1 285例血液培養(yǎng)的病原菌分布及耐藥性分析

潘莉娟，楊 靜，歐國(guó)平，徐啟峰，董 劍

(重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 402360)

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·論 著·

1 285例血液培養(yǎng)的病原菌分布及耐藥性分析

潘莉娟，楊 靜，歐國(guó)平，徐啟峰，董 劍△

(重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 402360)

目的 了解大足區(qū)人民醫(yī)院血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本中分離的病原菌分布情況及耐藥性分析，指導(dǎo)臨床對(duì)血流感染的診斷。方法 對(duì)大足區(qū)人民醫(yī)院1 285例血培養(yǎng)標(biāo)本所進(jìn)行的細(xì)菌培養(yǎng)及藥敏結(jié)果檢測(cè)進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果 共檢出陽(yáng)性血培養(yǎng)標(biāo)本55例，菌株57株，其中革蘭陽(yáng)性菌12株、革蘭陰性菌45株，分布占總數(shù)的21.0%和79.0%。革蘭陽(yáng)性菌以金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌為主，對(duì)萬(wàn)古霉素、左氧氟沙星、莫西沙星、環(huán)丙沙星、奎奴普丁/達(dá)福普汀較敏感。革蘭陰性菌以大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌為主，對(duì)亞胺培南、美羅培南、環(huán)丙沙星、頭孢他啶、頭孢吡肟、阿米卡星較敏感。結(jié)論 血培養(yǎng)分離的病原菌以革蘭陰性菌為主，特別是對(duì)大腸埃希菌，抗生素耐藥率普遍偏高，臨床應(yīng)加強(qiáng)對(duì)無(wú)菌體液標(biāo)本的送檢，特別是血液標(biāo)本的送檢，加強(qiáng)對(duì)血流感染的診斷，盡早獲得病原菌診斷和抗生素敏感資料，提高治愈率。

血培養(yǎng)； 病原菌； 耐藥性

血流感染是敗血癥和菌血癥兩者的統(tǒng)稱。敗血癥是由各種病原微生物和毒素侵入血流所引起的血液感染。若侵入血流的細(xì)菌僅短暫入血，能被人體防御機(jī)能所清除，無(wú)明顯毒血癥癥狀時(shí)則稱為菌血癥。敗血癥是一種嚴(yán)重的血液感染性疾病，病情兇險(xiǎn)，病死率高[1]。隨著損傷性手術(shù)的廣泛開(kāi)展及抗生素的普遍使用，血流感染的發(fā)生率持續(xù)上升，不僅延長(zhǎng)住院時(shí)間，也增加患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。血液細(xì)菌培養(yǎng)是血流感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，選擇合適時(shí)機(jī)采集標(biāo)本及多套多部位送檢，提高陽(yáng)性率，對(duì)血流感染的診斷有較好的指導(dǎo)意義。本研究選取2012年11月至2013年6月大足區(qū)人民醫(yī)院血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本中的細(xì)菌分布和對(duì)抗生素的耐藥情況進(jìn)行回顧性分析，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年11月至2013年6月大足區(qū)人民醫(yī)院各科住院的1 285例疑為血流感染患者的血培養(yǎng)標(biāo)本，其中男635例，女430例，抽取靜脈血5～10 mL分別注入需氧及厭氧瓶即刻送檢。兒科住院患者220例，采集靜脈血1～5 mL注入需氧瓶即刻送檢。

1.2 方法 采集合適血量注入血培養(yǎng)瓶后，用BacT/Alert-120型血培養(yǎng)儀進(jìn)行孵育增菌，對(duì)系統(tǒng)報(bào)警提示為陽(yáng)性者立即進(jìn)行涂片、轉(zhuǎn)種，并將涂片結(jié)果電告臨床主管醫(yī)師。對(duì)分離純培養(yǎng)病原菌通過(guò)VITEK2 COMPACT全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)(法國(guó)梅里埃公司)進(jìn)行鑒定和藥敏試驗(yàn)，操作過(guò)程嚴(yán)格按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行，標(biāo)準(zhǔn)菌株為鉛黃腸球菌(ATCC 700327)、嗜麥芽窄食單胞菌(ATCC 17666)和嗜熱鏈球菌(19258)。對(duì)VITEK2 COMPACT全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)提示藥敏檢測(cè)結(jié)果需采用瓊脂擴(kuò)散法(K-B法)進(jìn)行校正的，均采用手工法進(jìn)行復(fù)核，藥敏結(jié)果嚴(yán)格按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)2013版要求進(jìn)行判斷。M-H瓊脂購(gòu)自重慶龐通公司，藥敏紙片購(gòu)自英國(guó)Oxoid公司和杭州天和微生物試劑有限公司[2]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用世界衛(wèi)生組織(WHO)細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)中心推薦的WHONET5.6軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，百分率之間的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 血培養(yǎng)陽(yáng)性率及分離菌的菌種種類和構(gòu)成 1 285份疑似血流感染標(biāo)本共分離陽(yáng)性病原菌57株，血培養(yǎng)陽(yáng)性率為4.4%。其中革蘭陽(yáng)性菌12株，占總分離菌株的21.0%，革蘭陰性菌45株，占總分離菌株的79.0%。革蘭陽(yáng)性菌中以金黃色葡萄球菌為首，占革蘭陽(yáng)性菌的33.3%，其次為肺炎鏈球菌和腸球菌，分別各占25.0%，凝固酶陰性葡萄球菌致病率也逐步上升，達(dá)到16.7%。革蘭陰性菌中以大腸埃希菌為首，占革蘭陰性菌的55.6%，其次為肺炎克雷伯菌，占革蘭陰性菌的33.3%，非發(fā)酵細(xì)菌分離率占革蘭陰性菌的8.8%。見(jiàn)表1。

