人乳頭瘤病毒基因型與宮頸病變的相關(guān)性分析

黃秀珍，姚心韻，陳文學(xué)，呂賽平

(1、江西省腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 南昌330029；2、四川大學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院2010級(jí)，四川 成都610041)

宮頸癌是嚴(yán)重威脅女性生命健康的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于乳腺癌，在全球婦女癌癥死亡率中居第二位，在一些發(fā)展中國(guó)家甚至居首位。CIN是一組與浸潤(rùn)性宮頸癌密切相關(guān)的癌前病變，在其發(fā)病5年內(nèi)，約40%逆轉(zhuǎn)為正常，10%發(fā)展為原位癌，通常從發(fā)現(xiàn)高度病變到發(fā)展成浸潤(rùn)癌大約需要10年的時(shí)間[1]。近年來(lái)，宮頸癌及癌前病變發(fā)生率在全球范圍內(nèi)呈逐年上升且年輕化的趨勢(shì)[2]，流行病學(xué)研究已證實(shí)HPV感染是CIN和宮頸癌的主要病因[3-5]，因此HPV檢測(cè)已成為宮頸癌篩查中必不可少的內(nèi)容。本研究即通過(guò)回顧分析我院收治的924例婦女的HPV檢查結(jié)果及其宮頸活檢病理檢查結(jié)果，旨在探討不同基因型HPV感染與宮頸病變的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2010年1月-2014年7月期間在我院婦瘤科就診的924例婦女作為研究對(duì)象，所有患者均接受HPV-DNA分型以及宮頸病理切片檢查。根據(jù)組織病理學(xué)診斷，按病變程度分為6組：宮頸鱗癌組287例；CINⅢ組78例；CINⅡ組61例；CINⅠ組153例；宮頸濕疣組40例；正常或炎癥組305例。

1.2 儀器與試劑 HPV-DNA提取試劑盒，DA7600 PCR擴(kuò)增儀，Hybrimax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀，人乳頭狀瘤病毒基因分型檢測(cè)試劑盒(由潮州凱普生物化學(xué)有限公司提供)。

1.3 標(biāo)本采集和處理 采集生殖道拭子標(biāo)本 由醫(yī)生以窺陰器或陰道張開(kāi)器暴露宮頸，將宮頸刷子置于宮頸口，輕輕搓動(dòng)宮頸刷使其順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5圈，取出宮頸刷，沿刷柄折痕處將宮頸刷柄折斷，將其放入標(biāo)有病人編號(hào)的取樣管中，取樣管內(nèi)已加有3m l專用細(xì)胞保存液，擰緊瓶蓋。樣本采集后立即送檢。4℃保存不超過(guò)24h，-200C保存不超過(guò)3個(gè)月之內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本運(yùn)送時(shí)建議采用低溫保存運(yùn)送。

1.4 檢測(cè)方法 采用凱普Hybrimax公司提供的人乳頭狀瘤病毒(HPV)分型檢測(cè)試劑盒(PCR+膜雜交法)，可同時(shí)對(duì)21種HPV基因型進(jìn)行病毒分型檢測(cè)。 其中 15 種高?；蛐蜑?HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68，6 種低?；蛐蜑?HPV6、11、42、43、44、CP8304。實(shí)驗(yàn)步驟：(1)分泌物中細(xì)胞DNA分離提??；(2)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增；(3)核酸分子快速導(dǎo)流雜交；(4)判斷結(jié)果:肉眼觀察檢測(cè)結(jié)果，陽(yáng)性點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)紫色圓點(diǎn)，根據(jù)芯片上HPV分型分布相應(yīng)的點(diǎn)判斷HPV亞型，多點(diǎn)陽(yáng)性即為多重感染。每一張芯片有PCR反應(yīng)質(zhì)控點(diǎn)和雜交顯色質(zhì)控點(diǎn)各一個(gè)。本檢測(cè)對(duì)兩型或兩型以上者多重感染型別的陽(yáng)性率重復(fù)計(jì)算。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)學(xué)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同病變患者HPV陽(yáng)性率及感染基因型分布924例患者中有503例感染HPV病毒，陽(yáng)性率54.4%。所有標(biāo)本共檢測(cè)到19種HPV基因型，未檢測(cè)到HPV43、44型。不同病變組HPV陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，宮頸鱗癌組與宮頸濕疣組HPV陽(yáng)性率顯著高于CINⅢ組 (P＜0.05)，CINⅢ組HPV陽(yáng)性率顯著高于CINⅡ組與CINⅠ組 (P＜0.05)，CINⅡ組與CINⅠ組HPV陽(yáng)性率顯著高于正常或炎癥組 (P＜0.05)，宮頸鱗癌組與宮頸濕疣組HPV陽(yáng)性率無(wú)顯著性差異 (P＞0.05)，CINⅡ組與CINⅠ組HPV陽(yáng)性率無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，見(jiàn)表1。由表1可知，宮頸鱗癌組較常見(jiàn)型別為HPV16、58、52、18，CINⅢ組較常見(jiàn)型別為 HP16、33、18，CINⅡ組與CINⅠ組的較常見(jiàn)型別均為HPV16、58、52，濕疣組較常見(jiàn)型別為 HPV6、11、16。

