蜂蜜中果糖和葡萄糖含量測定問題的研究

蒲曉亞，杜旭升，劉 泊，張 華

(1．甘肅省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗東部分中心，甘肅天水741000;2．天水維爾康蜂業(yè)科技有限公司，甘肅天水741022)

2011年4月，國家衛(wèi)生部發(fā)布GB 14963－2011《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)—蜂蜜》，其中理化指標(biāo)果糖和葡萄糖含量要求每100 g蜂蜜中不得少于60 g，檢驗方法按GB/T 18932．22《蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測定方法—液相色譜示差折光檢測法》(簡稱液相色譜法)進(jìn)行測定。在SN/T 0852－2012《進(jìn)出口蜂蜜檢驗規(guī)程》中，果糖和葡萄糖含量測定采用GB/T 18932．22規(guī)定的液相色譜法或GB/T 5009．7《食品中還原糖的測定》中規(guī)定的堿性酒石酸銅試液直接滴定法和高錳酸鉀滴定法，《中華人民共和國藥典》2010年版一部337頁《蜂蜜》標(biāo)準(zhǔn)項下的還原糖測定采用堿性酒石酸銅試液直接滴定法(統(tǒng)稱滴定法)。

1 2種測定方法的應(yīng)用及比較

液相色譜示差折光檢測法測定蜂蜜中果糖和葡萄糖含量是比較先進(jìn)的檢測方法，精度高、檢出限低，結(jié)果相對比較準(zhǔn)確，是我國秦皇島出入境檢驗檢疫局于2003年參考加拿大相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)提出制定的。但該方法使用的儀器比較昂貴，尤其是示差折光檢測器目前主要以進(jìn)口為主，另外標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)尤其是果糖偶爾在國內(nèi)可以買到，而且價格不菲，因此沒能得到大范圍的應(yīng)用。最近幾年，在國內(nèi)的一些有條件的公立檢測及仲裁機(jī)構(gòu)開始使用液相色譜法測定蜂蜜中果糖和葡萄糖含量。

滴定法技術(shù)要求低，簡單易行，容易操作，成本低廉，多年來大部分檢測單位、蜂產(chǎn)品收購加工企業(yè)及蜂產(chǎn)品專業(yè)協(xié)會等都是采用堿性酒石酸銅試液直接滴定法或高錳酸鉀滴定法測定蜂蜜中果糖和葡萄糖含量。但滴定法在檢出限度、準(zhǔn)確度、精密度及系統(tǒng)誤差方面較液相色譜法有較大的差異。

2 2種檢測方法下的測定結(jié)果分析

最近，人們在實際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)液相色譜法和滴定法測定出的蜂蜜中果糖和葡萄糖含量，在結(jié)果上存在較大的差異性，接近10%，為了驗證2種方法的差異性，筆者利用相同的樣品，按照2種不同的檢測方法進(jìn)行了檢測試驗對比。

2．1 樣品來源及選擇 分別選取產(chǎn)于甘肅天水、隴南、平?jīng)龅貐^(qū)的洋槐蜜、油菜蜜及棗花蜜各樣2個，編號分別為Y1、Y2、Y3、Y4、Z5、Z6。

2．2 檢測方法Ⅰ(堿性酒石酸銅試液直接滴定法)

2．2．1 A液。取硫酸銅結(jié)晶6．93 g加水使溶解成100 ml。

2．2．2 B液。取酒石酸鉀鈉結(jié)晶34．60 g與氫氧化鈉10．00 g加水使溶解成100 ml。

2．2．3 堿性酒石酸銅試液的標(biāo)定。取葡萄糖約0．50 g，于105℃干燥至恒重，精密稱定，置100 ml量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻。另精密量取堿性酒石酸銅試液20 ml(A液和B液各10 ml混合)，置錐形瓶中，加熱并保持在微沸的情況下，用上述葡萄糖溶液滴定至溶液的藍(lán)色幾乎消失，再繼續(xù)沸騰1 min，加1%亞甲藍(lán)溶液1滴，仍在微沸狀態(tài)下，繼續(xù)緩緩滴定至溶液的藍(lán)色消失，預(yù)測得所需葡萄糖溶液的容積(ml)。再另精密量取堿性酒石酸銅試液20 ml，自滴定管中加上述葡萄糖溶液滴定至終點前約剩1 ml。照上述預(yù)滴定的方法，自“加熱并保持在微沸的情況下”起，依法滴定。根據(jù)滴定結(jié)果算出每1 ml堿性酒石酸銅試液相當(dāng)于無水葡萄糖的重量即得。

