豬STARD3NL基因克隆和表達譜分析

邢晉祎，賈坤航，李艷平

(1.臨沂大學生命科學學院，臨沂 276005；2.山東農業(yè)大學動物科技學院，泰安 271018)

豬STARD3NL基因克隆和表達譜分析

邢晉祎1*，賈坤航1，李艷平2

(1.臨沂大學生命科學學院，臨沂 276005；2.山東農業(yè)大學動物科技學院，泰安 271018)

本研究旨在克隆豬STARD3NL(STARD3 N-terminal like protein) 基因，對其基因結構進行分析，并研究該基因在豬不同組織中的表達特性。采用5′和3′-RACE以及RT-PCR方法克隆豬STARD3NL基因，利用生物信息學方法預測蛋白結構，應用qRT-PCR技術檢測組織表達特性。結果表明，豬STARD3NL基因的cDNA序列長度為1 319 bp(GenBank登錄號：HQ634946)，編碼235個氨基酸，該氨基酸序列與其他物種相比一致性較高；進化樹分析表明，豬STARD3NL氨基酸序列與牛和綿羊的關系較近，與斑馬魚的進化關系最遠。STARD3NL氨基酸序列包含保守的MENTAL結構域，為疏水蛋白，包含4個跨膜螺旋區(qū)；二級結構主要是α-螺旋，占60%；該蛋白不存在信號肽，不是分泌蛋白；亞細胞定位顯示，該蛋白存在于內質網的概率為39.1%。qRT-PCR分析表明，STARD3NL基因在所檢測豬的14種組織均有表達，在肝中表達水平最高，在眼肌中的表達水平最低；萊蕪豬和大長豬被圓環(huán)病毒感染后，STARD3NL基因在2種豬肺組織中的表達水平差異不顯著(P>0.05)。研究結果將為進一步研究STARD3NL基因的結構和功能以及豬抗病育種提供資料。

豬；STARD3NL基因；克??；豬圓環(huán)2型病毒

STARD3NL又稱為MENTHO，是一種功能尚不完全明確的整連蛋白。該蛋白的N端包含MENTAL結構域，與STARD3(MLN64)有很高的同源性。與STARD3不同的是，STARD3NL沒有START結構域，此結構域是STARD類蛋白的特有結構域；與STARD3相同的是，STARD3NL在個體不同組織中也存在廣泛的表達，定位在細胞內的晚期核內體，可能與那里的STARD3相互作用[1]。有人認為STARD3NL與STARD3一起通過核內體途徑調控膽固醇的胞內運輸[1-2]。MENTAL結構域含有4個跨膜螺旋，這種結構域能介導MLN64和STARD3NL同源體和異源體的互作，使該蛋白定位在晚期內體膜上[1-2]。

對STARD3蛋白的功能已有初步了解，但STARD3NL蛋白的功能尚不太清楚。STARD3過表達會誘導巨型核內體的產生，該誘導作用可能由MENTAL結構域行使。STARD3NL的過表達會導致細胞內巨型核內體的積累[3]。編碼GST-MLN64融合蛋白的質粒與編碼MENTHO 或 MLN64的質粒共轉染的Hela細胞，STARD3NL 和STARD3與GST-STARD3發(fā)生特異性的免疫共沉淀。這表明STARD3可以在細胞內與STARD3NL形成同源或異源低聚物[2-4]。

目前，豬的STARD3NL基因序列和表達水平尚未見報道。萊蕪豬以其抗病強、繁殖率高、耐粗飼、肉質細嫩香醇等特點而著稱，為了充分挖掘其優(yōu)良的基因庫資源，本研究根據GenBank上登錄的人和小鼠的STARD3NL基因設計簡并引物，采用RT-PCR技術，克隆萊蕪豬STARD3NL基因序列，并對其結構和功能進行生物信息學分析；采用熒光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法分析STARD3NL基因mRNA在豬不同組織中的表達譜和用圓環(huán)病毒(Porcine circovirus type 2，PCV2)攻毒后表達水平的變化。試驗結果可望為進一步研究豬STARD3NL基因的結構和功能，以及利用萊蕪豬抗病性強的特點進行抗病育種奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物和樣品采集 選用15頭45日齡PCV2-抗體陰性萊蕪豬和15頭大長豬(大白豬♂×長白豬♀)，隨機分成4組，即萊蕪豬空白對照組5頭，大長豬空白對照組5頭，攻毒萊蕪豬10頭、攻毒大長豬10頭，分4個豬圈飼養(yǎng)，觀察飼養(yǎng)1周后進行PCV2人工感染，肌肉注射3 mL毒株：PCV2(SD2株)103.8TCID 50·mL-1，對照組肌肉注射3 mL生理鹽水。

