低壓電刺激對不同部位宰后牦牛肉肌原纖維蛋白水解的影響

賈 青,余群力,*,田 園,孫志昶,李洪波

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅蘭州 730070;2.甘肅隴原中天生物工程股份有限公司,甘肅隴西 748100)

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低壓電刺激對不同部位宰后牦牛肉肌原纖維蛋白水解的影響

賈 青1,余群力1,*,田 園1,孫志昶1,李洪波2

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅蘭州 730070;2.甘肅隴原中天生物工程股份有限公司,甘肅隴西 748100)

研究電刺激對不同部位牦牛肉宰后成熟過程中微觀結(jié)構(gòu)及肌原纖維蛋白水解的影響。將牦牛宰后5min內(nèi)進行低壓電刺激(21V,50Hz,90s)并冷卻排酸,于宰后0、1、3、5d取前部肱三頭肌(TB)中部背最長肌(ML)和后部半膜肌(SM),分析其肌節(jié)長度、肌纖維直徑、MFI指數(shù)、肌原纖維超微結(jié)構(gòu)和全肌肉蛋白電泳圖譜。結(jié)果表明:電刺激使不同部位牦牛肉肌節(jié)長度顯著變化(p<0.05),肌纖維直徑平均縮小6%、5%和9%;TB、ML和SM宰后0～5d MFI值分別上升54%、55%和92%,SM嫩度顯著增大(p<0.01);不同部位牦牛肉肌原纖維超微結(jié)構(gòu)中攣縮帶占有率分別為23.9%、26.3%和31.2%,肌原纖維結(jié)構(gòu)形變?nèi)芙?SDS-PAGE電泳圖譜顯示,TB、ML和SM部肌原纖維蛋白均在48～75ku之間降解徹底。本研究證實了電刺激縮短牦牛肉宰后成熟時間,對不同部位牦牛肉嫩度改善,特別是對肉質(zhì)較差的SM效果顯著。

牦牛,電刺激,宰后成熟,肌原纖維蛋白

牦牛(yak)生長在我國冷季長、氧氣稀薄、工業(yè)污染少的草原環(huán)境中,其肉質(zhì)具有高蛋白、血紅蛋白含量高,抗病力強的特點。青海牦牛肉熱能值平均高達9612.45kJ/kg,比其他牛肉高2400～4000kJ[1],對增強人體抗病力、細胞活力和器官功能均有顯著作用,是具有市場潛力的優(yōu)質(zhì)天然綠色食品。但是牦牛肉嫩度較普通黃牛肉差[2],其肌纖維較粗,在冷藏過程中易發(fā)生收縮現(xiàn)象,極大影響肉質(zhì)嫩度和口感,制約其內(nèi)銷與出口。因此對牦牛肉嫩化是生產(chǎn)中的關(guān)鍵技術(shù)因素。

低壓電刺激能夠改變?nèi)赓|(zhì)微觀結(jié)構(gòu)[3],使肌節(jié)收縮、肌原纖維直徑變小、肌原纖維小片化程度增大,并且加快內(nèi)源酶對肌原纖維蛋白的水解[4],縮短宰后牦牛肉冷卻排酸時間,改善嫩度、肉色,提升品質(zhì),降低生產(chǎn)成本。

早在1960年,Locher發(fā)現(xiàn)肉牛屠宰后胴體快速冷卻導(dǎo)致肌肉過度收縮,肌節(jié)縮短、肌纖維直徑增加導(dǎo)致肉質(zhì)韌化[5],同時有研究發(fā)現(xiàn),肉的嫩化過程中常伴隨著少量蛋白質(zhì)的降解發(fā)生。我國學(xué)者張先峰[6]等在電刺激與延遲冷卻對牛肉肌原纖維超微結(jié)構(gòu)的影響中發(fā)現(xiàn),電刺激產(chǎn)生攣縮帶,使肌原纖維微觀結(jié)構(gòu)變化,進一步證實了肉在宰后成熟期間嫩度改善的原因;孫清亮[7]等在電刺激和延遲冷卻對宰后牛肉肌原纖維蛋白降解的影響中發(fā)現(xiàn),電刺激顯著加快肌鈣蛋白-T的降解,縮短宰后牛肉成熟時間。但是對于牦牛肉,不同部位肉電刺激后微觀結(jié)構(gòu)特征和全蛋白質(zhì)降解分析的報道較少。

