香術(shù)茯苓顆粒的鎮(zhèn)痛和抗菌作用

王宇翎，吳文寧，林 杰，楊夢(mèng)媛，朱 韜，羅歡

◇藥學(xué)研究◇

香術(shù)茯苓顆粒的鎮(zhèn)痛和抗菌作用

王宇翎，吳文寧，林 杰，楊夢(mèng)媛，朱 韜，羅歡

目的通過(guò)觀察香術(shù)茯苓顆粒的鎮(zhèn)痛和抗菌作用，探討其治療腹瀉的可能機(jī)制。方法通過(guò)小鼠熱板法和扭體法，觀察香術(shù)茯苓顆粒的鎮(zhèn)痛作用。采用血清藥理學(xué)和體外抗菌試驗(yàn)，觀察香術(shù)茯苓顆粒的抗菌作用。結(jié)果香術(shù)茯苓顆粒3、6 g／kg給藥3 d可延長(zhǎng)小鼠疼痛潛伏期，減少冰醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)，具有顯著的鎮(zhèn)痛作用；血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示，香術(shù)茯苓顆粒6 g／kg給藥3 d血清可以增加大腸埃希菌抑菌圈直徑，有明顯的抑菌作用；但對(duì)傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌無(wú)作用。體外抗菌實(shí)驗(yàn)顯示，香術(shù)茯苓顆粒對(duì)大腸埃希菌的最低抑菌濃度（MIC）為20.0 mg／ml，最低殺菌濃度（MBC）為80.0 mg／ml；對(duì)傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC均為160.0 mg／ml，未測(cè)出MBC值。結(jié)論香術(shù)茯苓顆粒具有一定的鎮(zhèn)痛和抗菌作用，可能是其治療腹瀉的部分機(jī)制。

香術(shù)茯苓顆粒；抗菌作用；鎮(zhèn)痛作用

香術(shù)茯苓顆粒具有除濕、運(yùn)脾、止瀉之功效，其原湯劑臨床上主要用于風(fēng)寒或者寒濕所致的小兒泄瀉、腹痛、嘔吐及惡心，效果明確且無(wú)不良反應(yīng)，現(xiàn)將其開(kāi)發(fā)成標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范且易攜帶的現(xiàn)代中藥顆粒劑。先前的藥理學(xué)試驗(yàn)［1］已經(jīng)證明其對(duì)蓖麻油和番瀉葉引起的小鼠腹瀉模型具有一定的止瀉作用。該研究進(jìn)一步觀察其鎮(zhèn)痛和抗菌作用，以探討其治療腹瀉的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 香術(shù)茯苓顆粒購(gòu)自合肥七星醫(yī)藥科技有限公司（批號(hào)：130121），每袋10 g，每克含

1.6 g生藥，臨用前用蒸餾水配制成所需濃度；鹽酸洛哌丁胺膠囊購(gòu)自西安楊森制藥有限公司（批號(hào)：120312291）；腸炎寧片購(gòu)自江西天施康弋陽(yáng)制藥有限公司（批號(hào)：1211204）；消炎痛片購(gòu)自臨汾奇林藥業(yè)有限公司（批號(hào)：130201）；大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、傷寒桿菌均由安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物教研室提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，雌性120只，雄性60只（熱板法均為雌性），由安徽省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)溫度：20～24℃。

1.3 儀器RB-200智能熱板儀購(gòu)自成都泰盟科技有限公司。

1.4 方法

1.4.1 小鼠熱板舔足反應(yīng)實(shí)驗(yàn)［2-3］實(shí)驗(yàn)前將雌性小鼠置于55℃恒溫水浴金屬板上，以小鼠舔右后足為疼痛反應(yīng)指標(biāo)，記錄小鼠舔足反應(yīng)潛伏期為基礎(chǔ)痛閾（剔除基礎(chǔ)痛閾＜5 s，＞30 s的小鼠），將篩選合格的60只小鼠隨機(jī)分為6組，即模型組，香術(shù)茯苓顆粒小、中、大3個(gè)劑量組（1.5、3、6 g／kg）、消炎痛組（2.5 mg／kg）、腸炎寧片組（0.42 g／kg），每組10只。模型組灌胃蒸餾水，其他組給予相應(yīng)藥物灌胃，每天1次，共3 d。各組小鼠于最后一次給藥1 h后，按同法測(cè)定小鼠舔足反應(yīng)潛伏期。

