HE4在子宮內(nèi)膜癌患者血清中的表達(dá)及其與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系

楊勝晗，王蕾香，韓春薇

近年來，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率逐漸上升，嚴(yán)重威脅著婦女的健康和生命。盡管大部分子宮內(nèi)膜癌患者早期可通過組織活檢而被確診，但是仍有許多患者，臨床癥狀不明顯，就診時(shí)已是晚期。目前子宮內(nèi)膜癌最常用的診斷方法為診斷性刮宮，但這種方法對(duì)疾病的臨床分期意義不大，難以指導(dǎo)治療和預(yù)測(cè)預(yù)后，腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)可以彌補(bǔ)這一缺陷。人附睪蛋白4(human epididymis gene product 4，HE4)基因的cDNA 最早由Kirchhoff 等［1］從人的附睪中克隆得到，可編碼HE4 蛋白。目前有許多研究已經(jīng)證明HE4 與人類卵巢腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)［2-5］，近來研究［6-9］表明HE4 在子宮內(nèi)膜癌中高表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法(CMIA)檢測(cè)正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜癌患者血清HE4 表達(dá)情況，分析血清HE4 水平與子宮內(nèi)膜癌的病理類型、臨床分期、病理學(xué)分級(jí)、肌層浸潤深度及盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的關(guān)系，探討HE4 在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為子宮內(nèi)膜癌的早期診斷、指導(dǎo)臨床治療及預(yù)測(cè)預(yù)后尋找新的分子生物學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 資料 選取2010年3月－2010年12月在蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦科腫瘤科及三院婦產(chǎn)科住院手術(shù)治療的15例正常子宮內(nèi)膜患者，10 例子宮內(nèi)膜不典型增生患者，40 例子宮內(nèi)膜癌患者。正常子宮內(nèi)膜組:年齡32～54 歲，共15例。其中子宮肌瘤7 例、子宮內(nèi)膜息肉2 例、卵巢漿液性囊腺瘤3 例、功能失調(diào)性子宮出血3 例。子宮內(nèi)膜不典型增生組:年齡35～57 歲，共10 例。其中輕度子宮內(nèi)膜不典型增生3例，中度及重度子宮內(nèi)膜不典型增生7 例。子宮內(nèi)膜癌組:年齡33～72 歲，共40 例。按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)手術(shù)病理－分期:Ⅰ期18 例，Ⅱ期9 例，Ⅲ期8 例，Ⅳ期5 例;組織學(xué)分級(jí):高分化23 例，中分化10 例，低分化7 例;肌層浸潤深度≤1/2 者28 例，肌層浸潤深度＞1/2 者12 例;術(shù)后證實(shí)無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者21 例，有淋巴轉(zhuǎn)移者8 例，未做淋巴結(jié)清掃者11例;子宮內(nèi)膜樣腺癌32 例，透明細(xì)胞癌3 例，漿液性乳頭狀癌3 例，腺鱗癌2 例。

1.2 方法(1)主要儀器和試劑:①化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析儀ARCHITECT－i2000(美國雅培公司生產(chǎn));②HE4 試劑盒(美國雅培公司生產(chǎn));③HE4 定標(biāo)液(美國雅培公司生產(chǎn));④HE4 標(biāo)準(zhǔn)品(美國雅培公司生產(chǎn)，批號(hào):88K00909)。(2)實(shí)驗(yàn)步驟:術(shù)前抽取患者肘靜脈血3 ml，置于未加抗凝劑的試管中，無需處理，立即送檢。實(shí)驗(yàn)開始前，將標(biāo)本放入標(biāo)記編號(hào)的玻璃試管內(nèi)，3 000 轉(zhuǎn)/min，離心5 min，將吖啶酯類專利衍生物示蹤劑和HE4 抗體包被的類磁微粒子放入ARCHITECT－i2000 化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析儀試劑倉相應(yīng)位置，將待測(cè)標(biāo)本排序后放入反應(yīng)倉，i2000SR 全自動(dòng)免疫發(fā)光檢測(cè)儀自動(dòng)檢測(cè)HE4 濃度。(3)質(zhì)量控制:每批做高、中、低值質(zhì)量控制。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0 軟件處理，計(jì)量資料用±s 的形式表示，因組間方差不齊，組間均數(shù)比較采用秩和檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HE4 在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜癌患者血清中表達(dá)情況 正常子宮內(nèi)膜組血清HE4 范圍為(27.7～84.0)pmol/L，均值為(40.3 ±16.2)pmol/L;子宮內(nèi)膜不典型增生組血清HE4 范圍為(41～83)pmol/L，均值為(54.7 ±18.5)pmol/L;子宮內(nèi)膜癌組血清HE4 范圍為(33.9～1040.9)pmol/L，均值為(120.2 ±195.6)pmol/L。子宮內(nèi)膜癌組HE4 水平較正常子宮內(nèi)膜組高，差異具有顯著性(Z=－3.444，P=0.01);子宮內(nèi)膜癌組血清HE4 水平較子宮內(nèi)膜不典型增生組高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z =－0.845，P =0.398);子宮內(nèi)膜不典型增生組血清HE4 水平較正常子宮內(nèi)膜組高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=－1.859，P=0.063)。見表1。