基于此,本實驗研究低壓電刺激處理對不同部位牦牛肉的肌節(jié)長度、肌纖維直徑,MFI指數(shù)等微觀結(jié)構(gòu)特征的影響,并分析全蛋白質(zhì)電泳圖譜,探尋不同部位牦牛肉嫩化的內(nèi)在機制,以期為中國牦牛肉不同部位品質(zhì)改良、肉質(zhì)分級加工提供更多理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

實驗用牛 選自青海省海晏縣夏華清真肉食品有限公司,隨機選取9頭健康的2～4歲牦牛,體重(110±20)kg,宰前禁食禁水;丙烯酰胺(Acr)、SDS(十二烷基磺酸鈉)、Tris-HCl緩沖液,過硫酸銨、EMED(四甲基乙二胺)、甘油、溴酚藍、濃縮電極緩沖液、甘氨酸、考馬斯亮藍R250、乙醇、冰醋酸、脫色液 以上試劑均為分析純。

ES-4型電刺激儀 美國查韋斯機械制造有限公司;SCR20BC型高速冷凍離心機 日本日立公司;雙垂直CYCZ型電泳儀 北京市六一儀器廠;FA2004B型電子天平 上海佑科儀器廠;JSM561OLV型高分辨率掃描電鏡儀 日本艾克賽普電子公司。

1.2 實驗設(shè)計

隨機選取9頭自然放養(yǎng)青海牦牛,年齡2～4歲,活體重(110±20)kg,按照伊斯蘭方式屠宰,在刺殺放血后5min內(nèi)對牦牛胴體進行電刺激(電壓21V,頻率50Hz,時間90s),后置于0～4℃、風(fēng)速0.5m/s條件下成熟排酸。

在宰后成熟過程中第0、1、3、5d分別取牦牛前部驅(qū)肱三頭肌(TB)、中部背最長肌(ML)和后部驅(qū)半膜肌(SM)測定肌節(jié)長度、肌纖維直徑、MFI指數(shù),用電鏡儀分析其超微結(jié)構(gòu),分析SDS-PAGE全蛋白圖譜。

1.3 測定指標及方法

1.3.1 肌節(jié)長度和肌纖維直徑測定方法 肌節(jié)長度:取不同部位肉樣,冷凍切片,沿肌纖維方向切成約為3mm3方塊,立即置于3%戊二醛磷酸緩沖溶液中固定保存24h以上,以備電鏡分析,根據(jù)電鏡照片與實物比例計算肌節(jié)長度。

肌纖維直徑:取不同部位肉樣約為1cm×1cm×3cm,于10%甲醛溶液中固定48h,剝離肌纖維,每個樣重復(fù)3次,在10×40倍顯微鏡下,每個肉樣重復(fù)隨機計數(shù)100根肌纖維直徑,求其平均值[8]。

1.3.2 肌原纖維MFI指數(shù)測定方法 稱取不同部位肉樣2g左右,絞碎,用20mL MFI緩沖液(100mmol/L KCl、20mmol/L K3PO4、1mmol/L EDTA、1mmol/L MgCl2、1mmol/L NaN3),pH7.0[9],均質(zhì),于1000×g條件下離心15min,棄上清液,沉淀中再加入與以上等體積的MFI緩沖液均質(zhì)搖勻,再于1000×g條件下離心15min,棄上清液。沉淀用5mL MFI緩沖液攪勻,用200目篩網(wǎng)過濾該懸濁液,另用5mL緩沖液洗滌濾渣。過濾所得濾液用雙縮脲法測定其蛋白含量,用MFI緩沖液將其濃度稀釋到0.5mg/mL,于540nm 處測定吸光度,將D540值乘以200,即為肌原纖維MFI指數(shù)。

1.3.3 肌原纖維超微結(jié)構(gòu)測定 取不同部位肉樣約為2mm×1mm×1mm,4℃中3%戊二醛溶液中預(yù)固定48h以上。0.1mol/L磷酸緩沖液漂洗二次后,放入1%鋨酸中進行固定2h,乙醇進行梯度脫水(50%、70%、80%、90%、100%),100%乙醇反復(fù)脫水3次后,用Epon812環(huán)氧樹脂包埋聚合[10],再于實體顯微鏡下修整,切成超薄片,2%醋酸雙氧鈾6.18%檸檬酸鉛染色后,于電子顯微鏡下觀察肌原纖維超微結(jié)構(gòu)。

