病理制片過程中常用試劑的合理更換

劉細榮，黃海燕，李敏才

(1.咸寧市第一人民醫(yī)院病理科，湖北咸寧437000;2.湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院)

病理制片過程中常用試劑的合理更換

劉細榮1，黃海燕1，李敏才2

(1.咸寧市第一人民醫(yī)院病理科，湖北咸寧437000;2.湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院)

目的在保證病理制片質(zhì)量基礎(chǔ)上，探索常用組織塊和浸泡液的量的關(guān)系。方法采用全自動脫水機方式，標本厚度控制在1cm×1cm×0.2cm范圍內(nèi)，將標本分為3組，按相同試劑量(2000ml)和相同程序分別處理，比較制片質(zhì)量差別。結(jié)果第1組3000塊標本，有900塊組織勉強可以切出完整的切片，余下均不能切出完整切片，表現(xiàn)為組織發(fā)軟，切片松散;第2組2000塊標本，組織軟硬度適中，都能較順利的切出完整切片;第3組的標本1000塊組織，其中700塊組織通過溫水濕潤，能勉強切出切片，余下組織在切片時出現(xiàn)斷裂、皺褶等，無法制片。結(jié)論標本處理量與常用試劑的消耗相關(guān)，常用試劑的更換以組織塊數(shù)量計算可能更為合理。

病理制片;常用試劑;更換

石蠟切片制作技術(shù)是病理學(xué)、組織胚胎學(xué)與科學(xué)研究觀察細胞、組織的生理、病理形態(tài)變化的一種常用主要方法，在醫(yī)院病理科起著無法替代的作用。隨著現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，環(huán)保問題日益突出，越來越多的新技術(shù)、新設(shè)備投入到病理科，這樣對病理組織標本的處理要求也日益提高。可是大多數(shù)病理常用試劑具有毒性、腐蝕性、易燃、易爆等特性，所以安全、高效、環(huán)保、污染小、組織處理好的全自動密閉式脫水機被越來越多的醫(yī)院病理科所采用［1］。切片質(zhì)量的好壞，直接會影響到病理的診斷和各種新技術(shù)的開展。為此我院探索出常用組織塊和浸泡液的關(guān)系，既保證了標本質(zhì)量，又有效利用和節(jié)約了試劑，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料標本均來源于本院病理科，病理活檢取材后剩余的標本6000例，均更換新試劑。甲醛、無水乙醇、松節(jié)油均購于武漢市中天化工有限責(zé)任公司。石蠟:浸蠟第一、二缸為58℃～60℃、第三缸為60℃～62℃;包埋蠟為68℃～78℃蜂蠟和60℃～62℃石蠟，以1∶4混合。使用器材:TC－120型智能程控生物組織自動脫水機(Taiva)，JBL5生物組織包埋機(WHJJ)，JB－6生物組織攤烤片機(WHJJ)、德國萊卡2015切片機和Microtome Blade Stainless Steel R35切片刀。

1.2 方法組織標本厚度控制在1cm×1cm× 0.2cm范圍內(nèi)，將標本分為3組(3000塊、2000塊、1000塊)，按相同時間(15個半小時)及試劑量(2000ml)分別處理，處理程序［2］:采用脫水機方式進行脫水。處理流程:10%的中性福爾馬林2h－85%酒精1h－90%酒精1h－95%Ⅰ酒精1h－95%Ⅱ酒精2h－無水Ⅰ酒精1h－無水Ⅱ酒精2h－松節(jié)油Ⅰ45min－松節(jié)油Ⅱ45min－60℃石蠟Ⅰ1h－60℃石蠟Ⅱ1h－62℃石蠟Ⅲ2h。

常規(guī)HE染色處理，切片厚度控制在3～4μm之內(nèi)，環(huán)境溫度不大于30℃，局部環(huán)境有良好的通風(fēng)和消防設(shè)施。比較制片質(zhì)量差別。

2 結(jié)果

第1組3000例標本中有900塊組織勉強可以切出完整的切片;余下2100塊不能切出完整切片，表現(xiàn)為局部出現(xiàn)白色區(qū)域，切片松散。第2組2000例標本組織軟硬度適中，均能較順利的切出完整切片，組織切面完整、平坦、厚薄均勻。第3組1000例標本，其中700塊通過溫水濕潤，能切出切片，但厚薄不均;其余300塊切片較硬，切片時出現(xiàn)斷裂、裂隙、顫橫、皺褶、折疊等現(xiàn)象，無法制片。

