酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀在麻疹病毒IgM抗體檢測中的應(yīng)用

姜波濤

(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染科化驗(yàn)室，哈爾濱 150001)

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·臨床研究·

酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀在麻疹病毒IgM抗體檢測中的應(yīng)用

姜波濤

(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院感染科化驗(yàn)室，哈爾濱 150001)

目的 探討酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀在麻疹病毒IgM抗體檢測中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選取2013年6～12月哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒科疑似麻疹病例血清238份，麻疹病毒IgM抗體陽性血清1份，在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中分別采用常規(guī)溫育法(常規(guī)法)和酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀法(加速法)進(jìn)行麻疹病毒IgM抗體的檢測，比較兩種方法在檢測麻疹病毒IgM抗體的重復(fù)性、靈敏度及特異性。結(jié)果 加速法的變異系數(shù)(CV)為2.86%～9.52%，靈敏度為97.40%，特異度為100.00%，均符合試劑盒標(biāo)準(zhǔn)；且加速法和常規(guī)法對麻疹病毒IgM的定量檢測結(jié)果呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀在麻疹病毒IgM抗體檢測中，各項(xiàng)指標(biāo)均符合試劑盒要求，可應(yīng)用于臨床檢測。

酶聯(lián)免疫反應(yīng)； 酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀； 麻疹病毒； IgM

麻疹是由麻疹病毒引起的一種以發(fā)熱、呼吸道其他癥狀和全身斑丘疹為特征的急性病毒性傳染病[1]。目前最常用于檢測麻疹病毒IgM抗體的方法是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，該方法成本低廉，操作簡單，但整個檢測過程需耗時3 h。國內(nèi)已有報(bào)道，ELISA加速儀在檢測乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)中可以有效縮短檢測時間。本研究將ELISA加速儀用于檢測麻疹病毒IgM抗體，以探討其在麻疹病毒IgM抗體檢測中的作用。現(xiàn)將相關(guān)研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 2013年6～12月本院兒科疑似麻疹病例血清238份，麻疹病毒IgM抗體陽性血清1份(由哈爾濱市疾病預(yù)防控制中心提供)。

1.2 儀器與試劑 ELISA加速儀(四川諾亞醫(yī)療科技有限責(zé)任公司研制，型號：NY/MMJ)、酶標(biāo)儀(奧地利安圖斯)、37 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)、全自動立式洗板機(jī)(鄭州基波新科技有限公司)。所有試劑均購自珠海海泰生物制藥有限公司。

1.3 方法

1.3.1 檢測方法 具體操作方法嚴(yán)格按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[2]及儀器與試劑盒使用說明書進(jìn)行。使用常規(guī)溫育法(簡稱常規(guī)法)，37 ℃恒溫箱第1步孵育60 min、第2步孵育60 min，顯色30 min；而使用ELISA加速儀(簡稱加速法)，第1步孵育30 min、第2步孵育30 min，顯色15 min，其余步驟及操作完全一致。所有標(biāo)本均經(jīng)實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測。

1.3.2 重復(fù)性試驗(yàn) 將麻疹病毒IgM抗體陽性血清倍比稀釋,使用同一批號麻疹病毒IgM抗體檢測試劑盒,分別用加速法和常規(guī)法對樣本進(jìn)行檢測，每份樣本檢測20次。

1.3.3 相關(guān)性分析 在疑似麻疹病例的血清中隨機(jī)抽取56份標(biāo)本，分別用常規(guī)法和加速法進(jìn)行檢測，結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 經(jīng)倍比稀釋的麻疹病毒IgM抗體陽性血清分別采用加速法和常規(guī)法進(jìn)行檢測，定性結(jié)果相同；在各不同稀釋倍數(shù)下，兩種方法所測血清麻疹病毒IgM抗體的樣本/臨床值比值(S/CO值)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；兩種方法的變異系數(shù)(CV)均小于15%，符合試劑盒的規(guī)定。見表1。

表1 不同稀釋倍數(shù)麻疹病毒IgM抗體陽性血清 兩種方法檢測結(jié)果

注：+表示陽性，-表示陰性。

2.2 相關(guān)性分析結(jié)果 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，加速法和常規(guī)法對麻疹病毒IgM的檢測結(jié)果呈正相關(guān)(回歸方程為Y=1.016X-0.11，P<0.05)。見圖1。