1.3.4 全肌肉蛋白SDS-PAGE電泳分析 稱取宰后不同部位肉樣0.4g(去除筋腱和結(jié)締組織),加入4mL SDS-PBS提取緩沖液(2% SDS,10mmol/mL Na3PO4,pH7.0),研碎,8000r/min離心5min,取上清液1mL,過濾后用雙縮脲法測定蛋白濃度,沉淀用2mL SDS-PBS溶解,待用。分離膠濃度為12.5%,濃縮膠濃度為5%。用雙縮脲法調(diào)整蛋白濃度,取待測蛋白質(zhì)和5×樣品緩沖(60mmol/L Tris-HCl,25%甘油,14.4mmol/L 2-巰基乙醇,0.1%溴酚蘭,pH6.8)以4∶1混合,沸水中煮5min。上樣量20μL。電泳電壓:濃縮膠為75V,分離膠為110V,時間約4h[11-12]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

以上每個處理重復(fù)3次,用Microsoft Excel 2003進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析,采用SPSS19.0 統(tǒng)計軟件用Duncan法對所有數(shù)據(jù)進行顯著性分析(p<0.01)。

2 結(jié)果與分析

2.1 電刺激對不同部位牦牛肉肌節(jié)長度和肌纖維直徑的影響

2.1.1 對肌節(jié)長度的影響 圖1是電刺激后不同部位牦牛肉肌節(jié)長度變化趨勢。TB宰后0d肌節(jié)長度2.02μm,為三個部位中最大值,表明TB嫩度最佳。三個部位的肌節(jié)長度宰后0、1d差異不顯著(p>0.05),但從同一部位看,TB肌節(jié)長度相比宰后0d收縮極顯著(p<0.01),其長度縮短40%,SM肌節(jié)長度相比宰后0d收縮極顯著(p<0.01),縮短26%。宰后3d,TB與ML肌節(jié)長度相比,差異不顯著(p>0.05),但與SM相比TB、ML變化顯著(p<0.05),且SM宰后1d到3d,其肌節(jié)長度上升12%。隨著牦牛肉成熟時間延長,宰后5d,不同部位牦牛肉肌節(jié)長度有所恢復(fù),TB、ML肌節(jié)長度相對宰后3d變化顯著(p<0.05),分別上升30%和20%,SM變化不顯著(p>0.05),其長度僅恢復(fù)2%。此圖表明電刺激在短時間內(nèi)顯著改變不同部位牦牛肉肌節(jié)長度。

圖1 電刺激對成熟過程中不同部位牦牛肉肌節(jié)長度的影響Fig.1 The sarcomere length in different part ofyak meat during postmortem aging

注:小寫字母表示同一部位牦牛肉在不同成熟時段的差異顯著性,大寫字母表示不同部位牦牛肉在同一成熟時段的差異顯著性,相鄰字母 (例AB、ab)表示差異顯著(p<0.05),相隔字母(例AC、ac)表示差異極顯著(p<0.01),圖2、圖3同。

2.1.2 對肌纖維直徑的影響 圖2所示,不同部位牦牛肉肌纖維直徑總體趨勢是隨著成熟時間延長而減小。宰后0d,肌纖維直徑最大的是SM,為61.05μm,其為牦牛運動部位,因此肌纖維較長,肉質(zhì)較硬。宰后1d相比宰后0d,TB肌纖維直徑顯著變大(p<0.05),上升5%,ML、SM肌纖維直徑顯著變小(p<0.05),分別縮小2%和12%。宰后3d,與ML相比TB、SM肌纖維直徑差異顯著(p<0.05)。宰后5d,TB、ML、SM肌纖維直徑相比宰后3d顯著減小(p<0.05),分別下降13%、8%和2%。此圖表明TB嫩度最佳,肌纖維直徑縮小力度最大,同時證明電刺激使嫩度較差的SM改善,宰后0～5d肌纖維直徑縮小14%。

