒 尹健康 王會肖 于佩華 周桂榮 白玉

腫痛安是華佗始創(chuàng)明方玉真散，現(xiàn)有的膠囊劑是在原方的基礎上通過重新組方而成，其中的主要成分有三七、天麻、僵蠶、白附子(制)、防風、羌活、天南星(制)、白芷。腫痛安膠囊口服后具有祛風化痰、行瘀散結和消腫定痛的作用，臨床主要用于風痰瘀阻引起的牙痛、咽喉腫痛、口腔潰瘍，及風痰瘀血阻絡引起的痹病，癥見關節(jié)腫脹疼痛、筋脈拘攣、屈伸不利，另外，在口腔及耳鼻喉疾病和破傷風的輔助治療等疾病的治療上，腫痛安膠囊也取得了顯著的較好的療效。有研究表明，腫痛安組方中僵蠶、羌活對金葡菌、大腸桿菌、綠膿桿菌均有抑制作用［1，2］;白附子、防風對葡萄球菌和鏈球菌也表現(xiàn)出抗菌活性［3，4］。為考察腫痛安的體外抗菌作用，本文就腫痛安提取物對金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的體外抗菌活性進行了研究，以期為臨床應用提供參考和依據(jù)。目前腫痛安膠囊以藥材全粉入藥，因此，考察腫痛安膠囊中各藥材的提取物的體外抗菌活性，對揭示該產(chǎn)品的作用機理以及新劑型開發(fā)具有一定意義。

1 儀器與材料

1.1 儀器與設備 多點接種儀:A400，英國蘇賽克斯。生物安全柜:HFsafe-1500，力康發(fā)展有限公司。生化培養(yǎng)箱:LRH-250A-Ⅱ，韶關市泰宏醫(yī)療器械有限公司。立式滅菌器:LMQ.J，山東新華醫(yī)療器械股份有限公司。

1.2 材料

1.2.1 腫痛安膠囊提取物:河北奧星集團藥業(yè)有限公司提供，每毫升含生藥1 g，批號:20130501、20130502。

1.2.2 陽性對照藥:萬古霉素，批號為037K0686，Sigma公司。

1.2.3 培養(yǎng)基:M-H肉湯，批號:20110725;M-H瓊脂，批號:20110301，北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠。

1.2.4 受試菌:臨床分離致病菌，共計165株，分別為MSSA51株、MRSA50株、MSSE33株、MRSE31株，河北省某三甲醫(yī)院提供。

1.2.5 質(zhì)控菌:金黃色葡萄球菌 ATCC29213，中國食品藥品檢定研究院。

1.3 方法

1.3.1 腫痛安膠囊水提物的制備:取三七、天麻、僵蠶、白附子(制)、防風、羌活、天南星(制)、白芷八味藥材凈選后粉碎，過60目篩。取上述藥粉100 g，用15倍量的水超聲1 h后浸泡12 h，過濾，上清液于50℃減壓濃縮至每毫升相當于1 g藥材，將棕黑色濃縮液灌裝于10 ml安瓿瓶中并于121℃ 30 min滅菌。

1.3.2 腫痛安提取物的最低抑菌濃度確定:采用瓊脂二倍稀釋法測定腫痛安提取物對受試菌的最低抑菌濃度(MIC)。①將培養(yǎng)16～18 h的受試菌和質(zhì)控菌調(diào)整至0.5麥氏單位濁度后再做10倍稀釋。②轉接至接種盤內(nèi)，用多點接種儀將菌液接種到含腫痛安提取物分別為 50、25、12.5、6.25、3.12、1.56 mg/ml的 M-H培養(yǎng)基上，同時將菌液接種到含有萬古霉素為4、2、1、0.5、0.25 μg/ml的 M-H 培養(yǎng)基上，接菌量約為 104 CFU/點。在33～35℃條件下培養(yǎng)16～18 h，以能夠完全抑制細菌生長的腫痛安提取物的最低濃度為最低抑菌濃度(MIC)。

2 結果

萬古霉素對質(zhì)控菌ATCC29213的MIC為1～2 μg/ml，均在 CISL 規(guī)定的質(zhì)控范圍［5］內(nèi)，實驗系統(tǒng)成立。批號為20130501、20130502的腫痛安提取物對質(zhì)控菌和123株臨床分離菌的MIC測定結果。見表1。

表1 腫痛安提取物對受試菌的MIC mg/ml

3 討論

中草藥在體外對多種病原微生物具有抑制或殺滅作用［6］，早在20世紀30至40年代，我國就開始進行中藥體外抗菌作用的研究，并證明了一大批中藥對各種細菌有抗菌作用［7］。羌活水煎劑對金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌有抑制作用［8］，羌活油對金黃色葡萄球菌、痢疾、大腸、綠膿桿菌有明顯抑制作用［2］，羌活中的發(fā)卡二醇，具有顯著的抗金葡菌的活性［9］。白芷與當歸水煎提取物，對金葡菌和大腸桿菌具有殺菌作用［10］。防風水煎劑對金葡菌、乙型溶血性鏈球菌、肺炎雙球菌及產(chǎn)黃青霉菌、雜色曲菌均有抑制作用［4］。白附子對表皮葡萄球菌、克雷伯氏菌、化膿鏈球菌、停乳鏈球菌、化膿棒狀桿菌、無乳鏈球菌等敏感［3］。僵蠶對金葡菌、大腸桿菌、綠膿桿菌有輕度抑制作用［1］。腫痛安配方中含有上述中藥，腫痛安提取物表現(xiàn)出的抗菌活性，與這些組份具有的抗菌作用不無關系。金葡菌和表葡菌均是醫(yī)院感染中最常見的致病菌，研究發(fā)現(xiàn)，MRSA、MRSE對很多抗生素耐藥［11，12］，這給臨床治療帶來很大困難。從實驗結果看，腫痛安提取物對MRSA、MRSE具有很好的抗菌作用，其作用機制有待進一步的探討。

在臨床上，腫痛安對口腔潰瘍、牙周炎、急、慢性咽炎、痰血瘀滯型膝骨關節(jié)炎等具有很好的療效［13－16］，總有效率都在89%以上，在治療急慢性咽炎上，總有效率高于阿莫西林［15］。腫痛安膠囊是純中藥制劑，方中制白附子、天南星為君藥，天麻、僵蠶為臣藥，防風、羌活、白芷為佐藥，三七為使藥。白附子能解毒、散結、消腫止痛;天麻能祛風濕、止痹痛;天南星能燥濕化痰、祛風止痙、散結止痛;僵蠶能散風清熱、瀉火燥濕;防風、羌活、白芷能清熱散風、導邪外出;三七有通絡消腫、止痛的功效。腫痛安臨床上不俗的表現(xiàn)，除了其具有的抗菌活性外，可能還因其調(diào)動了機體的免疫防御功能而發(fā)揮扶正祛邪的作用。

本試驗研究結果表明，兩個批次的腫痛安提取物，對受試菌的臨床分離菌的MICrange為12.5 mg/ml～＞50 mg/ml，多數(shù)菌株的 MIC 在 12.5 mg/ml～25 mg/ml范圍內(nèi)，MIC50 均在 12.5 ～25 mg/ml，MIC90多在25～50 mg/ml，顯示兩個批次的腫痛安提取物對金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均有較好的體外抗菌活性。

綜上所述，腫痛安膠囊水提物對金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均有較好的體外抗菌作用，這為進一步研究和優(yōu)化提取工藝、開發(fā)新劑型、擴大臨床應用范圍提供了參考。

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