1.4.2 小鼠扭體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)［4］取60只小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，即模型組，香術(shù)茯苓顆粒小、中、大3個(gè)劑量組（1.5、3、6 g／kg）、消炎痛組（2.5 mg／kg）、腸炎寧片組（0.42 g／kg），每組10只。模型組灌胃蒸餾水，其他組給予相應(yīng)藥物灌胃，每天1次，共3 d。最后一次灌胃1 h后實(shí)驗(yàn)小鼠腹腔注射0.8%冰醋酸0.1 ml／10 g，記錄15 min內(nèi)每只小鼠扭體次數(shù)。

1.4.3 血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)［5-6］取小鼠60只，體重18～22 g，隨機(jī)分為5組：對(duì)照組，香術(shù)茯苓顆粒小、中、大3個(gè)劑量組（1.5、3、6 g／kg）以及陽(yáng)性藥組（腸炎寧片0.42 g／kg），每組12只，雌雄各半。對(duì)照組灌胃蒸餾水，其他組給予相應(yīng)藥物灌胃，給藥3 d，每天1次，最后一次給藥后1 h，各小鼠眼眶取血并分

離血清。每組4只小鼠的血清混合，即一組3份混合血清，對(duì)照組、香術(shù)茯苓顆粒小、中、大劑量組、陽(yáng)性藥組共計(jì)15份混合血清備用。用新華1號(hào)定性濾紙制成無(wú)菌的直徑為6 mm的小圓片分裝于無(wú)菌瓶?jī)?nèi)，將生理鹽水和各份混合血清分別加入裝有紙片的無(wú)菌瓶?jī)?nèi)，制備空白紙片組、對(duì)照血清紙片組、香術(shù)茯苓顆粒小、中、大劑量血清紙片組、腸炎寧片血清紙片組。將金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、傷寒桿菌3種菌株復(fù)活后，分別在LB瓊脂固體培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)16 h，用無(wú)菌的生理鹽水洗取菌落并且將其濃度稀釋到1.5×108cfu／ml，吸取5 μl均勻涂布與平板表面，待平板略干后，在標(biāo)記位置上貼上制備好的各組紙片，37℃溫箱培養(yǎng)24 h取出，測(cè)量抑菌圈直徑。

1.4.4 體外抗菌實(shí)驗(yàn)［7-8］將金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、傷寒桿菌接種普通固體的LB培養(yǎng)基平板表面，在37℃孵箱中倒置培養(yǎng)16 h后，用無(wú)菌的生理鹽水洗取菌落并且將其濃度稀釋到1×107cfu／ml，采用多點(diǎn)接種至不同濃度的藥物平板上（藥物濃度依次為160.0、80.0、40.0、20.0、10.0、5.0、2.5 mg／ml），接種量為104～105cfu／點(diǎn)，于37℃孵箱中倒置培養(yǎng)24 h觀察結(jié)果，以完全無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的最低濃度作為藥物對(duì)該菌的最低殺菌濃度（minimum bactericidal concentration，MBC），并記錄MBC值。重復(fù)以上試驗(yàn)過(guò)程，再依次將未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)的各管培養(yǎng)液分別吸出0.1 ml，進(jìn)行平板活菌計(jì)數(shù)，其中菌落數(shù)少于5個(gè)的平板所對(duì)應(yīng)的最低藥物濃度，即為該藥的最低抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 11.0軟件進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以表示。多組間比較采用單因素方差分析，組間比較采用兩兩比較的LSD法檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 香術(shù)茯苓顆粒對(duì)小鼠熱板舔足反應(yīng)的影響

結(jié)果顯示，香術(shù)茯苓顆粒3、6 g／kg給藥3 d可明顯延長(zhǎng)小鼠疼痛潛伏期，對(duì)小鼠舔足反應(yīng)有明顯的抑制作用（F＝4.505，P＜0.01）。見(jiàn)表1。