圖2 電刺激對成熟過程中不同部位牦牛肉肌纖維直徑的影響Fig.2 The muscle fiber diameter in different partof yak meat during postmortem aging

2.2 電刺激對不同部位牦牛肉MFI程度的影響

圖3表明,電刺激后隨著成熟時間延長,不同部位牦牛肉MFI值呈上升趨勢。宰后0d,不同部位牦牛肉MFI有顯著差異,其中SM與TB差異極顯著(p<0.01),其中嫩度較差的SM MFI值為43.64。宰后1d,TB的MFI值顯著變化(p<0.05),上升21%,相比宰后0d,SM的MFI值變化顯著(p<0.05),其值上升36%,SM、ML的MFI值相近(p>0.05),這表明電刺激明顯縮短嫩度較差SM的小片化時間。宰后3d,TB的MFI值相比宰后1d,顯著變化(p<0.05),上升12%。宰后5d,MFI值最大的是TB,相比宰后3d上升13%,SM與ML的MFI值分別上升7%和11%,此時兩者小片化程度接近(p>0.05),在整個過程中，TB、ML和SM的MFI值分別上升54%、55%和92%，這說明電刺激明顯加快嫩度較差SM的嫩化程度。

圖3 電刺激對成熟過程中不同部位牦牛肉肌原纖維MFI指數(shù)的影響Fig.3 Myofbrils fragment index(MFI)in yak during postmortem aging

2.3 電刺激對不同部位牦牛肉肌原纖維超微結(jié)構(gòu)的影響

由圖4可知,經(jīng)過電刺激處理,TB、ML和SM肌原纖維超微結(jié)構(gòu)都發(fā)生了顯著變化。宰后0d,不同部位牦牛肉肌原纖維結(jié)構(gòu)完整,尤其TB的Z線清晰可見(圖4A-TB.0d),TB、ML和SM肌原纖維間連接緊實平滑(圖4A組)。宰后1d,不同部位牦牛肉肌纖維結(jié)構(gòu)都有不同程度形變,ML肌原纖維之間縫隙變大(圖4B ML.1d),SM肌原纖維框架還未被完全破壞,M線基本保持完好(圖4B SM.1d),相比其他部位肌原纖維解體稍顯滯后。宰后3d不同部位牦牛肉肌原纖維結(jié)構(gòu)繼續(xù)解體(圖4C),并從電鏡中看到攣縮帶(圖4C TB.3d、SM.3d),電刺激產(chǎn)生攣縮帶使局部肌原纖維超收縮,物理性破壞肌原纖維結(jié)構(gòu),提高肉嫩度[13]。宰后5d,TB的肌原纖維框架基本模糊,ML和SM的肌原纖維間隙明顯變大,M線消失,Z線斷裂,粗絲、細絲結(jié)構(gòu)也很模糊,肌原纖維大面積溶解,三個部位都出現(xiàn)不同程度的小片化現(xiàn)象(圖4D組)。此圖表明,通過電刺激產(chǎn)生的攣縮帶對肌原纖維破壞,細胞液滲出,增加不同部位牦牛肉多汁性,提升不同部位牦牛肉嫩度。

圖4 電刺激對成熟過程中不同部位牦牛肉肌原纖維超微結(jié)構(gòu)的影響(×15000)Fig.4 variations of ultrastructure of myofibrilsin Yak during postmortem aging(×15000)