2.2 血清HE4 水平與子宮內(nèi)膜癌患者各臨床病理參數(shù)的關(guān)系 血清HE4 水平與子宮內(nèi)膜癌的年齡，組織分級(jí)及病理類型無關(guān)(Z =－1.671，P =0.095＞0.05;Z =－1.569，P =0.117＞0.05;Z=－1.155，P =0.248＞0.05)，而與手術(shù)－病理分期，肌層浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P＜0.05)。Ⅰ－Ⅱ期患者血清HE4 的均值為(67.76 ±57.37)pmol/L，Ⅲ－Ⅳ期患者血清HE4 的均值為(310.14 ±362.06)pmol/L，Ⅰ－Ⅱ期患者血清HE4 水平明顯低于Ⅲ－ Ⅳ期患者(Z =－2.583，P=0.01＜0.05);深肌層浸潤的患者血清HE4 的均值為(335.35 ±355.15)pmol/L，淺肌層浸潤的患者血清HE4 的均值為(62.09 ±30.02)pmol/L，深肌層浸潤的患者血清HE4水平明顯高于淺肌層浸潤的患者(Z =－2.500，P =0.012＜0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清HE4 的均值為(437.36 ±413.90)pmol/L，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清HE4 的均值為(74.36 ±63.94)pmol/L，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清HE4 水平明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(Z =－3.088，P =0.002＜0.05)。見表2。

表1 3 組患者血清HE4 水平(pmol/L，±s)

表1 3 組患者血清HE4 水平(pmol/L，±s)

組別例數(shù)HE4HE4范圍正常子宮內(nèi)膜組1540.32 ±16.1627.7～84.0子宮內(nèi)膜不典型增生組 1054.73 ±18.4941.1～83.2子宮內(nèi)膜癌組40120.16 ±195.6633.9～1040.9

表2 血清HE4 水平與子宮內(nèi)膜癌患者各臨床病理參數(shù)的關(guān)系(pmol/L，±s)

表2 血清HE4 水平與子宮內(nèi)膜癌患者各臨床病理參數(shù)的關(guān)系(pmol/L，±s)

臨床病理參數(shù)例數(shù)HE4 水平Z 值P值年齡(歲):≤501156.57 ±26.43－1.671 0.095＞5029150.69 ±232.61手術(shù)－病理分期:Ⅰ－Ⅱ2767.76 ±57.37－2.583 0.010Ⅲ－Ⅳ13310.14 ±362.06組織學(xué)分級(jí):高23118.75 ±162.29－1.569 0.117中低17125.46 ±230.00肌層浸潤:≤1/22862.09 ±30.02－2.500 0.012＞1/212335.35 ±355.15淋巴轉(zhuǎn)移:有8437.36 ±413.90－3.088 0.002無2174.36 ±63.94病理類型:子宮內(nèi)膜樣腺癌32113.17 ±187.99－1.155 0.248其他類型8150.16 ±239.97