樣品采集：分別在感染35 d后，選取4頭豬屠宰，攻毒豬和大長豬對照組采集肺組織，萊蕪豬對照組分別采集肝、肺、腎、胃、背膘、脾、脊髓、膀胱、膽囊、大腸、小腸、骨骼肌、眼肌、心組織2 g左右，立即存入液氮保存，然后存放-80 ℃冰箱備用。

1.1.2 主要試劑 M-MLV反轉錄酶、EcoRⅠ和Hind Ⅲ限制性內切酶、T4連接酶、LATaqDNA聚合酶、SYBR?Green I定量PCR試劑盒、RNA酶抑制劑、dNTP Mix、Marker DL2000、pMD18-T vector、瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒等，以上試劑均購自大連TaKaRa公司；Trizol試劑購自Invitrogen公司；E.coliDH5α購自生工生物工程(上海)股份有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1組織總RNA的抽提和cDNA第一鏈的合成 采用Trizol法，按照Trizol試劑盒說明書進行。RNA用滅菌DEPC水充分溶解后，-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

cDNA第一鏈的合成：(1)在0.2 mL PCR管中加入： 1.0 μL(約2 μg) RNA、2.0 μL Oligo(dT)18(約0.5 μg)、無RNase的超純水加到10 μL，輕輕混勻；(2)70 ℃變性5 min，立即置于冰上3 min，使RNA變性；(3)輕輕離心PCR管數秒，再加入試劑：5 μL M-MLV 5×reaction buffer、5 μL dNTPs(2.5 mmol·L-1)、1 μL RNase 抑制劑、1 μL M-MLV RT(200 U)、3 μL無RNase的水，混勻，輕輕離心數秒；(4)42 ℃延伸60 min，85 ℃ 15 min終止反應，冰上冷卻2 min，立即進行PCR反應或保存于-20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2STARD3NL基因克隆

1.2.2.1 引物設計和RT-PCR擴增：根據GenBank上人(NM_032016)和小鼠(NM_024270)的STARD3NL基因序列設計豬STARD3NL基因簡并引物Stard-F和Stard-R；根據測序得到的序列設計4條5′、3′-RACE引物(GS5′ P outer、GS5′P inner、GS3′ P outer、GS3′P inner)和2條熒光定量PCR基因表達引物(Expr-F、Expr-R)；以豬管家基因GAPDH(GenBank：AF017079)為內標，設計引物GAP-F和GAP-R，由工生物工程(上海)股份有限公司合成(表1)。

表1 PCR引物序列、退火溫度、擴增片段大小及用途

Table 1 Primer sequences，annealing temperature，sizes of PCR product and purpose

引物名稱Primername引物序列(5′→3′)Primersequence退火溫度/℃AnnealingtemperaturePCR擴增片段大小/bpSizesofPCRproduct用途UsageStard?FStard?RGGAACAACCCGATGAGGATTAAGAATACAGCACGAGACG551063PartialcDNAcloningGS5′PouterGS5′PinnerTGGAATGGACATCACGCAAGGATAAGGATGCATGCGAGCTCTGACT631905′cDNAcloningGS3′PouterGS3′PinnerCACTACTGACATGATTGAACGGCCCTGTGGCTGGTAAGATAATGTC632603′cDNAcloningExpr?FExpr?RCATCTCCTTCATCCTTGCCTATCAGAAAGCCCACCAGGT55142ExpressionGAP?FGAP?RACTCACTCTTCTACCTTTGATGCTTGTTGCTGTAGCCAAATTCA57100Internalcontrol

