大理市下關(guān)鎮(zhèn)動(dòng)物源食品中四環(huán)素類抗生素殘留的檢測(cè)

盧躍紅，羅開(kāi)敏，王光婷，呂榮聰，孫慧媛，熊發(fā)輝

（1.大理學(xué)院農(nóng)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，云南大理 671003；2.大理學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，云南大理 671000）

抗生素是一類有效防病治病的藥物，廣泛應(yīng)用于現(xiàn)代集約化畜禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中。在養(yǎng)殖生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)，抗生素往往通過(guò)口服、注射或作為飼料添加劑的方式被動(dòng)物吸收利用。合理規(guī)范的使用抗生素，可以預(yù)防和治療動(dòng)物疾病〔1〕、調(diào)節(jié)動(dòng)物生理機(jī)能、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)和繁殖、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)〔2-3〕。然而一些不法商家和養(yǎng)殖戶為了獲取更大的利益，在養(yǎng)殖生產(chǎn)中濫用各種抗生素〔4〕，抗生素不僅不能被動(dòng)物完全吸收利用以原形代謝產(chǎn)物的形式排出體外，對(duì)環(huán)境造成污染〔5〕，間接地給人類健康帶來(lái)威脅，而且造成畜產(chǎn)品中抗生素殘留量超標(biāo)〔6-8〕。人們長(zhǎng)期攝入含抗生素殘留的畜產(chǎn)品，會(huì)對(duì)人體健康造成很大的危害〔9-15〕。

四環(huán)素類抗生素因其廣譜的抗菌效果和便宜的價(jià)格，成為近年來(lái)常用的獸藥，品種主要有土霉素、四環(huán)素、金霉素等。本實(shí)驗(yàn)旨在對(duì)大理市下關(guān)鎮(zhèn)市售新鮮豬肉、雞肉、牛肉、魚肉及其肝臟中四環(huán)素類抗生素殘留情況進(jìn)行測(cè)定，以期為該鎮(zhèn)動(dòng)物性食品的監(jiān)測(cè)及消費(fèi)者食用安全提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 試驗(yàn)材料在大理市下關(guān)鎮(zhèn)不同的農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、大型超市，隨機(jī)采取市售新鮮豬肉、雞肉、牛肉、魚肉及其肝臟，每種樣品來(lái)源不少于5 個(gè)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)或大型超市，每份樣品不少于100 g。共采樣50份。

1.2 試劑土霉素（OTC，批號(hào)：130487-200703）、四環(huán)素（TC，批號(hào)：130306-200918）、金霉素（CTC，批號(hào)：130489-200202），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

1.3 儀器高效液相色譜儀（Agilent1100，包括二元泵G4212B、自動(dòng)進(jìn)樣器G1316C、柱溫箱G4226A、二極管陣列檢測(cè)器G4204A）；電子天平（AE240，瑞士梅特勒）；離心機(jī)；pH 計(jì)（pHS-25，上海雷磁儀器廠）；SK8200超聲波清洗器（上海科導(dǎo)超聲波儀器公司）。

2 方法

2.1 色譜條件色譜柱：ODS-C18（6.2 mm×150 mm，5 μm）、檢測(cè)波長(zhǎng)：355 nm、靈敏度：0.002 AUFS、柱溫：25 ℃、流速：0.7 mL/min、進(jìn)樣量：10 μL、流動(dòng)相：甲醇：0.01 mol/L 磷酸二氫鈉溶液（20：80），用30%硝酸溶液調(diào)節(jié)pH 2.5，使用前超聲脫氣10 min。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 精密稱取OTC、TC、CTC標(biāo)準(zhǔn)品各0.01 g，分別置于不同的10 mL棕色容量瓶中，用0.01 mol/L鹽酸溶解并定容至刻度，制備成1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，4 ℃冰箱避光保存，備用。

2.2.2 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液 分別量取OTC、TC、CTC標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各1 mL，置于100 mL 棕色容量瓶中，超純水定容至刻度，此溶液中OTC、TC、CTC濃度均為10 μg/mL。以上標(biāo)準(zhǔn)溶液于4 ℃避光保存，備用。

2.3 樣品處理稱取5.00 g（±0.01 g）切碎的肉樣（＜5 mm），置50 mL 錐形燒瓶中，加入5%高氯酸，定容至25 mL，于振蕩器上振蕩提取10 min，移入到離心管中，以3 000 r/min 離心10 min，取上清液經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾。

2.4 測(cè)定按上述色譜條件，以保留時(shí)間定性、峰面積定量，用峰面積計(jì)算土霉素、四環(huán)素和金霉素的含量。

3 結(jié)果

3.1 線性關(guān)系分別取“2.2.2”中混合標(biāo)準(zhǔn)溶液30、40、50、60、80 μL 進(jìn)樣，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明金霉素、土霉素、四環(huán)素在10～100 μg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其線性方程和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表1。

表1 金霉素、土霉素和四環(huán)素的線性方程和相關(guān)系數(shù)

3.2 樣品回收率與精密度實(shí)驗(yàn)取樣品6份，每份分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（添加水平見(jiàn)表2），按上述色譜條件進(jìn)行回收率與精密度實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，3個(gè)添加水平的回收率在78.50%～80.50%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差范圍為2.71%～2.76%，表明該方法具有較高的靈敏度和精密度。

3.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取樣品溶液6 份，每份加入等量的“2.2.2”中混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別在0、1、2、3、4和5 h進(jìn)樣，記錄樣品中色譜峰面積，計(jì)算RSD 為2.55%。結(jié)果表明金霉素、土霉素、四環(huán)素的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在5 h內(nèi)穩(wěn)定。

表2 樣品回收率及精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

3.4 樣品檢測(cè)結(jié)果和討論

3.4.1 樣品檢測(cè)結(jié)果 本批樣品按上述色譜條件檢測(cè)，均未檢測(cè)出土霉素、四環(huán)素、金霉素。色譜圖見(jiàn)圖1、2。

圖1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖

圖2 樣品色譜圖

3.4.2 討論 實(shí)驗(yàn)中，首先以GB/T 5009.116—2003規(guī)定，采用乙腈：磷酸二氫鈉溶液（35：65）作為流動(dòng)相體系時(shí)，基線平穩(wěn)，出峰時(shí)間適中，但土霉素與四環(huán)素未能有效分離，調(diào)整流動(dòng)相比例也未能將二者有效分離。最后將流動(dòng)相改為甲醇和磷酸二氫鈉后，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)甲醇：0.01 mol/L 磷酸二氫鈉（20：80）時(shí)柱效較好，土霉素與金霉素能夠有效分離，3種抗生素在20 min內(nèi)達(dá)到基線分離，分離效果較好，且靈敏度高，無(wú)試劑峰干擾。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)中所有樣品均未檢測(cè)出四環(huán)素類抗生素的殘留，說(shuō)明大理市下關(guān)鎮(zhèn)采集的該批動(dòng)物性食品中無(wú)四環(huán)素類抗生素殘留。

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