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，目前有關(guān)子宮內(nèi)膜癌確切病因及發(fā)病機(jī)制尚不清楚，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為是遺傳信息的改變，在內(nèi)分泌因素及外界環(huán)境因素的共同作用下逐漸演變的結(jié)果。盡管早期子宮內(nèi)膜樣腺癌(Ⅰ型)預(yù)后較好，但晚期及特殊類型的子宮內(nèi)膜癌(Ⅱ型)預(yù)后很差。晚期及復(fù)發(fā)性子宮內(nèi)膜癌的平均生存時(shí)間僅12 個(gè)月，即使給予輔助治療，仍不能提高中位生存時(shí)間［10］。目前診斷性刮宮是婦科一項(xiàng)常用的、重要的輔助診斷方法，也是目前子宮內(nèi)膜癌最有價(jià)值的診斷手段，但是無法準(zhǔn)確評(píng)估病變范圍，因此不能有效的指導(dǎo)治療。而且由于它是盲目性操作，對(duì)一些小的或位于宮角的病灶，可能會(huì)出現(xiàn)漏診或診斷過度［11］，不適用于大批量患者的篩查。經(jīng)濟(jì)可靠無創(chuàng)的血清腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)不僅用于疾病篩查、早期診斷、鑒別診斷、療效判定、預(yù)測(cè)預(yù)后，而且還是隨診的重要指標(biāo)，人附睪蛋白4(human epididymis gene product 4，HE4)是一種新型的腫瘤標(biāo)志物，屬于乳清酸性4－二硫化中心(WFDC)蛋白家族，具有疑似胰蛋白酶抑制劑的特性［12-13］。HE4 位于染色體20q12－13.1，基因全長(zhǎng)為12 kD 左右，基因編碼一段長(zhǎng)度為13 kD 的蛋白，但在其成熟的糖基化形式時(shí)，此蛋白大概為20～25 kb，并且包括含有兩個(gè)WFDC 結(jié)構(gòu)域的一條單鏈［14］。但近來研究表明HE4 在部分惡性腫瘤的早期診斷及病情監(jiān)測(cè)方面具有重要的臨床價(jià)值，所以成為當(dāng)今腫瘤分子生物學(xué)的研究熱點(diǎn)之一。本研究中HE4 在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜癌患者血清中均有不同程度的表達(dá)，表明HE4 蛋白并非腫瘤特異性蛋白。Li J 等［15］研究證明HE4 在子宮內(nèi)膜異位癥患者和健康人血清中均有不同程度的表達(dá)，張海榮等［16］報(bào)道HE4 在子宮腺肌癥患者和子宮肌瘤患者血清中表達(dá)有所不同。盡管HE4 蛋白并非腫瘤特異性蛋白，但是本研究中HE4 水平在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜不典型增生、子宮內(nèi)膜癌患者血清中表達(dá)逐漸升高，且子宮內(nèi)膜癌組HE4 水平明顯高于正常子宮內(nèi)膜組(Z=－3.444，P =0.01＜0.05)，因此提示HE4 與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生有關(guān)。先前研究已經(jīng)證實(shí)子宮內(nèi)膜不典型增生是子宮內(nèi)膜癌的癌前期病變，其癌變率為33%［17］，HE4 表達(dá)增高是否能促進(jìn)不典型增生的子宮內(nèi)膜向內(nèi)膜癌轉(zhuǎn)化，或者說是子宮內(nèi)膜癌的高危因素?我們認(rèn)為是值得深入探討的問題。

本實(shí)驗(yàn)中血清HE4 水平與子宮內(nèi)膜癌的手術(shù)－病理分期，肌層浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P＜0.05)。子宮內(nèi)膜癌的期別越晚，血清HE4 水平越高，Ⅰ－Ⅱ期患者血清HE4 水平明顯低于Ⅲ－Ⅳ期患者(Z =－2.583，P =0.010＜0.05);深肌層浸潤的患者血清HE4 水平明顯高于淺肌層浸潤的患者(Z=－2.500，P =0.012＜0.05);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清HE4 水平明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(Z =－3.088，P=0.002＜0.05)，即隨著臨床病期進(jìn)展、組織浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，HE4 基因表達(dá)水平升高，因此我們可以推測(cè)HE4與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展密切相關(guān)。關(guān)于HE4 在子宮內(nèi)膜癌患者血清中高表達(dá)的原因至今仍不明了。趙瑩珺等［18］在HE4基因轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了研究，闡明了HE4 基因的轉(zhuǎn)錄活性主要是由轉(zhuǎn)錄因子Sp1 與位于－71 和－48 的Egr－1 位點(diǎn)結(jié)合所介導(dǎo)。先前研究已證實(shí)Sp1 是一個(gè)普遍存在的轉(zhuǎn)錄因子［19］，可以受到某些組織特異性因子的調(diào)控，這些因子可以通過與Sp1 形成復(fù)合物的形式，促進(jìn)或阻礙Sp1 與其識(shí)別位點(diǎn)的結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)啟動(dòng)子調(diào)控的組織特異性［20］。本實(shí)驗(yàn)中HE4 在子宮內(nèi)膜癌患者血清中高表達(dá)，我們可以推測(cè)Sp1 可能受到子宮內(nèi)膜癌組織特異性因子的影響，引起了HE4 基因轉(zhuǎn)錄活性的異常，使得其在子宮內(nèi)膜癌患者血清中高表達(dá)。

總之，HE4 蛋白作為一種新型的腫瘤標(biāo)志物正引起越來越多研究者的關(guān)注，其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后方面的作用正不斷被發(fā)現(xiàn)。但是有關(guān)HE4 蛋白的作用機(jī)制，作用細(xì)節(jié)及受調(diào)節(jié)的因素等研究甚少，還有很多功能仍然沒有被發(fā)現(xiàn)，HE4與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的關(guān)系，尚需要進(jìn)一步探討。

［1］Kirchhoff C，Habben I，Ivell R，et al.A major human epididymisspecific cDNA encodes a protein with sequence homology to extracellular proteinase inhibitors［J］.Biol Reprod，1991，45(2):350-357.

