磷霉素與4種抗菌藥物對泌尿系統(tǒng)分離銅綠假單胞菌的協(xié)同作用研究

黃正谷，蘇世芳

(重慶市公共衛(wèi)生醫(yī)療救治中心檢驗科 400036)

?

·論 著·

磷霉素與4種抗菌藥物對泌尿系統(tǒng)分離銅綠假單胞菌的協(xié)同作用研究

黃正谷，蘇世芳△

(重慶市公共衛(wèi)生醫(yī)療救治中心檢驗科 400036)

目的 研究磷霉素與4種抗菌藥物分別聯(lián)合應(yīng)用對40株臨床分離銅綠假單胞菌的體外抗菌活性。方法 采用常規(guī)培養(yǎng)方法和微生物分析儀對細菌進行分離、鑒定。采用K-B紙片擴散法進行藥敏試驗。采用瓊脂倍比稀釋法和微量棋盤法測定最低抑菌濃度(MIC)，計算部分抑菌濃度指數(shù)(FICI)。結(jié)果 40株銅綠假單胞菌對大多數(shù)抗菌藥物具有耐藥性。磷霉素單獨使用對銅綠假單胞菌具有較好的抗菌活性，耐藥率為37.5%；磷霉素與4種抗菌藥物聯(lián)用后，對銅綠假單胞菌表現(xiàn)為相加和無關(guān)作用，協(xié)同作用較少，未見拮抗作用。結(jié)論 治療銅綠假單胞菌引起的泌尿系統(tǒng)感染，磷霉素仍是一個可供選擇的抗菌藥物。

磷霉素； 銅綠假單胞菌； 尿路感染； 協(xié)同作用

近年來，隨著廣譜頭孢菌素類、碳青霉烯類和喹諾酮類等抗菌藥物在醫(yī)院臨床上的廣泛應(yīng)用，致使高度耐藥的銅綠假單胞菌在泌尿系統(tǒng)感染中的比例不斷增高[1]，給臨床治療帶來極大困難。為探索磷霉素對泌尿感染銅綠假單胞菌治療的新方案，本研究擬以本院泌尿系統(tǒng)分離的銅綠假單胞菌為研究對象，分別檢測磷霉素單獨或與其他抗菌藥物協(xié)同對銅綠假單胞菌的抗菌活性，為磷霉素在臨床泌尿感染的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源 40株非重復(fù)銅綠假單胞菌分離自本院2012～2013年的尿液標(biāo)本。質(zhì)控菌株銅綠假單胞菌(ATCC 27853)由衛(wèi)生部臨床檢驗中心提供。

1.1.2 培養(yǎng)基 M-H瓊脂及肉湯培養(yǎng)基(Oxoid)購于重慶龐通醫(yī)療器械有限公司。

1.1.3 抗菌藥物 所有抗菌藥物紙片為英國Oxoid產(chǎn)品；磷霉素、6-磷酸葡萄糖購于Sigma公司；亞胺培南(USP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))、左氧氟沙星(LEV)、環(huán)丙沙星(CIP)、慶大霉素(GEN)為中國藥品生物制品檢定所產(chǎn)品。

1.1.4 儀器 VITEK-2 COMPACT全自動微生物分析系統(tǒng)和ATB微生物檢測系統(tǒng)購于法國生物梅里埃公司。

1.2 方法

1.2.1 細菌培養(yǎng)和鑒定 細菌培養(yǎng)和鑒定按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》的常規(guī)技術(shù)操作及API細菌生化鑒定條件進行鑒定，鑒定系統(tǒng)為法國生物梅里埃公司API和VITEK-2系統(tǒng)。

1.2.2 藥敏試驗 藥敏采用K-B紙片擴散法測抑菌圈直徑，用VITEK-2測最低抑菌濃度(MIC)。磷霉素、亞胺培南、頭孢他啶、左氧氟沙星和慶大霉素藥敏試驗采用瓊脂平板倍比稀釋法。藥敏結(jié)果判定依據(jù)美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(CLSI)2013年標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.3 藥物協(xié)同試驗 磷霉素、亞胺培南、頭孢他啶、左氧氟沙星和慶大霉素分別以滅菌MH肉湯稀釋，使抗菌藥物的濃度分別為8×MIC、4×MIC、2×MIC、1×MIC、1/2×MIC、1/4×MIC、1/8×MIC。將配好的不同濃度的兩種協(xié)同作用藥物按棋盤法設(shè)計，兩兩組合加入96孔無菌微孔板中，每種抗菌藥物取50 μL分別排列在96孔板的行與列上，然后再將濃度為1×106CFU/mL的菌液100 μL加入孔中，37 ℃培養(yǎng)過夜。結(jié)果判斷以完全無細菌生長的最低藥物濃度為MIC。