注:A.宰后0d;B.宰后1d;C.宰后3d;D.宰后5d。

2.4 電刺激對不同部位牦牛肉全肌肉蛋白SDS-PAGE電泳圖譜的影響

圖5所示,電刺激后,隨著肌肉成熟時間延長,不同部位牦牛肉SDS-PAGE電泳圖譜都發(fā)生了一定的降解變化。宰后0d,三個部位電泳圖譜中一些分子量大的蛋白質(zhì)條帶逐漸被降解,可知電刺激已經(jīng)開始發(fā)揮作用。圖5-TB,宰后1d在75～100ku之間有小降解片段產(chǎn)生,圖5-ML顯示其降解片段是在宰后3d,此區(qū)域為肌球蛋白重鏈(Hm)分子量區(qū)域。圖5-SM在48～63ku之間蛋白質(zhì)條帶降解極顯著,宰后0～5d,幾乎呈現(xiàn)出一個模糊痕跡,此為肌間線蛋白(D)的分子量區(qū)域。對于在17～20ku之間肌球蛋白輕鏈(Lm1Lm2)的分子量區(qū)域,不同部位牦牛肉對其降解程度與75～100ku之間可能出現(xiàn)的Hm降解度呈正相關(guān),值得注意的是圖5-ML的Hm和Lm1Lm2的可能區(qū)域,在宰后5d,條帶顏色稍有加深,這種細微的變化可能和內(nèi)源酶消耗減慢后非酶因素干擾有關(guān)。不同部位牦牛肉蛋白質(zhì)條帶降解速度和程度在宰后0～3d有差異。宰后5d,各個蛋白質(zhì)條帶降解程度不再有明顯變化,痕跡模糊,這說明內(nèi)源酶被消耗,活性降低,不再降解更多蛋白質(zhì)。

圖5 電刺激對成熟過程中不同部位牦牛肉 全肌肉蛋白SDS-PAGE電泳圖譜的影響Fig.5 SDS-PAGEphotograph of yak whoele muscle proteins during postmortem aging

注:Mark為不同蛋白分子量標準蛋白泳道, 0d～5d泳道分別為電刺激后成熟 0、1、3、5d的樣品;Hm:肌球蛋白重鏈、P:原肌球蛋白、 D:肌間線蛋白、A:肌動蛋白、T:肌鈣蛋白-T、 Lm1Lm2:肌球蛋白輕鏈。

3 討論

本研究結(jié)果表明電刺激作用在短時間內(nèi)顯著改變不同部位牦牛肉肌節(jié)長度。電刺激對較差肉質(zhì)嫩化效果明顯,肌節(jié)收縮又舒展的這種變化趨勢與Eikelenboom和Smulders[13]研究低壓電刺激宰后牛肉成熟過程中肌節(jié)長度變化相符,肌節(jié)長度恢復(fù)越大,肌肉嫩度越大。不同部位牦牛肉肌纖維直徑在宰后0～5d內(nèi)平均縮短6%、5%和9%,差異顯著(p<0.05),其中SM變化最顯著,這說明電刺激對不同部位牦牛肉的影響效果有顯著性差異,肌纖維直徑下降這一趨勢與Thompson[14]研究牛背最長肌成熟過程結(jié)果相近,研究表明肉質(zhì)越細嫩的部位,粗絲細絲密度越大,系水力越強,肌纖維直徑越小。

本研究結(jié)果表明電刺激作用加速肌原纖維破壞程度。這一增大趨勢與Veilseth[15]研究電刺激羊宰后成熟過程結(jié)果一致,MFI值越大,肌原纖維結(jié)構(gòu)的完整性受到的破壞程度越大,肉質(zhì)嫩度越好。宰后短時間內(nèi)電刺激使肌肉痙攣,宰后5d,TB與SM差異顯著(p<0.05),ML與SM差異不顯著(p>0.05),也就是說電刺激對天然肉質(zhì)硬度較大的SM嫩化效果顯著,使其與其他部位嫩度接近,這與Terevinto[16]研究鴕鳥不同部位肉結(jié)果類似,運動部位肉質(zhì)較硬,彈性蛋白含量多,電刺激有效嫩化硬度大位肉。

本實驗結(jié)果表明,電刺激產(chǎn)生攣縮帶,改變不同部位牦牛肉超微結(jié)構(gòu)。Takahashi[17]研究得出電刺激后牛肉微觀結(jié)構(gòu)中肌節(jié)長度最大縮短85%,Sorinmade[18]提出45V、2min電刺激,有30%牛肉超微結(jié)構(gòu)受到物理破壞,這些變化趨勢與本實驗結(jié)果一致,這說明,電刺激使不同部位牦牛肉肌肉痙攣,形成攣縮帶,破壞肌原纖維物理結(jié)構(gòu),加速成熟進程。Kent和Spencer[19]研究認為,電刺激除了對肌原纖維結(jié)構(gòu)物理性破壞外,攣縮帶所產(chǎn)生的肌原纖維超微結(jié)構(gòu)形變,更大程度暴露了蛋白降解底物,從而加快了細胞骨架蛋白降解。