［2］Moore RG，Brown AK，Miller MC，et al.The use of multiple novel tumor biomarker for the detection of ovarian carci-noma in patients with a pelvic mass［J］.Gynecol Oncol，2008，108(2):402-408.

［3］王術(shù)藝，謝永紅，張 杰.HE4 和CA125 聯(lián)合檢測(cè)在卵巢癌手術(shù)前后臨床價(jià)值評(píng)價(jià)［J］.河北醫(yī)藥，2009，31(5):545-546.

［4］Anastasi E，Giovanna Marchei G，Viggiani V，et al.HE4:a new potential early biomarker for the recurrence of ovarian cancer［J］.Tumour Biol，2010，31(2):113-119.

［5］Anderson GL，McIntosh M，Wu L，et al.Assessing lead time of selected ovarian cancer biomarkers:a nested case-control study［J］.J Natl Cancer Inst，2010，102(1):26-38.

［6］孫盛梅，肖曉超，張丹鳳.CA125 和HE4 聯(lián)合監(jiān)測(cè)在子宮內(nèi)膜癌診斷中的臨床價(jià)值［J］.黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2014，37(3):2-3.

［7］林鶯鶯，陳 燕，胡敏華，等.HE4、CA125 和CA19-9 單項(xiàng)和聯(lián)合檢測(cè)在子宮內(nèi)膜癌診斷中的價(jià)值［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2014，32(6):471-473.

［8］張 晶，王宇娟，霍俊玲，等.人附睪蛋白4 早期診斷子宮內(nèi)膜癌價(jià)值的系統(tǒng)評(píng)價(jià)［J］.中國循證醫(yī)學(xué)雜志，2014，14(1):72-78.

［9］勞 明，吳 蕓，朱 波，等.血清HE4 和SCCAg 與子宮內(nèi)膜癌生物學(xué)行為的關(guān)系［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2014，29(5):488-492.

［10］高 敏，高雨農(nóng).子宮內(nèi)膜癌的化療進(jìn)展［J］.中國處方藥，2009，(4):76-78.

［11］沈 鏗，郎景和.婦科腫瘤面臨的問題和挑戰(zhàn)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:66-67.

［12］Israeli O，Goldring-Aviram A，Rienstein S，et al.In silico chromosomal clustering of genes displaying altered expression patterns in ovarian cancer［J］.Cancer Genet Cytogenet，2005，160(1):35-42.

［13］Bouchard D，Morisset D，Bourbonnais Y，et al.Proteins with whey-acidic-protein motifs and cancer［J］.Lancet Oncol，2006，7(2):167-174.

［14］Bingle L，Singleton V，Bingle CD.The putative ovarian tumour marker gene HE4(WFDC2)is expressed in normal tissues and undergoes complex alternative splicing to yield multiple protein isoforms［J］.Oncogene，2002，21(17):2768-2773.

［15］Li J，Dowdy S，Tipton T，et al.HE4 as a biomarker for ovarian and endometrial cancer management［J］.Expert Rev Mol Diagn，2009，9(6):555-566.

［16］張海榮，高榮凱，冀立娟，等.子宮腺肌癥和子宮肌瘤患者血清HE4 測(cè)定的意義［J］.人民軍醫(yī)，2009，52(2):102.

［17］杰 樂，主編.婦產(chǎn)科學(xué)［M］.第6 版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2004:331.

［18］趙瑩珺，楊劍峰，朱景德.人卵巢癌相關(guān)候選基因HE4(WFDC2)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控主要由Sp1 與位于271 和248 的Egr21 位點(diǎn)結(jié)合所介導(dǎo)［J］.腫瘤，2004，24(6):517-525.

［19］Samuel WF，Cindy SM，Rhine RS，et al.Sp1 Transactivation of the TCL1 Oncogene［J］.J Biol Chem，2003，278(2):948-955.

［20］Sugawara A，Uruno A，Takeuchi K，et al.Transcription suppression of thromboxane receptor gene by peroxisome proliferator-activated receptor-gamma via an interaction with Sp1 in vascular smooth muscle cells［J］.J Biol Chem，2002，277(12):9676-983.