2.2 香術(shù)茯苓顆粒對(duì)小鼠扭體反應(yīng)的影響結(jié)果顯示，香術(shù)茯苓顆粒3、6 g／kg給藥3 d可減少冰醋酸引起的小鼠扭體數(shù)，對(duì)小鼠扭體反應(yīng)有明顯的抑制作用（F＝3.174，P＜0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 香術(shù)茯苓顆粒對(duì)血清藥理學(xué)的影響香術(shù)茯苓顆粒6 g／kg給藥3 d的血清可以增加大腸埃希菌抑菌圈直徑（F＝3.582，P＜0.05），但對(duì)傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌無(wú)作用，見(jiàn)表3。

表1 香術(shù)茯苓顆粒對(duì)小鼠熱板舔足反應(yīng)的影響（s，n＝10，）

表1 香術(shù)茯苓顆粒對(duì)小鼠熱板舔足反應(yīng)的影響（s，n＝10，）

與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01

組別舔足反應(yīng)潛伏期給藥前給藥后模型14.15±3.5713.70±5.85香術(shù)茯苓顆粒小劑量13.65±4.0816.00±5.16中劑量14.60±4.3521.00±7.10*大劑量14.05±4.1922.20±7.16**腸炎寧片15.70±5.2320.60±5.89*消炎痛15.85±3.5725.40±6.69**

表2 香術(shù)茯苓顆粒對(duì)小鼠扭體反應(yīng)的影響（次，n＝10，）

表2 香術(shù)茯苓顆粒對(duì)小鼠扭體反應(yīng)的影響（次，n＝10，）

與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01

組別15 min 內(nèi)扭體次數(shù)模型26.50±8.58香術(shù)茯苓顆粒小劑量23.50±6.92中劑量19.10±6.85*大劑量17.80±5.57**腸炎寧片20.40±6.50*消炎痛16.50±4.85**

表3 香術(shù)茯苓顆粒對(duì)細(xì)菌抑菌圈的影響（mm，n＝3，）

表3 香術(shù)茯苓顆粒對(duì)細(xì)菌抑菌圈的影響（mm，n＝3，）

與對(duì)照血清紙片組比較：*P＜0.05

組別抑菌圈直徑大腸埃希菌金黃色葡萄球菌傷寒桿菌空白紙片0.00±0.000.00±0.000.00±0.00對(duì)照血清紙片8.69±0.760.00±0.000.00±0.00香術(shù)茯苓顆粒小劑量血清紙片9.18±1.160.00±0.000.00±0.00中劑量血清紙片9.78±0.820.00±0.000.00±0.00大劑量血清紙片11.51±0.56*0.00±0.000.00±0.00腸炎寧片血清紙片11.13±1.83*0.00±0.000.00±0.00

2.4 香術(shù)茯苓顆粒的體外抗菌作用香術(shù)茯苓顆粒對(duì)大腸埃希菌的MIC值為20.0 mg／ml，MBC值為80.0 mg／ml；對(duì)傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC值均為160.0 mg／ml，未測(cè)出MBC值，見(jiàn)表4。

表4 香術(shù)茯苓顆粒體外MIC和MBC值（mg／ml，n＝3，）

表4 香術(shù)茯苓顆粒體外MIC和MBC值（mg／ml，n＝3，）

細(xì)菌名稱MICMBC大腸埃希菌20.0±0.0080.0±0.00傷寒桿菌160.0±0.00未測(cè)出金黃色葡萄球菌160.0±0.00未測(cè)出