1.2.4 部分抑菌濃度指數(shù)(FICI)指數(shù)計算與判讀標(biāo)準(zhǔn) 采用 FICI分析藥物的協(xié)同作用：FICI=A藥聯(lián)合時的MIC/A藥單用時的MIC+B藥聯(lián)合時的MIC/B藥單用時的MIC。判定標(biāo)準(zhǔn)：FICI≤0.5為協(xié)同作用；0.52為拮抗作用。

2 結(jié) 果

2.1 臨床分離銅綠假單胞菌的藥物敏感性 40株銅綠假單胞菌對亞胺培南等15種藥敏紙片的藥敏結(jié)果如表1所示。除抗菌藥物阿米卡星、環(huán)丙沙星、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢他啶和妥布霉素的耐藥率低于30%，對其他抗菌藥物均具有較高的耐藥性。此外，亞胺培南耐藥的銅綠假單胞菌與亞胺培南敏感的菌株相比，對抗菌藥物具有更高的耐藥性。

表1 亞胺培南耐藥和敏感銅綠假單胞菌的耐藥分布[n(%)]

2.2 聯(lián)合抑菌試驗 尿液分離的銅綠假單胞菌對磷霉素的耐藥率為37.5%，亞胺培南耐藥和銅綠假單胞菌對磷霉素的敏感性差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。磷霉素與4種抗菌藥物分別聯(lián)合應(yīng)用對40株銅綠假單胞菌的體外抗菌活性如表2所示。結(jié)果表明，磷霉素與4種抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用，對銅綠假單胞菌多數(shù)呈相加和無關(guān)作用，協(xié)同作用較少，未見拮抗作用。

表2 FICI指數(shù)分布百分率(%)

3 討 論

尿路感染是臨床常見的感染性疾病之一，革蘭陰性菌是尿路感染的主要病原菌。而今年來，由于廣譜抗菌藥物的廣泛應(yīng)用及復(fù)雜尿路感染患者的增多，銅綠假單胞菌的分離率逐年增高，同時銅綠假單胞菌的耐藥性給臨床治療帶來很大的困難。本研究發(fā)現(xiàn)臨床分離銅綠假單胞菌具有較高的耐藥性，尿液分離的銅綠假單胞菌對磷霉素的耐藥率高達37.5%,比國內(nèi)外的報道略高[2-3]。

革蘭陽性菌和革蘭陰性菌都具有細胞壁結(jié)構(gòu)，細胞壁的主要成分是肽聚糖，在細胞壁合成的初期，需要磷酸烯醇丙酮酸參與合成二磷酸尿嘧啶-N-乙酰葡糖胺丙酮酸鹽[4]，磷霉素作為一種較早發(fā)現(xiàn)的天然抗菌藥物，其分子結(jié)構(gòu)與磷酸烯醇丙酮酸結(jié)構(gòu)相似，其與細菌競爭同一轉(zhuǎn)移酶，使細菌的細胞壁合成受到阻礙從而導(dǎo)致細菌死亡，因此對革蘭陽性菌和革蘭陰性菌都具有較強的抗菌作用[5]。

有研究顯示，亞胺培南耐藥菌株對其他抗菌藥物均具有較高的耐藥性，提示針對亞胺培南耐藥菌株應(yīng)根據(jù)藥敏結(jié)果選擇抗菌藥物。磷霉素對銅綠假單胞菌具有較高的敏感性，并且亞胺培南耐藥和敏感的菌株對磷霉素的藥物敏感性無明顯差異，說明對于多重耐藥銅綠假單胞菌，磷霉素依然是一個可供選擇的抗菌藥物。國外研究發(fā)現(xiàn)磷霉素對銅綠假單胞菌具有較好的抗菌活性，而國內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)磷霉素對銅綠假單胞菌具有較高的耐藥性，有研究顯示銅綠假單胞菌的耐藥率高達71%[4]，本院銅綠假單胞菌對磷霉素具有較高的敏感性可能是因為本院臨床上已經(jīng)有5年未使用磷霉素。