中間目的片段PCR擴增體系：第一鏈cDNA 1.0 μL (約50～100 ng)，10×LA PCR buffer 2.5 μL，dNTP Mix(2.5 mmol·L-1) 2.0 μL，MgCl2(25 mmol·L-1) 2.0 μL，Stard-F(20 μmol·μL-1) 0.5 μL，Stard-R(20 μmol·μL-1) 0.5 μL，LATaqDNA聚合酶0.2 μL(1 U)，ddH2O 加至25 μL，吹打混勻后稍離心片刻。反應條件：94 ℃ 4 min，(94 ℃ 35 s，55 ℃ 35 s，72 ℃ 1.5 min)×35個循環(huán)，72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。

5′和3′-RACE片段擴增：使用表1中STARD3NL基因特異性引物GS5′ P outer、GS5′P inner、GS3′ P outer和GS3′P inner，按照3′-Full RACE Core Set with PrimeScriptTMRTase和5′-Full RACE Kit with TAP(TaKaRa)試劑盒說明書進行降落PCR擴增，最后將第二輪PCR產物進行電泳檢測。

1.2.2.2 PCR產物的克隆轉化與測序： PCR產物經瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒純化回收目的片段，純化產物與pMD18-T vector(寶生物工程公司)于16 ℃連接過夜，連接產物轉化DH5α感受態(tài)細胞(上海生工)，然后涂布于含有Amp、IPTG和X-gal的平板上培養(yǎng)過夜，挑取白斑菌落于3 mL LB培養(yǎng)基中(Amp濃度為100 μg·mL-1)，37 ℃搖12 h。提取質粒，經EcoRⅠ和Hind Ⅲ酶切鑒定，至少挑取3個陽性克隆菌液送生工生物工程(上海)有限公司測序。

1.2.3STARD3NL基因的生物信息學分析 將測序獲得的序列用DNAMAN軟件預測開放閱讀框(Open read frame，ORF)，推測氨基酸序列，并比較與其它動物STARD3NL的氨基酸序列同源性；在NCBI網站(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov)上分析保守域等；用MEGA 5.1 軟件采用鄰近法構建進化樹。利用ExPASy(http：//www.expasy.org)等網站相關程序預測蛋白質疏水性、親水性、理化特性、二級結構、跨膜結構域，跨膜螺旋結構等信息。

1.2.4STARD3NL基因表達水平分析 分別以引物Expr-F、Expr-R和GAP-F、GAP-R在LightCycler 480熒光定量PCR儀(Roche公司)上進行qRT-PCR，以豬管家基因GAPDH為內標，分析STARD3NL基因mRNA表達水平。采用SYBR Green I 染料法，參照SYBR?Premix Ex TaqTMII(Tli RNaseH Plus)試劑盒(TaKaRa)說明書進行。

qRT-PCR反應體系：SYBR?Premix Ex TaqTMII(Tli RNaseH Plus)10 μL、cDNA(稀釋10倍)1 μL、引物各0.4 μL，滅菌超純水加至20 μL。

qRT-PCR反應程序：94 ℃ 30 s；94 ℃ 10 s，55(57) ℃ 10 s，72 ℃ 1 s，40個循環(huán)。每個循環(huán)后采集熒光生成擴增曲線。為了分析實時熒光定量PCR擴增的特異性，溫度從65 ℃緩慢升溫到95 ℃，連續(xù)測定樣品的熒光強度以獲取溶解曲線。試驗對所有樣本進行3個重復測定，并在每次試驗時設陰性對照。根據熒光曲線的Ct值及標準曲線，以豬GAPDH基因mRNA的表達量作為內參，用2-△△Ct法計算STARD3NL基因mRNA相對表達水平。

1.2.5 統(tǒng)計分析 采用SAS version 8.2 統(tǒng)計軟件分析STARD3NL基因表達水平，用單因子方差分析和鄧肯氏多重比較分析平均數之間的差異顯著性。當P<0.05時，為差異顯著。

