影響糖化血紅蛋白檢測(cè)的因素

李桂英

近年來(lái)由于全球糖尿病患病率在逐年增高，每年約有1/3的糖尿病患者被漏診，超過(guò)25%的新診斷糖尿病患者，已經(jīng)患有糖尿病的視網(wǎng)膜病或微量白蛋白尿癥，還有很多患者是因?yàn)椴l(fā)癥出現(xiàn)后才發(fā)現(xiàn)糖尿病的，許多糖尿病患者因不能得到及時(shí)診斷而延誤對(duì)疾病的控制，糖尿病已成為世界性的公共衛(wèi)生問(wèn)題。因此早期診斷糖尿病及其高風(fēng)險(xiǎn)者，并對(duì)他們進(jìn)行及時(shí)的干預(yù)和規(guī)范治療，可減少糖尿病發(fā)患者數(shù)，延緩糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展，已成為當(dāng)務(wù)之急。

對(duì)糖化血紅蛋白（HbA1c）檢測(cè)來(lái)說(shuō)，室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)都是取得穩(wěn)定結(jié)果的前提、日常維護(hù)是保證儀器處于正常的必要措施；我們要認(rèn)識(shí)到糖化血紅蛋白（HbA1c）的檢測(cè)項(xiàng)目、方法學(xué)的局限性，了解其影響因素，才能在日常檢測(cè)中時(shí)刻把握住檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量。

在糖化血紅蛋白（HbA1c）檢測(cè)中有多種因素均可造成糖化血紅蛋白（HbA1c）檢測(cè)值的假性升高或降低，這不僅與實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)方法有關(guān)，也與患者狀況和標(biāo)本處理方式等有關(guān)。因此，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程并要求操作人員嚴(yán)格遵守，提高工作人員的質(zhì)量意識(shí)，加強(qiáng)質(zhì)量控制，增強(qiáng)責(zé)任心，對(duì)工作人員進(jìn)行培訓(xùn)指導(dǎo)，減少不必要的影響因素，把檢測(cè)誤差減少到最小。下面筆者將糖化血紅蛋白（HbA1c）檢測(cè)的影響因素總結(jié)了一下。

1標(biāo)本處理方式的影響

1.1抗凝劑的種類 臨床上以EDTA-K2作為測(cè)定糖化血紅蛋白（HbA1c）的標(biāo)準(zhǔn)用管。肝素鋰抗凝的全血使檢測(cè)結(jié)果略有偏高。

1.2標(biāo)本儲(chǔ)存條件 若全血標(biāo)本不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)需將標(biāo)本于 4℃～8℃保存并最好在7 d內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。此時(shí)，糖化血紅蛋白（HbA1c）的檢測(cè)結(jié)果變異率<3%。在37℃ 條件下，未經(jīng)任何處理的全血樣本有效保存時(shí)間均<1 d。

2患者自身因素的影響

2.1貧血患者，影響紅細(xì)胞壽命的疾病均可對(duì)糖化血紅蛋白（HbA1c）的測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響。如溶血性貧血、缺鐵性貧血、大量失血等。溶血性貧血患者的標(biāo)本因其紅細(xì)胞壽命縮短使其糖化血紅蛋白（HbA1c）的測(cè)定值會(huì)"降低"，這將取決于溶血的程度。鐮刀紅細(xì)胞癥和脾切除后患者的標(biāo)本因其紅細(xì)胞生存時(shí)間較長(zhǎng)其糖化血紅蛋白（HbA1c）的測(cè)定值可能會(huì)"過(guò)高"。

2.2部分進(jìn)展迅速的1型糖尿病患者， 糖化血紅蛋白（HbA1c）的水平往往正常或輕度升高，因此，糖化血紅蛋白（HbA1c）的測(cè)定值并不能完全反應(yīng)急速增高的血糖水平。

2.3飲食和藥物，如抗氧化劑（VC和VE）能抑制血紅蛋白（Hb）的糖基化，可造成糖化血紅蛋白（HbA1c）的測(cè)定結(jié)果偏低，服用阿司匹林可使糖化血紅蛋白（HbA1c）的測(cè)定結(jié)果輕微升高等。

2.4某些血紅蛋白亞型，如HbS、HbC、HbF和HbE等血紅蛋白病的存在，會(huì)影響糖化血紅蛋白（HbA1c）的檢測(cè)結(jié)果。

2.5高原地區(qū)居民，由于慢性缺氧造成血紅蛋白（Hb）量的改變，繼而可導(dǎo)致糖化血紅蛋白（HbA1c）的基礎(chǔ)水平與平原地區(qū)存在差異。