本研究表明電刺激加快蛋白質(zhì)降解,改善不同部位牦牛肉肉質(zhì)嫩度。Taylor等[20]研究發(fā)現(xiàn)電刺激和冷卻延遲條件下,TB和SM肌纖維蛋白骨架在72小時內(nèi)逐漸被破壞,證明電刺激使SM肉質(zhì)嫩度改善,宰后5d,TB、ML和SM蛋白質(zhì)條帶降解程度不顯著,內(nèi)源酶被消耗,Bernard[21]研究鈣激活酶在宰后2d內(nèi)活性最大,其他主要內(nèi)源酶類在宰后5d活性下降,這與本實驗結(jié)果一致。Dransfield[22]研究表明肉的成熟是內(nèi)源酶對肌肉中各種蛋白質(zhì)降解所致,電刺激使肌節(jié)收縮,加速牛肉中ATP分解,同時無氧條件下糖原酵解產(chǎn)生乳酸,使宰后胴體內(nèi)pH迅速下降,胴體酸環(huán)境導(dǎo)致內(nèi)源酶膜破裂,使其充分接觸肌纖維蛋白,加大對蛋白質(zhì)的分解力度,使肌纖維結(jié)構(gòu)破壞,MFI值增大,快速提升嫩度。

4 結(jié)論

低壓電刺激使不同部位牦牛肉肌節(jié)長度在宰后0～5d內(nèi)顯著變化,顯著縮短肌纖維直徑,有效地縮短肉質(zhì)較差SM成熟排酸時間。電刺激對不同部位牦牛肉嫩化作用極顯著,其中TB嫩化程度最佳,SM嫩度改善作用極顯著。電刺激使不同部位牦牛肉都產(chǎn)生破壞肌節(jié)結(jié)構(gòu)的攣縮帶,肌原纖維大面積溶解;宰后5d,SM與ML嫩化程度接近。電刺激后全肌肉蛋白SDS-PAGE電泳圖譜顯示,不同部位牦牛肉對蛋白質(zhì)降解效果有一定差異,不同部位牦牛肉中蛋白質(zhì)成分有一定差異,這影響著不同部位肉質(zhì)嫩度。

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Effect of low voltage electrical stimulation on myofibrillar proteolysisof different parts of yak meat

JIA Qing1,YU Qun-li1，*,TIAN Yuan1,SUN Zhi-chang1,LI Hong-bo2

(1.College of Food Science and Engineering,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China；2.Zhongtian Bio～Engineering Co.Ltd. of Gansu Longyuan,Longxi 748100,China)

After being treated by electrical stimulation in yak meat,changes in microstructure and myofibrillar proteolysis were studied. The raw materials were yaks slaughtered with electrical stimulation within 5min(21V,50Hz,90s),and then chilled(0～4℃,wind speed 0.5m/s). Taking front triceps(TB),central longissimus muscle(ML)and posterior semimembranosus(SM)as material,respectively,then determined sarcomere length,muscle fiber diameter,MFI value,muscle fiber microstructures and SDS-PAGE electrophoresis after postmortem 0,1,3 and 5d. The results indicated that after electrical stimulation,sarcomere length of different parts of yak meat changed significantly(p<0.05);the average diameter of the muscle fibers shortened 6%,5% and 9% repectively,MFI values increased by 54%,55% and 92% significantly,tenderness of SM increased significantly(p<0.05). Share of different parts of yak meat myofibrillar ultrastructure contracture were 23.9%,26.3% and 31.2%. Myofibrillar ultrastructural changed significantly. The view of the SDS-PAGEphotograph,TB,ML and SM Myofibrillar protein degradated completely between 48～75ku. In a conclusion,electrical stimulation could shorten the aging time,and improve tenderness of yak meat,especially,make a significant difference to poorer SM part(p<0.05).

yak;electrical stimulation;postmortem aging;myofibrils

2014-05-19

賈青(1987-),女,碩士研究生,研究方向:動物性食品營養(yǎng)工程。

*通訊作者:余群力(1962-),男,博士,教授,研究方向:動物性食品營養(yǎng)工程。

國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(肉牛牦牛)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系資助項目(CARS-38);國家科技支撐計劃(2012BAD28B01)。

TS251.1

A

1002-0306(2015)05-0053-05

10.13386/j.issn1002-0306.2015.05.002