2 結 果

2.1STARD3NL基因cDNA序列和氨基酸序列分析

以萊蕪豬(對照組)肝cDNA為模板，用Stard-F和Stard-R引物擴增出1條特異帶，長度約為1 100 bp左右(圖1A)，用5′和3′-RACE引物各擴增出一條特異帶，長度分別為250和275 bp左右(圖1B)。用DNAMAN軟件對序列拼接和分析，結果表明，所擴增的豬STARD3NL基因序列長度為1 319 bp (GenBank No.：HQ634946)，包括STARD3NL基因開放閱讀框(708 bp)、5′UTR(128 bp)和3′UTR(483 bp)序列。該序列與GenBank上登錄的人(BC003074.2)、大鼠(BC086352.1)、小鼠(BC003334.1)、牛(BC120111.1)STARD3NL基因cDNA核苷酸序列有很高的相似性。豬STARD3NAL基因編碼235個氨基酸，與人、黑猩猩、小鼠、大鼠、牛、綿羊、狗、雞、非洲爪蟾和斑馬魚STARD3NL氨基酸序列的一致性分別為97.45%、97.45%、94.89%、95.74%、99.57%、99.15%、97.87%、82.63%、68.22%和65.25%。這些結果表明，STARD3NL蛋白在哺乳動物之間具有高度保守性。根據豬和其他動物STARD3NL氨基酸序列，使用MEGA 5.1 軟件采用鄰近法構建分子進化樹。結果表明，豬與牛和綿羊的STARD3NL分子親緣關系最近，與斑馬魚STARD3NL分子親緣關系相對較遠(圖2)。

2.2 STARD3NL蛋白保守域分析和理化性質預測2.2.1 STARD3NL蛋白保守域分析 在NCBI網站上 Blast檢索分析STARD3NL蛋白保守結構域。結果顯示，萊蕪豬STARD3NL氨基酸序列包含保守的MENTAL結構域，符合蛋白的特點(圖3)。2.2.2 STARD3NL蛋白的理化性質和結構預測 在ExPASy服務器上使用SOSUI程序進行疏水性分析，結果顯示，萊蕪豬STARD3NL蛋白平均疏水度(Average of hydrophobicity)為0.101 7，該蛋白是疏水蛋白(圖4)。ProtScale程序預測到STARD3NL蛋白的理論等電點(pI)為4.64，分子量為26 713.60 u。用TMHMM程序預測到STARD3NL蛋白的4個跨膜螺旋區(qū)(圖5)，4個跨膜螺旋的位置分別在STARD3NL蛋白序列中的第55～74、94～116、123～142、152～171位氨基酸殘基處。用SOPMA 程序預測STARD3NL二級結構為：α-螺旋占60%，延伸鏈占11.91%，β-轉角占4.26%，無規(guī)卷曲占23.83%。用SignaIP 4.1 Server預測信號肽發(fā)現(xiàn)該蛋白不是分泌蛋白，不存在信號肽。利用工具PSORTII預測STARD3NL蛋白的細胞器定位，其分布概率：內質網(Endoplasmic reticulum)39.1%，質膜(Plasma membrane)21.7%，線粒體(Mitochondrial)17.4%，細胞外(Extracellular)4.3%，囊泡分泌系統(tǒng)(Vesicles of secretory system)4.3%，細胞核(Nuclear)4.3%，液泡(Vacuolar)4.3%，高爾基體(Golgi)4.3%。

2.3STARD3NL基因mRNA表達水平分析2.3.1STARD3NL基因在不同組織的表達譜 以萊蕪豬(對照組)14種組織的cDNA為模板，分別進行STARD3NL和GAPDH基因qRT-PCR分析。結果表明，STARD3NL基因mRNA在14種組織均有表達(圖6)。STARD3NL基因mRNA在肝中的表達水平最高，在眼肌中的表達水平最低，在肺、腎、胃、背膘、脾、脊髓、膽囊、大腸、小腸組織中呈現(xiàn)中等表達水平；并且在肝中的表達水平顯著高于在膀胱、心、骨骼肌和眼肌中的表達水平(P<0.05)。

M.DNA 相對分子質量標準DL2000；A.Stard-F和Stard-R引物擴增產物(1和2泳道)；B.5′(1泳道)和3′(2泳道)-RACE的第二輪PCR擴增產物 M.DL2000 DNA marker；A.Represents products of primer Stard-F and Stard-R(1 and 2 lane)；B .Represents PCR products of second amplification according to 5′(1 lane) and 3′(2 lane) -RACE kit’s instructions圖1 豬STARD3NL基因PCR產物電泳圖Fig.1 Agarose gel electrophoresis patterns of the porcine STARD3NL gene PCR products