3 討論

3.1 試劑更換的條件

3.1.1 脫水機試劑的更換①脫水劑:將無水乙醇加入白色的無水硫酸銅粉末觀察顏色變化，若看到粉末變成藍色時，則可以斷定無水乙醇含有一定的水分，則提示可更換脫水劑了。其化學(xué)反應(yīng)的方程式為:CuSO4+5H2O==CuSO4·5H2O。CuSO4是無水硫酸銅，是白色的;而CuSO4·5H2O是五水和硫酸銅結(jié)晶，是藍色的［3］。無水乙醇如果含有水，組織塊就會脫水不盡，如果即轉(zhuǎn)入到透明劑中，透明劑就不能很好的侵入，蠟液更不能很好的滲入到組織塊中去，脫水不凈的組織塊是不能切出很好的切片的。②透明劑:在組織浸入透明劑時，觀察是否有明顯油脂從組織塊中溢出;如果沒有油脂，并且組織塊不呈現(xiàn)棕黃或暗紅色透明樣，則提示該組織塊的固定、脫水、透明不充分，應(yīng)及時更換脫水劑和透明劑［4］。③石蠟:石蠟用了一段時間后就會含有大量的透明劑，它會導(dǎo)致石蠟松軟，以至浸蠟不充分，使組織過于松軟，不利于切片，或切片容易散開，影響切片質(zhì)量，因此石蠟的更換也同樣重要［4］。

3.1.2 包埋包埋過程組織塊與包埋盒、標簽及周圍組織有粘連，或組織松軟、組織在包埋蠟液中冒氣泡似煮沸樣，與石蠟不能很好的融合在一起，表現(xiàn)蠟塊組織收縮明顯、凹陷，則提示要檢查試劑的濃度了［5］。如果濃度不夠，則應(yīng)及時過濾與更換，不然亦難以切成完好的切片。

3.1.3 切片切片過程中蠟塊松軟、組織發(fā)白、組織塊收縮凹陷，似含水樣或組織較硬脆、扭曲、變形，表現(xiàn)切片容易顫痕、開裂、松解、不呈連續(xù)的帶狀完整切片，影響觀察全貌，不甚理想，則提示常用試劑應(yīng)及時沉淀、過濾、更換。

3.1.4 染色在染色過程中時有掉片、脫片等情況，鏡下觀察表現(xiàn)組織結(jié)構(gòu)不清，核漿共染，核模糊結(jié)構(gòu)不清，核分裂像難找，胞質(zhì)輪廓不清，染色模糊，著色欠佳，診斷有一定困難，無法觀察，影響診斷。此時也提示要更換試劑了［3］。

3.2 試劑的合理更換方法病理技術(shù)的人體組織病理切片的步驟應(yīng)根據(jù)各固定、脫水、透明劑的特征，揚長避短，進行合理搭配。更換時，每次都可以只換第一缸試劑，然后后一缸試劑再往前一缸位置上移:即將第一缸試劑廢棄，將第二缸前移為第一缸，第三缸前移為第二缸，如此類推;相同試劑的最后一缸倒入新鮮試劑。但無水乙醇是不能往上頂作95%乙醇的，因為無水乙醇里已經(jīng)含有好多的脂肪了。包埋石蠟必須將68℃～78℃的蜂蠟和60℃～62℃新石蠟以1∶4的比例溶解混合后使用，目的是增強蠟塊粘稠度，組織切片連接更好。在合理使用試劑的前提下運用分批提取的方式使溶脫效率更高，有條件的科室，對于多量的組織塊，可按其大、小標本分批進行處理，較大組織塊的脫水時間長于較小者，小塊組織可適當(dāng)縮短處理時間［1］。具體做法是對每天的試劑、蠟塊數(shù)進行記錄，每次更換一批新試劑后，當(dāng)出現(xiàn)組織塊脫水不佳時，統(tǒng)計這一批試劑共做的蠟塊數(shù)。

本研究第1組由于組織塊數(shù)多，試劑量相對過少，導(dǎo)致組織脫水、透明、浸蠟不充分，使組織含水分過多，過軟，即使勉強切出，染色時出現(xiàn)脫片、掉片現(xiàn)象。第2組試劑和組織塊的比例合適，所以能夠切出完美的切片。第3組由于組織塊少，試劑量相對過多，導(dǎo)致組織脫水、透明、浸蠟過火，使組織塊過硬，切片時組織塊和蠟不能很好的融合，不能切出完好的切片。

綜上所述，常用試劑的更換都應(yīng)該以處理了多少塊組織塊數(shù)量來更換更合理。一般來說，2000ml試劑可用于處理大約2000個組織塊。

［1］司明遠.基層醫(yī)院如何制備優(yōu)質(zhì)病理切片［J］.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2012，28(2):221

［2］馬恒輝，周曉軍.組織固定處理及包埋常見問題與對策［J］.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2011，27(6):638

［3］馬恒輝，周曉軍.如何提高組織處理的技術(shù)水平［J］.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2011，27(4):415

［4］馬恒輝，周曉軍.組織切片常見問題與對策［J］.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2009，(2):211

R361.2

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2095－4646(2015)01－0057－03

2014－09－12)