在本研究中，磷霉素與其他4種抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用只對少部分菌株具有協(xié)同作用，而對大部分菌株只有相加和無關(guān)作用。協(xié)同作用比例遠低于國內(nèi)外的報道[6-7]，部分研究報道慶大霉素與磷霉素協(xié)同作用可達到80%[8]。此研究差異可能是由于不同地區(qū)流行的菌株類型不同。

磷霉素是廣譜抗菌藥物，雖然本研究顯示磷霉素與其他抗菌藥物聯(lián)用只對少部分銅綠假單胞菌具有協(xié)同作用，但是磷霉素單獨使用對銅綠假單胞菌仍具有較高的抗菌活性，并且對泌尿系統(tǒng)常見的腸桿菌科細菌具有較高的活性并與其它抗菌藥物具有協(xié)同作用[9]，因此磷霉素是治療泌尿系統(tǒng)感染的藥物之一。

[1]Venier AG,Lavigne T,Jarno P,et al.Nosocomial urinary tract infection in the intensive care unit:when should Pseudomonas aeruginosa be suspected? Experience of the French National surveillance of nosocomial infections in the intensive care unit,Rea-Raisin[J].Clin Microbiol Infect,2012,18(1):13-15.

[2]燕成嶺，樊淑珍．泌尿系感染病原菌分布及耐藥性分析[J]．內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，33(6)：459-462．

[3]Karlowsky JA,Lagacé-wiens PR,Simner PJ,et al.Antimicrobial resistance in urinary tract pathogens in Canada from 2007 to 2009:CANWARD surveillance study[J].Antimicrob Agents Chemother,2011,55(7):3169-3175.

[4]尹雄章，杜光，孫明輝．磷霉素的作用機制及臨床應(yīng)用[J]．醫(yī)藥導(dǎo)報，2011，30(12)：1608-1613．

[5]湯韌，高艷，范燕．97例注射用磷霉素鈉不良反應(yīng)文獻分析[J]．中國藥物警戒，2013，10(9)：560-562．

[6]聶大平，馬榮，劉永娥．磷霉素對革蘭陰性菌的體外抗菌活性研究[J]．大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2010，32(5)：577-579．

[7]Kastoris AC,Rafailidis PI,Vouloumanou EK,et al.Synergy of fosfomycin with other antibiotics for Gram-positive and Gram-negative bacteria[J].Eur J Clin Pharmacol,2010,66(4):359-368.

[8]范燕，裴斐，梁蓓蓓，等．磷霉素與五種氨基糖苷類抗菌藥物對20株銅綠假單胞菌的聯(lián)合藥敏研究[J]．中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測，2007，4(1)：47-49．

Study on synergy of fosfomycin combined with 4 kinds of antimicrobial agents against Pseudomonas aeruginosa strains isolated from urinary systemHUANG

Zheng-gu,SUShi-fang△

(DepartmentofClinicalLaboratory,ChongqingMunicipalPublicHealthMedicalCenter,Chongqing400036,China)

Objective To study the in vitro antibacterial activity of fosfomycin combined with other 4 kinds of antimicrobial agents against 40 clinically isolated strains of Pseudomonas aeruginosa.Methods The bacteria were isolated and identified by the conventional culture and the microbiological analyzer.The drug sensitive test was performed by using Kirby-Bauer disk diffusion test and the minimal inhibitory concentration(MIC) was examined by using the agar double dilution test and the micrdilution checkerboard technique.The fractional inhibitory concentration index(FICI) was calculated.Results A total of 40 strains of Pseudomonas aeruginosa were resistant to most of antibacterial agents.The fosfomycin exclusive use had a good antibacterial activity to Pseudomonas aeruginosa and the resistance rate was 37.5%;the combination use of fosfomycin with 4 kinds of antimicrobial agent showed the addictive action and independent action,little synergic effect and no antagonism.Conclusion Fosfomycin is still a choice of antibacterial drugs to treat the urinary tract infection induced by Pseudomonas aeruginosa.

fosfomycin; Pseudomonas aeruginosa; urinary tract infection; synergy

黃正谷,男,本科,主管檢驗師,研究方向為臨床微生物。△

，E-mail：243370143@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.13.013

A

1672-9455(2015)13-1850-02

2015-01-25

2015-03-18)