0.05代表遺傳距離，每個節(jié)點的數字表示1 000次重復后的靴帶百分比The scale bar is 0.05 representing genetic distance.The number at each node indicates the percentage of bootstrapping after 1 000 replications圖2 鄰近法構建的豬STARD3NL氨基酸系統(tǒng)發(fā)生樹Fig.2 Phylogenetic tree of STARD3NL constructed by neighbor-joining(NJ) method using Mega 5.1

圖3 STARD3NL蛋白包含保守的MENTAL結構域Fig.3 Conserved MENTAL domain of the porcine STARD3NL protein

圖4 豬STARD3NL蛋白的疏水性/親水性預測Fig.4 Prediction of hydrophobicity/hydrophilicity of the porcine STARD3NL

圖5 STARD3NL蛋白跨膜結構預測Fig.5 Transmembrane prediction of the porcine STARD3NL protein by TMHMM tool

數據代表“平均數±標準誤”(n=4)。上標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)Data are represented as “means ±SE”(n=4).The lowercase superscripts indicate statistical difference among different tissues(P<0.05)圖6 豬STARD3NL基因mRNA表達譜Fig.6 The STARD3NL gene mRNA expression patterns in different tissues of porcine

2.3.2 豬圓環(huán)病毒對STARD3NL基因表達的影響 分別以對照組萊蕪豬(LW)、大長豬(YL)和攻毒組萊蕪豬(VLW)、大長豬(VYL)肺組織cDNA為模板，進行STARD3NL和GAPDH基因qRT-PCR分析。結果表明，不論是萊蕪豬還是大長豬被感染圓環(huán)病毒后，STARD3NL基因的表達水平均高于不感染圓環(huán)病毒的同日齡豬(圖7A、7B)，但差異均不顯著(P>0.05)，說明豬在圓環(huán)病毒作用下STARD3NL基因上調。不同豬種之間比較發(fā)現(xiàn)，對照組萊蕪豬肺組織STARD3NL基因的表達量高于對照組大長豬(圖7C)，同樣，感染圓環(huán)病毒后也是萊蕪豬高于大長豬(圖7D)。盡管如此，差異均沒達到顯著水平(P>0.05)。

數據代表“平均數±標準誤”(n=4)Data are represented as “means±SE”(n=4)圖7 豬圓環(huán)病毒對STARD3NL基因mRNA表達水平的影響Fig.7 The effects of porcine circovirus type 2 on mRNA expression levels of STARD3NL gene

3 討 論

本研究克隆得到了萊蕪豬STARD3NL基因cDNA序列(GenBank登錄號：HQ634946)，長度為1 319 bp。此序列包含STARD3NL基因完整開放閱讀框、5′UTR 和3′UTR序列。該基因核苷酸序列以及所編碼的氨基酸序列與人、小鼠、大鼠、牛、狗等動物核苷酸序列和氨基酸序列具有很高的一致性，并且豬STARD3NL 蛋白序列符合其家族蛋白的典型特征。另外，在萊蕪豬14種組織均檢測到STARD3NL基因的表達，與STARD3NL基因在人體內組織具有廣泛表達特性一致[2]。在細胞水平的研究表明，STARD3NL過表達可抑制晚期核內小體小管的產生，但不能調整膽固醇在纖維原細胞的積累[1，3，5]。研究發(fā)現(xiàn)STARD3NL基因可能與免疫系統(tǒng)有關[4]，因此，為證明不同豬種被PCV2感染后是否存在STARD3NL基因表達水平的差異，本研究對萊蕪豬和大長豬感染PCV2后肺組織中STARD3NL基因的表達水平也進行了分析，但差異不顯著，推測STARD3NL基因可能與PCV2無關，其原因尚需進一步研究。總之，本研究豐富了豬基因組數據庫，為進一步研究STARD3NL基因的功能和結構奠定了基礎。

F.Alpy等研究發(fā)現(xiàn)，STARD3NL蛋白與STARD3蛋白在N端含有共同MENTAL的結構域[1]，并以此給其命名。MENTAL結構域中的4個跨膜螺旋使它們定位在晚期核內體膜上，免疫雙雜交試驗也證明了該蛋白在細胞中的位置[1]。后來證實STARD3NL和STARD3可在生理條件下形成同源或異源低聚物[2]，這可能是兩者行駛功能的結構基礎。最近發(fā)現(xiàn)，STARD3或者STARD3NL和VAP(突觸小泡締合性膜蛋白相關蛋白)在晚期核內體和內質網之間能形成一種新型的分子鏈[5]。