2．2．4 樣品測定。取蜂蜜樣約1．00 g，精密稱定，置250 ml量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，移置滴定管中。按照上述“2．2．3”堿性酒石酸銅試液的標(biāo)定，自“另精密量取堿性酒石酸銅試液20 ml”起，依法滴定，并將滴定結(jié)果按下式計算:

2．3 檢測方法Ⅱ(液相色譜示差折光檢測法)

2．3．1 檢測儀器。LC-P310高效液相色譜儀，配置德國產(chǎn)R1-201H型示差折光檢測器。

2．3．2 色譜條件。色譜柱為LC-CT310型碳水化合物分析柱10μm，310 mm×3．9 mm。流動相為乙腈+水(65+35);流速為1．0 ml/min;柱溫25℃;檢測器池溫35℃;進(jìn)樣量10 μl。

2．3．3 果糖、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品。果糖標(biāo)準(zhǔn)品(01-133)-120318，葡萄糖(110833)-20100422，含量均大于等于99%，均來自于中國食品藥品檢定研究院。

經(jīng)歷了1 9 7 9年那個冬天，殷燕才知道真的戰(zhàn)場遠(yuǎn)比《英雄兒女》里更糟糕。2月2 7日晨，東線最關(guān)鍵的諒山戰(zhàn)役開始。有一個河南開封的兵李民，高個，白凈，愛說愛笑，會拉手風(fēng)琴，醫(yī)院的女孩兒們都喜歡和他搭腔聊天，與殷燕相熟。“2月2 8日那天，從6 5 0高地上抬下來許多尸體。大家都在忙著工作，一個女兵突然驚呼：這不是李民嗎！頭的一半已被炮彈炸飛，軍裝被血浸透，擔(dān)架里都是血水。要不是拿出他左上兜能夠證明身份的生死牌，誰也不知道他就是李民?！币笱嗷貞洝?/p>

2．3．4 果糖、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液及工作液的制備。分別配制成含果糖 9．80、14．70、19．60、24．50、29．40 g/L;葡萄糖 7．60、11．40、15．20、19．00、22．80 g/L 的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

2．3．5 樣品測試液制備。取蜂蜜約5 g于100 ml燒杯中，精密稱定，加20 ml水充分溶解，轉(zhuǎn)移至100 ml容量瓶中，再用15 ml水分3次洗滌燒杯并轉(zhuǎn)移至前述容量瓶中，用乙腈定容至容量，混勻。用0．45μm濾膜過濾供液相色譜測定。

2．3．6 液相色譜測定。將不同濃度的果糖、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作液分別注入液相色譜，以峰高為縱坐標(biāo)，工作溶液的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，樣品測試液同條件等體積進(jìn)樣測定，取得的峰高在標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上比較讀取被測組分溶液的濃度。按前述步驟同一樣品做平行試驗及空白試驗。

2．3．7 結(jié)果計算。果糖、葡萄糖含量計算公式如下:

式中，C為標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上讀取被測組分溶液的濃度(g/L)。

2．4 測定結(jié)果分析比較 從表1檢測結(jié)果可以看出，隨機(jī)選取的6個蜂蜜樣品，利用滴定法測定蜂蜜中還原糖含量，結(jié)果均在60%以上，符合GB 14963蜂蜜標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，如果用液相色譜法測定蜂蜜中果糖和葡萄糖含量，結(jié)果有3個(Y1、Z5、Z6)低于 60%，不符合國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，其他 3 個(Y2、Y3、Y4)雖然符合國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，但整體含量下降。滴定法測得的還原糖含量最低的為62．4%(Z5)，最高的為75．3%(Y4)，而液相色譜法測定的果糖和葡萄糖含量最低的為52．2%(Z5)，最高的為66．0%(Y4)，2種方法測定結(jié)果差異最大的為10．2%，差異最小的為8．8%，液相色譜法比滴定法測出的結(jié)果平均下降了約9．5%。

