西藏綿羊胚胎移植引進(jìn)試驗(yàn)

德慶卓嘎 西藏自治區(qū)農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所 850009

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)羊只

本試驗(yàn)采用內(nèi)蒙古無角多塞特羊冷凍胚胎、林周半細(xì)毛羊以及當(dāng)?shù)匮蜃鳛樵囼?yàn)材料。共選擇64 只供、受體母羊，供體羊和受體羊選擇無繁殖機(jī)能疾病、非疫區(qū)并無傳染疾病史、健康、膘情在7 成以上、年齡在2.5~5 歲之間的經(jīng)產(chǎn)澎波半細(xì)毛羊和當(dāng)?shù)啬秆颍粡牧种馨爰?xì)毛羊種羊場(chǎng)借用2 只澎波半細(xì)毛羊種公羊，為供、受體羊試情與供體羊人工授精、采胚用。

1.2 試驗(yàn)藥物

CIDR（孕酮栓）、FSH（促卵泡生長(zhǎng)激素）、PMSG（孕馬血清）、LH(促黃體生成激素)、PBS（杜氏磷酸緩沖液）、PG(氯前列烯醇)、75%酒精、5%碘酊、新潔爾滅、生理鹽水、雙蒸水、青霉素、鏈霉素、消炎粉、沖卵液和培養(yǎng)液。

1.3 供受體羊同期發(fā)情處理

對(duì)選出的64 只供受體羊進(jìn)行陰道埋置海綿栓同期化發(fā)情處理。將海綿栓送入陰道中，使細(xì)繩暴露在陰門外，10 天后拉住細(xì)繩將海綿栓取出，并注射PMSG（孕馬血清）2.5mL/只，同時(shí)打不同的耳標(biāo)，做好記錄。

1.4 供體羊超數(shù)排卵處理

供體羊的超數(shù)排卵處理在情期的第8～13 天進(jìn)行，對(duì)選出的10 只供體羊進(jìn)行CIDR（孕酮栓）陰道埋置，注射FSH（促卵泡生長(zhǎng)激素），每天肌注2次，連續(xù)注射4 天。第一次肌注2mL，以后每天上、下午各注射1.5mL。注射后觀察發(fā)情，采用試情公羊發(fā)情確認(rèn)，觀察時(shí)間為每天早、晚各1 次。

1.5 胚胎的采集與移植

在供體羊輸精的第3 天，采取腹部手術(shù)法采集胚胎，胚胎采集與移植在配種后第3 天進(jìn)行，胚胎發(fā)育至桑葚胚至囊胚階段進(jìn)行。當(dāng)確認(rèn)所有胚胎已進(jìn)入子宮角內(nèi)，子宮角基部用止血鉗穿孔，然后插入沖胚管。根據(jù)子宮角的粗細(xì)，由充氣管注入5~10mL 空氣，使氣囊封阻子宮腔。然后由進(jìn)液孔注入沖胚液30~50mL，再由此孔導(dǎo)出。也可對(duì)子宮角進(jìn)行上行或下行法沖洗，兩側(cè)子宮角沖卵完成后從氣球放出一部分空氣，拔出沖卵管。在子宮角基部扎孔，將沖卵管插入，用注射器注入氣體5~10mL，使氣囊在子宮角基部固定。然后在子宮角尖端插入套管針。將沖卵液由套管針注入，從沖卵管中流出，用平皿接收沖卵液，每側(cè)沖卵液用量20~30mL。沖完后氣囊放氣，沖卵管插入另一側(cè)，用同樣方法沖卵。

2 結(jié)果

2.1 超數(shù)排卵結(jié)果

同期化發(fā)情處理母羊64 只，其中供體羊10只，注射FSH 進(jìn)行超數(shù)排卵處理。發(fā)情的4 只供體羊通過腹腔鏡人工輸精后采用輸卵管采胚和子宮采胚兩種方法采集胚胎，共采集胚胎23 枚，其中受精卵14 枚，受胎率60.87%。

2.2 受體羊發(fā)情結(jié)果

同期化發(fā)情處理的54 只受體羊中，凍胚移植34 只，鮮胚移植20 只；凍胚移植34 只中發(fā)情母羊有27 只，鮮胚移植20 只中發(fā)情母羊有7 只，共計(jì)34 只受體羊發(fā)情，發(fā)情率達(dá)到62.96%。

2.3 人工授精和自然配種結(jié)果

本次試驗(yàn)采取腹腔內(nèi)窺鏡子宮角輸精法，采用微創(chuàng)的外科手術(shù)，將母畜進(jìn)行仰臥保定，不給以麻醉劑，在嵌部插入鏡頭，通過向腹腔內(nèi)充氣觀察空間，借助于腹腔鏡將精液直接送入母羊排卵一側(cè)子宮角，從而大大提高了人工授精的受胎率。

2.4 胚胎移植結(jié)果

同期化發(fā)情處理的54 只受體羊中，凍胚34只，鮮胚20 只；受體羊共產(chǎn)羔11 只，其中產(chǎn)鮮胚移植羔羊3 只、產(chǎn)凍胚移植羔羊8 只，凍胚移植母羊中1 只所產(chǎn)雙羔因難產(chǎn)死亡。鮮胚和凍胚移植的受胎率分別達(dá)到42.86%和33.33%

（1）凍胚移植結(jié)果。冷凍胚胎的采集、冷凍與保存工作在內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院畜牧所進(jìn)行。采集無角多塞特肉用綿羊胚胎60 枚，并為本試驗(yàn)冷凍保存了60 枚胚胎，其中A 級(jí)40 枚、B 級(jí)20 枚。凍胚移植34 只，產(chǎn)羔8 只，受胎率為33.33%，接近凍胚移植受胎率35%的目標(biāo)。雙胚受胎母羊1 只，雙胚率為2.94%。

（2）鮮胚移植結(jié)果。鮮胚移植20 只，產(chǎn)羔3 只，受胎率為42.86%，接近鮮胚移植受胎率45%的目標(biāo)。

3 討論

本試驗(yàn)證明，在西藏地區(qū)對(duì)藏系綿羊進(jìn)行胚胎移植是可行的，對(duì)供體采用同期發(fā)情配種和超數(shù)排卵技術(shù),受胎率達(dá)到42.86%，略低于國(guó)內(nèi)報(bào)道45%的水平。這可能與供體羊沖卵時(shí)機(jī)、海拔高度等有關(guān),也可能與胚胎移植技術(shù)操作性強(qiáng)、難度大、技術(shù)人員尚未熟練掌握有關(guān)，尚待進(jìn)一步研究。

[1]王金文,張果平,等.杜泊綿羊超數(shù)排卵與胚胎移植試驗(yàn)〔J〕.中國(guó)草食動(dòng)物,2006,1:14～15.

[2]全國(guó)高等農(nóng)業(yè)院校教材《家畜繁殖學(xué)》第四版.中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社.

[3]郭鵬程.羊胚胎移植同期發(fā)情和超數(shù)排卵應(yīng)用技術(shù)的研究[D].東北農(nóng)業(yè)大學(xué),2007.