哺乳動物START類蛋白參與多種生理過程，如細胞內的脂質運輸，脂質的代謝和信號的調節(jié)。START類蛋白的突變或缺失與遺傳紊亂、自身免疫病和癌癥等病理過程有聯(lián)系[4]。K.Simons等研究證明，STARD3在膽固醇從低密度脂蛋白(LDL)到晚期核內體的運輸過程中起轉運蛋白的功能[6]。此外，STARD3還通過調控由肌動蛋白介導的細胞器的動態(tài)變化，來促使固醇積聚并錨定在膜蛋白上[7]。研究證明StAR及其相關結構域在細胞內脂質的運輸機制中起重要作用[4，8-12]。由于STARD3在乳腺癌中存在過表達[13-16]，所以STARD3的表達可作為乳腺癌診斷依據。

目前對STARD3NL蛋白的確切功能及其作用機制尚不清楚。有試驗表明，STARD3NL的過表達會導致細胞內巨型的核內體的積累，但是這種積累對動物的生理生化以及發(fā)育的影響還不是太清楚[1]。STARD3的START結構域定點突變并未導致固醇代謝的明顯變化[10]，這說明START結構域在固醇代謝過程中并非不可或缺，但從另一角度證明C端缺少START結構域并不影響STARD3NL在固醇代謝過程中起重要作用。W.F.Li等人認為STARD3NL可作為檢測骨質疏松癥的候選基因[17]。盡管如此，豬STARD3NL基因研究剛剛起步，其功能尚需進一步研究。

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(編輯 郭云雁)

Molecular Cloning and Expression Patterns Analysis of the Porcine STARD3 N-terminal like Protein(STARD3NL) Gene

XING Jin-yi1*，JIA Kun-hang1，LI Yan-ping2

(1.CollegeofLifeScience，LinyiUniversity，Linyi276005，China；2.CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，ShandongAgriculturalUniversity，Tai’an271018，China)

The aim of this study was to clone porcineSTARD3NAL(STARD3 N-terminal like protein)，and analyze the structure ofSTARD3NAL，and investigate its expression in porcine different tissues.The porcineSTARD3NALgene was cloned by 5′，3′-RACE and RT-PCR，the protein structure of porcine STARD3NL was analyzed by bioinformatics methods.The expression patterns in different tissues were detected by real-time RT-PCR.The results showed that the porcineSTARD3NLcDNA was 1 319 bp(GenBank accession No.：HQ634946) in length，which coded 235 amino acids and shared highly identity with those of other species.The phylogenetic tree analysis indicated the porcine STARD3NL was closely related to cattle and sheep，but distantly related to the zebrafish.The porcine STARD3NL protein contained conserved MENTAL domain and was hydrophobicity protein and there were 4 transmembrane helices in the STARD3NL protein.The secondary structure of STARD3NL protein showed that the STARD3NL protein fold for 60% into α-helix.This polypeptide contained no signal peptide in its amino acids，and was a nonsecretory protein.The residing probability of STARD3NL in the endoplasmic reticulum was 39.1%.By real-time PCR，mRNA expression of porcineSTARD3NLwere detected in all 14 tissues investigated，andSTARD3NLmRNA expression levels in liver were the highest and inlongissimusdorsiwere the lowest.In addition，no significant difference ofSTARD3NLmRNA expression levels in lung tissues was detected between Laiwu pigs(LW) and YL pigs(Yorshire♂×Landrace♀) in infected circovirus group(P>0.05).These results will provide the data for further research ofSTARD3NLgene structures and function，breeding for disease resistance.

porcine；STARD3NLgene；cloning；porcine circovirus type 2

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.09.026

2014-09-28

山東省自然科學基金(ZR2013CL012)；國家自然科學基金(31372333)；臨沂大學博士啟動基金(BS08019)

邢晉祎(1968-)，男，山東曹縣人，博士，副教授，主要從事動物分子遺傳學研究

*通信作者：邢晉祎，E-mail：xingjinyi@lyu.edu.cn

S828；S813.3

A

0366-6964(2015)09-1678-08