百草枯液相色譜分析方法的探討

劉育清 顧 輝 方國斌 周 揚(yáng) 劉全科

（湖北省農(nóng)藥檢定管理所 武漢 430070）

1 前言

百草枯（英文名paraquat）屬滅生性除草劑,我省沙隆達(dá)股份有限公司和仙隆化工股份有限公司是該產(chǎn)品母藥和水劑出口的定點(diǎn)生產(chǎn)企業(yè)。該產(chǎn)品極性較強(qiáng),極易溶于水,幾乎不溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑，在中性和酸性介質(zhì)中穩(wěn)定，在堿性介質(zhì)中迅速水解，其水溶液在紫外光照射下發(fā)生光分解。雖然現(xiàn)有國標(biāo)中已有百草枯的高效液相色譜(HPLC)的定性定量分析方法，但在實(shí)際操作中存在使用試劑昂貴、不易購買且色譜峰存在拖尾現(xiàn)象等問題，我們通過多次試驗(yàn)用KH2PO4緩沖溶液（pH=1.9）作為流動相，采用耐水性強(qiáng)的C18反相柱，在保留值的重現(xiàn)、柱效和色譜峰的對稱性各方面都得到較好的效果。該方法線性關(guān)系好，準(zhǔn)確度高，結(jié)果精密度好，操作簡便易行，節(jié)約分析成本，適于企業(yè)的生產(chǎn)質(zhì)量控制。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

Waters515/996PDA高效液相色譜儀，帶化學(xué)工作站；

百草枯標(biāo)樣：已知百草枯二氯鹽的質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.2%。使用前于 105℃烘 2h。（農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所提供）；

甲醇：色譜純；

磷酸二氫鉀：分析純。

2.2 色譜操作條件

色譜柱：AQ C18，粒徑5 m，250mm×4.6mm（id）；

流動相：0.74g磷酸二氫鉀用840mL水溶解，再加160mL甲醇，混勻，用磷酸調(diào)至pH1.9，并經(jīng)0.45 m的濾膜過濾；

流速：1.0mL/min；

檢測波長290nm；

進(jìn)樣量：10uL；

保留時(shí)間：百草枯約2.6min。

2.3 測定步操

標(biāo)樣溶液的配制：稱取百草枯二氯鹽標(biāo)樣0.06g（精確至0.0002g）于50mL容量瓶中，用流動相溶解稀釋至刻度，搖勻備用。

試樣溶液的配制：稱取約含百草枯陽離子0.04g的試樣（精確至0.0002g）于50mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。用孔徑0.45 m的有機(jī)相針式濾器過濾備用。

測定：在上述色譜條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，待相鄰兩針百草枯陽離子的峰面積響應(yīng)值變化<1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣測定。典型液相色譜圖如下：

2.4 計(jì)算

將測得的兩針試樣溶液與試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中百草枯陽離子的峰面積分別進(jìn)行平均，試樣中，有效成分百草枯陽離子的質(zhì)量分?jǐn)?shù)x（%）按下式計(jì)算：

3 結(jié)果與討論

3.1 流動相的選擇

采用國標(biāo)的分析方法，調(diào)整流動相中庚磺酸鈉的用量，色譜峰拖尾現(xiàn)象有一定的改善。但為了更好的優(yōu)化色譜峰，結(jié)合我們工作實(shí)際，我們嘗試用磷酸二氫鉀緩沖溶液做流動相進(jìn)行測定，使用不同用量的磷酸二氫鉀與調(diào)整不同的pH的流動相進(jìn)樣試驗(yàn)后，通過峰型比較，發(fā)現(xiàn)用0.74g磷酸二氫鉀加840ml水溶解，再加160ml甲醇，用磷酸調(diào)pH=1.9的緩沖溶液做流動相，效果最好。

3.2 分析方法的線性相關(guān)性測定（表1）

表1 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn)數(shù)據(jù)

稱取百草枯二氯鹽標(biāo)樣0.2g（精確至0.0002g）于100ml容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。用移液管分別移取標(biāo)準(zhǔn)溶液5.00ml、10.00ml、15.00ml、20.00ml、25.00ml于 5 個(gè) 25ml容量瓶中，分別用流動相稀釋至刻度，配成5種不同濃度的溶液。按前述規(guī)定的色譜條件測定，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以其峰面積為縱坐標(biāo)作圖。其線性方程為：Y=1290.9X+7491.9，r=0.9998。

3.3 分析方法精密度的測定（表2）

表2 分析方法的精密度試驗(yàn)數(shù)據(jù)

在上述色譜條件下，對同一試樣進(jìn)行5次平行測定。檢測結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)，該方法的標(biāo)準(zhǔn)偏差、變異系數(shù)分別為0.069和0.23%。

3.4 分析方法準(zhǔn)確度的測定（表3）

表3 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)數(shù)據(jù)

稱取已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的試樣5份，加入一定量的標(biāo)樣，測定其回收率，本方法測定百草枯的回收率為98.91%～100.87%。

3.5 采用國標(biāo)分析測定與本方法測定結(jié)果的比較（表 4）

表4 分析方法的測定結(jié)果比較

對同一百草枯母液試樣，分別采用國標(biāo)方法和本方法進(jìn)行分析測定，測定結(jié)果表明，本方法的測定結(jié)果與采用國標(biāo)測定的結(jié)果一致。

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法具有分離效果好，準(zhǔn)確度與精密度高，線性范圍較寬，操作簡便、分析成本低等特點(diǎn)，符合定量要求，適于企業(yè)的生產(chǎn)質(zhì)量控制。