2.6年齡和種族 因空腹血糖水平隨年齡增長(zhǎng)略有增高，所以糖化血紅蛋白（HbA1c）的測(cè)定結(jié)果也與年齡呈正相關(guān)，有研究認(rèn)為，30歲后，年齡每增長(zhǎng)10歲， 糖化血紅蛋白（HbA1c）的測(cè)定結(jié)果會(huì)增長(zhǎng)0.1%；白種人的糖化血紅蛋白（HbA1c）的測(cè)定結(jié)果較其他種族都低。

3方法學(xué)的影響

糖化血紅蛋白（HbA1c）的檢測(cè)方法主要有以下幾種。

3.1電荷差異 如離子交換高效液相色譜法（HPLC）和電泳方法等。離子交換HPLC法（如D10）具有檢測(cè)通量高、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性良好的優(yōu)點(diǎn)，但易受血紅蛋白變異體（HbG，HbH，Hb Wayne）的影響 ，對(duì)這些異常血紅蛋白的確定需要使用另外的檢測(cè)方法。而親和層析法特異性強(qiáng)，不受異常血紅蛋白的干擾。但親和層析的測(cè)定結(jié)果偏低，尤其當(dāng) HbF>20%時(shí)，可導(dǎo)致HbA1c值下降1%，甚至更多，可能與HbF的糖發(fā)化速率較HbA更慢有關(guān)。

3.2結(jié)構(gòu)差異 如親和層析色譜法、免疫化學(xué)方法以及酶法等。酶法反應(yīng)靈敏、特異，可使用全自動(dòng)生化儀來(lái)檢測(cè)，不需昂貴的儀器。其與常規(guī)離子交換HPLC法和免疫法有很好的相關(guān)性。但酶法雖有較好的重復(fù)性和準(zhǔn)確度，其在標(biāo)本處理上卻相當(dāng)繁瑣，要吸取下層紅細(xì)胞進(jìn)行溶血處理，手工操作既不能批量進(jìn)行，又相當(dāng)緩慢；溶血液中高濃度的血紅蛋白對(duì)生化儀的沾染不易被清除，易造成對(duì)后續(xù)其它項(xiàng)目檢測(cè)的干擾。儀器生產(chǎn)商不建議在生化儀上進(jìn)行糖化血紅蛋白（HbA1c）的檢測(cè)。免疫比濁法適用于自動(dòng)生化分析儀糖化血紅蛋白（HbA1c）的批量檢測(cè)，但糖化血紅蛋白（HbA1c）的檢測(cè)結(jié)果易受高濃度葡萄糖、甘油三酯和膽紅素的干擾，以及變異血紅蛋白的影響。

3.3 POCT 如親和層析或免疫比濁等方法。目前，離子交換高效液相色譜法（HPLC）法已被美國(guó)國(guó)家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃（NGSP）推薦為參考方法。美國(guó)臨床化學(xué)協(xié)會(huì)、GHb標(biāo)準(zhǔn)化分會(huì)和IFCC HbA1C標(biāo)準(zhǔn)化工作組建議，以糖尿病控制與并發(fā)癥試驗(yàn)（diabetes control and complications trial，DCCT）研究中所"指定的方法"--HPLC方法作為糖化血紅蛋白（HbA1c）檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。

采用ADA 推薦的以DCCT研究中采用的高效液相色譜法（HPLC）為檢測(cè)糖化血紅蛋白（HbA1c）測(cè)定的金標(biāo)準(zhǔn)，高效液相色譜法（HPLC）一直以來(lái)其良好的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性在臨床上得到廣泛的認(rèn)可和應(yīng)用，減少了各實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果差異，其糖化血紅蛋白（HbA1c）測(cè)定的結(jié)果在全球范圍內(nèi)也具有可比性，這更有助于糖尿病診治的國(guó)際交流與合作。

糖化血紅蛋白（HbA1c）的檢測(cè)由于不同實(shí)驗(yàn)室采用不同的方法，因檢測(cè)原理的不同以及各種儀器的分離能力高低的不同，導(dǎo)致檢查結(jié)果差異較大。因此，開展糖化血紅蛋白（HbA1c）檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化工作極為重要，這將直接影響到糖化血紅蛋白（HbA1c）評(píng)估患者平均血糖濃度的準(zhǔn)確性。2011年10月由國(guó)家衛(wèi)生部臨檢中心發(fā)布的《糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指南》中使實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)規(guī)范化有"法"可依，這將對(duì)提高糖化血紅蛋白（HbA1c）測(cè)定的質(zhì)量有一定的推動(dòng)作用。

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編輯/張燕