2.2 不同宮頸病變與HPV多重感染的關(guān)系 HPV陽(yáng)性患者共503例，多重感染102例，多重感染率為20.3%，其中二重感染89例，三重感染12例，四重感染1例，見(jiàn)表2。不同病變組HPV多重感染率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05)，宮頸鱗癌組、CINⅢ組、CINⅡ組、CINⅠ組HPV多重感染率顯著高于濕疣組與正?；蜓装Y組(P＜0.05)，宮頸鱗癌組、CINⅢ組、CINⅡ組、CINⅠ組HPV多重感染率無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，濕疣組與正?；蜓装Y組HPV多重感染率無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

3 討論

大量流行病學(xué)和分子生物學(xué)研究資料表明，HPV低危型感染與宮頸濕疣密切相關(guān)，而長(zhǎng)期持續(xù)HPV高危型感染與子宮頸癌及癌前病變密切相關(guān)，高危型HPV感染是宮頸癌發(fā)生的首要因素且為始動(dòng)因素[6]。在本研究中，宮頸鱗癌組、宮頸濕疣組HPV陽(yáng)性率最高，CINⅢ組次之，CINⅡ組與CINⅠ組再次之，正常或炎癥組最低，這說(shuō)明隨著宮頸病變的加重，HPV陽(yáng)性率呈明顯遞增的趨勢(shì)，HPV感染與宮頸良性或惡性病變均有著十分密切的關(guān)系。通過(guò)對(duì)6組患者基因型別的進(jìn)一步分析，我們發(fā)現(xiàn)宮頸鱗癌組較常見(jiàn)型別為HPV16、58、52、18，CINⅢ組較常見(jiàn)型別為 HP16、33、18，CINⅡ組與CINⅠ組的較常見(jiàn)型別均為HPV16、58、52，濕疣組較常見(jiàn)型別為HPV6、11、16，這與文獻(xiàn)報(bào)道大致相近[5，7]。眾所周知，低危型HPV包括HPV6、11、42、43、44、CP8304 等 ， 高 危 基 因 型 包 括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68等。由本研究結(jié)果可知，宮頸鱗癌組患者均未檢測(cè)到上述6種低危型HPV，這充分證實(shí)了高危型HPV感染是宮頸癌發(fā)生重要危險(xiǎn)因素的觀點(diǎn)。由此可見(jiàn)，我們?cè)谂R床工作中應(yīng)加強(qiáng)對(duì)細(xì)胞學(xué)檢查正常及不典型增生人群的HPV的篩查與基因分型研究，尤其對(duì)持續(xù)高危型HPV感染者進(jìn)行嚴(yán)密隨防和監(jiān)控，警惕宮頸細(xì)胞癌變傾向，對(duì)宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療具有重要的價(jià)值。

表1 不同病變患者HPV感染率及感染基因型分布

表2 不同宮頸病變與HPV多重感染的關(guān)系

目前研究有關(guān)HPV多重感染是否會(huì)促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生有著不同的觀點(diǎn)，有學(xué)者認(rèn)為多重感染并不增加宮頸癌的發(fā)生率，但也有學(xué)者認(rèn)為HPV多重感染對(duì)宮頸病變及宮頸癌的發(fā)生發(fā)展起促進(jìn)作用[8-12]。本研究統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，宮頸鱗癌組、CINⅢ組、CINⅡ組、CINⅠ組HPV多重感染率分別為17.1%、19.2%、18.0%、14.4%，濕疣組、正常或炎癥組的HPV多重感染率分別為2.5%、1.3%，宮頸鱗癌組多重感染率雖然低于CINⅢ組和CINⅡ組，但宮頸鱗癌組、CINⅢ組、CINⅡ組、CINⅠ組多重感染率顯著高于濕疣組與正?；蜓装Y組(P＜0.05)，差異有顯著。這在一定程度上說(shuō)明HPV多重感染可能與宮頸癌及癌前病變有著更為密切的聯(lián)系，可能是由于HPV感染型別越多，宮頸局部的炎癥反應(yīng)更為嚴(yán)重所致。HPV多重感染對(duì)宮頸病變及宮頸癌的發(fā)生發(fā)展起促進(jìn)作用，結(jié)果與Fife等[13]的研究結(jié)果一致。持續(xù)高危型HPV感染是CIN進(jìn)一步進(jìn)展為宮頸癌的必經(jīng)過(guò)程，從感染高危HPV開(kāi)始至發(fā)展為宮頸癌的時(shí)間間隔約為15年，故宮頸癌是可預(yù)防的特殊癌癥，HPV感染是可能的患病信號(hào)[14]。Ho等[15]學(xué)者認(rèn)為，HPV多重感染者出現(xiàn)持續(xù)感染的危險(xiǎn)性更大，而HPV的持續(xù)感染是宮頸病變發(fā)生的原因，多重感染易導(dǎo)致宮頸病變。

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