表1 血培養(yǎng)分離的病原菌分布構(gòu)成比

2.2 主要血培養(yǎng)檢出菌的耐藥情況 根據(jù)藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)分析顯示，所分離致病菌普遍對(duì)抗生素具有較高的耐藥性。在革蘭陽(yáng)性菌中，萬(wàn)古霉素耐藥率最低,未發(fā)現(xiàn)耐萬(wàn)古霉素的金黃色葡萄球菌?？斩?達(dá)福普汀、莫西沙星、左氧氟沙星、環(huán)丙沙星其次，對(duì)其余抗菌藥的耐藥率均大于50%。見(jiàn)表2。

表2 常見(jiàn)革蘭陽(yáng)性菌對(duì)抗生素的耐藥率(%)

在革蘭陰性菌中，對(duì)抗生素敏感性較高依次為美羅培南、亞胺培南、氨曲南、阿米卡星、頭孢吡肟、頭孢他啶、環(huán)丙沙星，對(duì)其余抗菌藥則表現(xiàn)出較高的耐受性。見(jiàn)表3。

表3 常見(jiàn)革蘭陰性菌對(duì)抗生素的耐藥率(%)

3 討 論

敗血癥是由各種病原微生物和毒素侵入血流所引起的血液感染。病情危重，如不準(zhǔn)確及時(shí)治療，預(yù)后較差。細(xì)菌一般不在機(jī)體的循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)繁殖，血液內(nèi)出現(xiàn)細(xì)菌，是細(xì)菌感染灶內(nèi)的細(xì)菌向血液傾注，而機(jī)體一時(shí)不能將其完全清除的結(jié)果。敗血癥也不是一種獨(dú)立的疾病，是許多傳染病或非傳染病中常見(jiàn)的臨床癥狀，也是臨床上一種常見(jiàn)的致死因素。若有接受廣譜抗生素、介入性治療、尿路感染以及各種皮膚癤癰或傷口感染雖經(jīng)抗生素治療但感染未能控制者，均應(yīng)高度懷疑敗血癥。敗血癥的重要檢測(cè)手段為血液細(xì)菌培養(yǎng)，血培養(yǎng)細(xì)菌陽(yáng)性是敗血癥最可靠的診斷依據(jù)。當(dāng)有患者體溫超過(guò)38 ℃或低于36 ℃，白細(xì)胞升高及中性粒細(xì)胞升高，均應(yīng)多套多部位采集血培養(yǎng)送檢，并同時(shí)檢測(cè)降鈣素原，判斷感染程度。

血液細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性分離率國(guó)內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道統(tǒng)計(jì)大多在10%左右[3-5]。統(tǒng)計(jì)本院本階段血培養(yǎng)陽(yáng)性菌株分離率為4.4%，陽(yáng)性率較低，可能的原因?yàn)椴裳獣r(shí)機(jī)選擇不當(dāng)；采血套數(shù)不夠；采血量不足及血液中抗生素對(duì)細(xì)菌的抑制等[6-7]。本階段革蘭陰性桿菌為血流感染致病主要菌群，分離率為79.0%，這與近年來(lái)革蘭陰性桿菌已成為醫(yī)院感染主要病原菌的報(bào)道相符[8-9]。革蘭陰性桿菌為血液感染的主要菌群，說(shuō)明血流感染的優(yōu)勢(shì)菌在自然選擇及本院用三代頭孢作為常規(guī)用藥的干預(yù)下已經(jīng)發(fā)生了改變，革蘭陰性桿菌已經(jīng)代替凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)成為血流感染最主要的病原菌，其中以大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌為主，其最常見(jiàn)的耐藥機(jī)制是由質(zhì)粒介導(dǎo)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)，產(chǎn)ESBLs細(xì)菌是院內(nèi)感染的主要致病菌，這主要與近年來(lái)頭孢類抗生素大量使用有關(guān)[10]。陽(yáng)性球菌以金黃色葡萄球菌為主，與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致。雖然血培養(yǎng)中陽(yáng)性菌所占比例有所上升，但尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)替考拉寧和萬(wàn)古霉素耐藥的菌株。