表1 2種測定方法結(jié)果分析 %

3 分析與討論

蜂蜜的主體成分是糖類物質(zhì)，約占蜂蜜總量的75%，其中葡萄糖和果糖含量最高，占蜂蜜總糖的85% ～95%，其次是蔗糖占蜂蜜總量的1% ～5%，另外還含有少量的麥芽糖、曲二糖、松三糖、棉子糖和糊精等糖類，共達(dá)23種之多，就不同的檢測方法結(jié)果存在較大差異，進(jìn)行以下分析。

滴定法測定蜂蜜中的糖，嚴(yán)格來說測定的是蜂蜜中的還原糖，而不是果糖和葡萄糖純單體。葡萄糖本身具有還原性，果糖在強(qiáng)堿性加熱條件下具有還原性，但是其他同分異構(gòu)糖在強(qiáng)堿性加熱條件下也可能具有還原性。

蜂蜜中的其他糖類，在強(qiáng)堿性加熱條件有可能發(fā)生分解或其他化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生醛基，具備還原性，當(dāng)利用滴定法測定時也被一并檢出。

由于蜂蜜來源的植物種類、地域環(huán)境、蜜蜂品種等不同，其化學(xué)成分、糖類的種類及含量也存在一定的差異。

根據(jù)以上情況，2種不同檢測方法測定蜂蜜中糖的含量存在較大差異，是完全有可能的。

4 結(jié)論與建議

此次研究試驗，由于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)有限，測定的樣品數(shù)量不多，不具備代表性。如要真正驗證蜂蜜中糖類檢測的差異性，完善蜂蜜中糖類的檢測方法，修訂國家標(biāo)準(zhǔn)，還需要收集大量的樣品，進(jìn)行全方位的大量試驗和驗證。但是，筆者發(fā)現(xiàn)的問題如果能引起蜂產(chǎn)品行業(yè)及有關(guān)部門的注意，可在標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行、日常檢測中做進(jìn)一步的研究和探討。

目前大部分蜂產(chǎn)品收購加工企業(yè)及專業(yè)協(xié)會，如果還利用滴定法測定蜂蜜中的還原糖含量，如果還原糖含量在60%～70%，雖然符合國家標(biāo)準(zhǔn)，但到利用液相色譜法測定的檢測機(jī)構(gòu)，測出的結(jié)果有可能會低于60%，不符合國家標(biāo)準(zhǔn)。因此希望蜂產(chǎn)品行業(yè)的同行們密切注意，嚴(yán)格控制。

建議國家相關(guān)檢測研究部門及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)制定部門，在國家標(biāo)準(zhǔn)的制定時，能夠充分考慮基層、一線企業(yè)的實際情況，參考《中國藥典》中同類產(chǎn)品的一些檢測方法，盡可能使標(biāo)準(zhǔn)科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)、簡單、通用、易于操作、便于推廣、成本低廉、普及性強(qiáng)，并能保障食品質(zhì)量的安全可靠。如果一味地追求高、精、深、難或引用國外標(biāo)準(zhǔn)，不考慮我國的實際國情，無疑給企業(yè)、基層一線造成實際困難，如果企業(yè)和國家檢測仲裁機(jī)構(gòu)的檢測結(jié)果不一致，致使企業(yè)無所適從，造成不必要的損失。

［1］衛(wèi)生部．食品安全國家標(biāo)準(zhǔn):蜂蜜:GB 14963 －2011［S］．北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012．

［2］龐國芳，曹彥忠，李子健，等．蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測定方法液相色譜示差折光檢測法:GB/T 18932．22［S］．北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2004．

［3］楊大進(jìn)，常迪，趙馨，等．食品中還原糖的測定:GB/T 5009．7 －2008［S］．北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009．

［4］中華人民共和國浙江省出入境檢驗檢疫局．進(jìn)出口蜂蜜檢驗規(guī)程:SN/T 0852 －2012［S］．北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2013．

［5］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:337．