高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方水楊酸麝香草酚搽劑中樟腦和麝香草酚含量

王靜

（河南省濮陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 濮陽(yáng) 457000）

高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方水楊酸麝香草酚搽劑中樟腦和麝香草酚含量

王靜

（河南省濮陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 濮陽(yáng) 457000）

目的 建立測(cè)定復(fù)方水楊酸麝香草酚搽劑中樟腦和麝香草酚含量的高效液相色譜法。方法 色譜柱為Thermo BDS C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇－水（60∶40）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為276 nm。結(jié)果 樟腦、麝香草酚質(zhì)量濃度分別在2.012～8.048 g／L和0.045 76～0.183 0 g／L范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好，平均回收率分別為99.85%（RSD＝0.71%）和98.64%（RSD＝2.06%）。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便可行，重復(fù)性好，可較好地控制該制劑的質(zhì)量。

高效液相色譜法；復(fù)方水楊酸麝香草酚搽劑；樟腦；麝香草酚

復(fù)方水楊酸麝香草酚搽劑是由水楊酸、苯甲酸、麝香草酚、樟腦等組方的復(fù)方制劑，具有清熱除濕、殺蟲止癢和較強(qiáng)的抗真菌作用，用于腳癬、手癬、體癬、股癬、疊瓦癬等。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為醫(yī)院制劑室自擬，但其中無(wú)主藥樟腦和麝香草酚的含量測(cè)定項(xiàng)。目前，采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定樟腦和麝香草酚的含量已有文獻(xiàn)報(bào)道［1－3］，但同時(shí)測(cè)定兩者含量的方法報(bào)道較少。為確保制劑質(zhì)量，本研究中采用HPLC法同時(shí)測(cè)定樟腦和麝香草酚的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

安捷倫 120型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；UVIKONxl型紫外分光光度計(jì)（德國(guó)）。樟腦、麝香草酚對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為100125－201107，100397－201203）；復(fù)方水楊酸麝香草酚搽劑（濮陽(yáng)市第二人民醫(yī)院制劑室）；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Thermo BDS C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇－水（60∶40）；流速：1.0 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：276 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20 μL。在上述色譜條件下，樟腦、麝香草酚的理論板數(shù)分別為5 560，8 154，兩峰的分離度大于1.5，色譜圖見圖1。

1.樟腦 2.麝香草酚A.混合對(duì)照品溶液 B.供試品溶液 C.陰性對(duì)照品溶液圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

分別取對(duì)照品樟腦約125 mg，麝香草酚約3 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加甲醇適量，振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL約含樟腦5 mg和麝香草酚0.1 mg的對(duì)照品混合溶液。精密量取復(fù)方水楊酸麝香草酚搽劑5 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL中約含樟腦5 mg和麝香草酚0.1 mg的供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性對(duì)照試驗(yàn)：按復(fù)方水楊酸麝香草酚搽劑處方比例制備不含樟腦和麝香草酚的空白樣品，按擬訂方法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明，其他成分不影響樟腦和麝香草酚的含量測(cè)定（見圖1）。

線性關(guān)系考察：精密稱取樟腦對(duì)照品125.75 mg、麝香草酚對(duì)照品2.86 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇適量振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品溶液，分別精密吸取混合對(duì)照品溶液8，12，16，20，24，28，32 μL，依次注入高效液相色譜儀，記錄色圖譜，以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)、對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度（X，g／L）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：樟腦為 Y＝224.69 X－17.97，（r＝0.999 9）；麝香草酚為 Y＝16 057.78 X＋3.454（r＝1.000 0）。結(jié)果表明，樟腦、麝香草酚質(zhì)量濃度分別在2.012～8.048 g／L和0.045 76～0.183 0 g／L范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄色譜峰面積。結(jié)果樟腦、麝香草酚的峰面積平均值分別為1 041.16和1 641.40，RSD分別為0.28%和0.59%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，放置于室溫，分別于0，2，4，8，12，24 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果樟腦的平均含量為99.24%，RSD為0.61%（n＝6）；麝香草酚的平均含量為 99.15%，RSD為0.99%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品，按擬訂方法重復(fù)取樣測(cè)定5次，記錄色譜峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果樟腦、麝香草酚平均含量分別為99.69%和99.81%，RSD分別為0.85%和1.08%（n＝5），表明該方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：按樣品處方比例，分別精密稱取樟腦、麝香草酚對(duì)照品適量，置適宜容量瓶中，并按處方比例加入其他成分及輔料，制成2種成分濃度均為標(biāo)示濃度80%，100%，120%的各2份樣品，按擬訂方法進(jìn)樣測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 樟腦和麝香草酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.4 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品混合溶液和供試品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄樟腦、麝香草酚的色譜峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（標(biāo)示量%，n＝3）

3 討論

在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)樟腦、麝香草酚對(duì)照品溶液分別進(jìn)行紫外光譜掃描，結(jié)果樟腦、麝香草酚的最大吸收波長(zhǎng)分別為286 nm，276 nm。由于樣品中麝香草酚的含量較少，為提高麝香草酚的檢測(cè)靈敏度，故選用麝香草酚的最大吸收波長(zhǎng)276 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)，以避免含量較低且吸收較弱的麝香草酚峰面積過(guò)小，同時(shí)也能使樟腦的含量得到準(zhǔn)確測(cè)定。

考察了不同比例的甲醇－水－磷酸、乙腈－水、甲醇－水－冰醋酸等流動(dòng)相系統(tǒng)對(duì)峰形、分離度、保留時(shí)間等的影響，結(jié)果以甲醇－水（60∶40）為流動(dòng)相時(shí)最佳。在此條件下，樟腦、麝香草酚均得到很好地分離，保留時(shí)間適中，拖尾因子及對(duì)稱因子均符合要求。

［1］何益鋒，劉義釗.HPLC法測(cè)定復(fù)方麝香草酚滴耳液中兩種組份的含量［J］.齊魯藥事，2007，26（9）：599－600.

［2］余小平，舒金富，黃 華.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定樟腦苯酚溶液中兩組分的含量［J］.藥物分析雜志，2006，26（8）：1 161－1 164.

［3］黃家衛(wèi)，盛振華，張 蓓，等.HPLC法測(cè)定銀黃噴霧劑中麝香草酚及香荊芥酚的含量［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2011，26（11）：2 693－2 694.

Determination of Camphor and Thymolum Contents in Compound Salicylic Acid and Thymol Liniment by HPLC

Wang Jing
（Puyang Municipal Institute for Food and Drug Control，Puyang，Henan，China 457000）

ObjectiveTo establish a high performance liquid chromatography（HPLC）method for the determination of camphor and thymolum contents in Compound Salicylic Acid and Thymol Liniment.MethodsThe Thermo BDS C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used with methanol－water（60∶40）as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL／min and the detection wavelength was 276 nm.ResultsThere was a good linear relationship when the mass concentrations of camphor and thymolum were within the range of 2.012－8.048 g／L and 0.045 76－0.183 0 g／L respectively.The average recovery rate was 99.85%（RSD＝0.71%）and 98.64%（RSD＝2.06%）respectively.ConclusionThe method is simple and feasible with good reproducibility，which can be used for the quality contorl of Compound Salicylic Acid and Thymol Liniment.

HPLC；Compound Salicylic Acid and Thymol Liniment；camphor；thymolum

R284.1；R286.0

A

1006－4931（2015）02－0044－02

2014－06－20）