由于抗生素的廣泛使用，使致病菌的耐藥性變得較為普遍，特別是在革蘭陰性菌中，對(duì)氨芐西林及復(fù)方磺胺甲噁唑的耐藥率高達(dá)50.0%以上。針對(duì)大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs株，對(duì)頭孢他啶、頭孢曲松、哌拉西林、頭孢唑啉、頭孢呋辛表現(xiàn)出較高的耐藥率，對(duì)碳青霉烯類、四代頭孢抗生素耐藥率相對(duì)較低。革蘭陽(yáng)性菌對(duì)常用抗生素的耐藥問(wèn)題亦較嚴(yán)重，對(duì)紅霉素、氨芐西林、苯唑西林的耐藥率相當(dāng)高，至今未發(fā)現(xiàn)對(duì)萬(wàn)古霉素耐藥的菌株。

對(duì)于懷疑真菌性敗血癥，由于酵母樣真菌生長(zhǎng)緩慢，往往忽視了后期血液培養(yǎng)瓶的觀察，造成酵母樣真菌生長(zhǎng)漏檢，故血培養(yǎng)陽(yáng)性率不高。受現(xiàn)階段實(shí)驗(yàn)室條件有限，未開(kāi)展厭氧菌培養(yǎng)，不可避免出現(xiàn)厭氧菌漏檢情況。在以后的工作中，應(yīng)加強(qiáng)真菌和厭氧菌的鑒定。

血液細(xì)菌培養(yǎng)是臨床診斷敗血癥的金標(biāo)準(zhǔn)，在血液中檢出病原微生物對(duì)疾病早期治療、預(yù)后判斷有較高的臨床指導(dǎo)意義。為了提高血培養(yǎng)的陽(yáng)性檢出率，臨床醫(yī)生可以更好地了解患者病情，應(yīng)在抗生素使用前多部位采集，也可在感染局部的附近血管中采集，提高陽(yáng)性率，并嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作，避免正常細(xì)菌污染，降低假陽(yáng)性的發(fā)生，真正做到指導(dǎo)臨床用藥，提升治療效果。

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Analysis on distribution and drug resistance of 1 285 strains of blood culture pathogenic bacteria*PAN

Li-juan，YANGJing，OUGuo-ping，XUQi-feng，DONGJian△

(DepartmentofClinicalLaboratory,DazuDistrictPeople′sHospital,Chongqing402360,China)

Objective To understand the distribution situation and the drug resistance of pathogenic bacteria isolated from blood culture positive specimens in our hospital to guide the clinical diagnosis of blood stream infection.Methods The results in 1 285 cases of blood culture for bacteria and drug susceptibility detection were analyzed retrospectively.Results 55 cases of positive blood culture specimen and 57 strains of bacteria were detected,including 12 strains of Gram-positive bacteria and 45 strains of Gram-negative bacteria,accounting for 21.0% and 79.0% of the total.Gram-positive bacteria were dominated by staphylococcus aureus and streptococcus pneumoniae,and were sensitive to vancomycin,levofloxacin,moxifloxacin,ciprofloxacin and quinupristin/dalfopristin.Gram-negative bacteria mainly were E.coli,Klebsiella pneumoniae and sensitive to imipenem,meropenem,ciprofloxacin,ceflazidime,cefepime and amikacin.Conclusion Blood culture isolated pathogenic bacteria are mainly Gram-negative bacteria,especially for E.coli,the resistance rates to common antibiotics are generally higher,clinic should strengthen the detection of sterile body fluid specimens,especially blood specimen detection,should strengthen the diagnosis of blood stream infection,obtain the pathogen diagnosis and antibiotic sensitive data as soon as possible and improve the cure rate.

blood culture； pathogenic bacteria； drug resistance

重慶市大足區(qū)科學(xué)技術(shù)委員會(huì)基金(DZKJ2013ACC1089)。

潘莉娟，女，檢驗(yàn)師，本科，主要從事臨床微生物檢驗(yàn)相關(guān)研究?！?/p>

，E-mail:dongyjian@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.15.008

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1672-9455(2015)15-2158-03

2015-02-26

2015-04-28)