3 討論

香術(shù)茯苓顆粒由藿香、蒼術(shù)、薏苡仁、茯苓、車前子、澤瀉、馬齒莧、石榴皮、山楂、木香十味中藥組成。方中藿香歸脾、胃、肺經(jīng)，具有芳香化濁、和中止嘔之功效；蒼術(shù)歸脾、胃、肝經(jīng)，具有燥濕健脾、祛風(fēng)散寒之功效，兩藥共為君藥。薏苡仁歸脾、胃、肺經(jīng)，具有利水滲濕、健脾止瀉之功效；茯苓歸心、肺、脾、腎經(jīng)，具有滲濕利水，健脾和胃之功效；車前子歸肝、腎、肺、小腸經(jīng)，具有清熱利尿、滲濕止瀉之功效；澤瀉歸腎、膀胱經(jīng)，具有利水滲濕之功效，以上四味共為臣藥。馬齒莧歸肝、大腸經(jīng)，具有清熱解毒，涼血止痢之功效；石榴皮歸大腸經(jīng)，具有澀腸止瀉之功效；山楂歸脾、胃、肝經(jīng)，具消積化滯、收斂止痢之功效；木香歸脾、胃、大腸、三焦、膽經(jīng)，具有行氣止痛，健脾消食之功效，此四藥為佐使藥。全方具有除濕運(yùn)脾止瀉的作用，對(duì)兒童腹瀉療效明顯。

腹瀉時(shí)有大量化學(xué)物質(zhì)的產(chǎn)生，可刺激腸道痙攣，引起腹部疼痛。本試驗(yàn)采用小鼠熱板法和扭體法，觀察香術(shù)茯苓顆粒的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果顯示，香術(shù)茯苓顆粒3、6 g／kg給藥3 d對(duì)小鼠熱板黏足反應(yīng)和扭體反應(yīng)均有明顯的抑制作用，鎮(zhèn)痛作用顯著。試驗(yàn)結(jié)果表明，香術(shù)茯苓顆粒在止瀉的同時(shí)，對(duì)于腹痛有一定的緩解作用。

此外，采用血清藥理學(xué)和體外抗菌實(shí)驗(yàn)，觀察香術(shù)茯苓顆粒的抗菌作用。血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示，香術(shù)茯苓顆粒6 g／kg給藥3 d血清可以增加大腸埃希菌抑菌圈直徑，有明顯的抑菌作用；但對(duì)傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌無(wú)作用。體外抗菌實(shí)驗(yàn)顯示，香術(shù)茯苓顆粒對(duì)大腸埃希菌的MIC值為20.0 mg／ml，MBC值為80.0 mg／ml；對(duì)傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC值均為160.0 mg／ml，未測(cè)出MBC值。提示香術(shù)茯苓顆粒止瀉機(jī)制可能與抗菌作用有關(guān)。

綜上所述，香術(shù)茯苓顆粒具有一定的鎮(zhèn)痛和抗菌作用，可能是其治療腹瀉的部分機(jī)制。

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Analgesic and antibacteria effects of Ageratum rhizoma Atractylodis Tuckahoe granules

Wang Yuling，Wu Wenning，Lin Jie，et al
（Dept of Pharmacology，Anhui Medical University，Hefei 230032）

ObjectiveTo study analgesic and antibacteria effects of Ageratum rhizoma Atractylodis Tuckahoe granules（ARTG）.MethodsHot-plate test and writhing test were used to study the analgesic effects of ARTG.Serum pharmacology and the antibacterial activity in vitro were used to study antibacteria effects of ARTG.ResultsARTG（3，6 g／kg）administrated three days could increase the pain threshold in mice，decrease twist times induced by acetic acid.The serum pharmacology showed the serum of three days by ARTG（6 g／kg）had significally bacteriostatic effects against Escherichia coli.，but no effect on Typhoid bacillus and Staphylococcus aureus.In vitro，ARTG had certain bacteriostatic and bactericidal effects against Escherichia coli.，but no bactericidal effects against Typhoid bacillus and Staphylococcus aureus.ConclusionARTG has analgesic and antibacteria effects in animal models，and they might be the part mechanism in treating diarrhea.

Ageratum rhizoma Atractylodis Tuckahoe granules；analgesic effect；antibacteria effect

R 965.2

A

1000-1492（2015）12-1770-03

時(shí)間：2015-11-18 10：12：34

http：／／www.cnki.net／KCMS／detail／34.1065.R.20151118.1012.028.html

2015-07-23接收

安徽高等學(xué)校省級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目（編號(hào)：KJ2013A146）

安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，合肥 230032

王宇翎，女，副教授，責(zé)任作者，E-mail：wangyuling1973＠126.com