圖1 兩種方法檢測麻疹病毒IgM相關(guān)性分析

2.3 靈敏度和特異度 經(jīng)參考法實(shí)時熒光定量PCR檢測，疑似麻疹患者的238份血清中，192份為陽性，列為實(shí)驗(yàn)組；46份為陰性，列為對照組。實(shí)驗(yàn)組和對照組均采用常規(guī)法和加速法檢測麻疹病毒IgM抗體，加速法和常規(guī)法的靈敏度分別為97.40%、96.35%，兩種方法的特異度均為100.00%，兩種方法的靈敏度與特異度比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 兩種方法的檢測靈敏度與特異度

注：+表示陽性，-表示陰性。

3 討 論

麻疹是一種嚴(yán)重危害人類健康的傳染病,據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)告，每年約有4 400萬麻疹患者,并有100萬兒童死于麻疹。1954年Enders與Peebles應(yīng)用人胚腎細(xì)胞培養(yǎng)麻疹病毒獲得成功之后，多位學(xué)者開始研制麻疹疫苗以控制麻疹的傳染[3]。我國于1965年開始使用麻疹減毒活疫苗,可靠地保護(hù)了絕大多數(shù)9～12個月乃至年齡更大的兒童[4]。然而，由于麻疹疫苗的廣泛使用，接觸野毒株的機(jī)會少，體內(nèi)抗體水平逐年減少，最終可導(dǎo)致不能完全抵御麻疹病毒的侵襲，出現(xiàn)不典型的臨床表現(xiàn)[5]。于是有效的檢測方法對麻疹的診斷和及時的治療起著重要作用。

麻疹病毒檢測的最直接方法是病毒分離，然而其操作過于復(fù)雜，且對標(biāo)本有嚴(yán)格的要求，難以在醫(yī)院大面積地推廣。分子生物學(xué)手段檢測麻疹病毒核酸的方法也開始運(yùn)用于實(shí)驗(yàn)室診斷，但是多數(shù)實(shí)時熒光定量PCR檢測麻疹病毒RNA時有一定的概率出現(xiàn)假陽性和假陰性[6]，且成本較高。目前，臨床主要應(yīng)用ELISA檢測患者血清中麻疹特異性抗體IgM，該方法敏感性和特異性均較好，但患者血清IgM的陽性率與取血時間有關(guān)[7]。一般患者在出現(xiàn)皮疹后3 d至4周內(nèi)取血，麻疹病毒特異性IgM抗體的陽性率達(dá)最高。

ELISA加速儀是基于傳統(tǒng)的孵育方法設(shè)計(jì)出來的。它綜合采用了先進(jìn)的正溫度系數(shù)(PTC)熱敏陶瓷加熱熱風(fēng)恒溫技術(shù)，利用高頻電磁波對生物分子的生化作用補(bǔ)充能量，并將反應(yīng)試劑進(jìn)行內(nèi)置振蕩，從而穩(wěn)定地加速了反應(yīng)過程并減少了人工操作程序和時間。常規(guī)ELISA因簡單、易于操作、且準(zhǔn)確度高而備受青睞，然而其耗時過長。ELISA加速儀很好地克服了這一缺陷[8]，在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的前提下將整個實(shí)驗(yàn)時間約縮短了一半，有效地提高了檢測效率。

本研究結(jié)果顯示，在重復(fù)性方面，兩種方法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；相關(guān)分析結(jié)果顯示，兩種方法對麻疹病毒IgM的檢測結(jié)果呈正相關(guān)(P<0.05)；兩種方法均具有較高的靈敏度與特異度，加速法的靈敏度和特異度分別為97.40%、100.00%，常規(guī)法分別為96.35%和100.00%，兩種方法的靈敏度和特異度比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。表明采用加速法對麻疹病毒IgM進(jìn)行檢測不會影響檢測結(jié)果，同時可以減少檢測時間，提高檢測效率。

綜上所述，將ELISA加速儀運(yùn)用于麻疹病毒IgM的檢測不會對檢測結(jié)果造成影響，同時可以大幅度地縮短檢測時間，提高檢測效率，值得在臨床中推廣應(yīng)用。

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[4]Himan AR.中國麻疹控制策略的建議[J]．中國計(jì)劃免疫，2002，8(2)：111-115．

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[6]楊貴清，卓菲，劉衛(wèi)民，等．基于M基因構(gòu)建的麻疹病毒實(shí)時熒光PCR檢測技術(shù)[J]．中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，22 (8)：1843-1847．

[7]李軼平．麻疹病毒檢測技術(shù)進(jìn)展[J]．中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21(6)：1587-1588．

[8]耿珍，劉銘．酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀在巨細(xì)胞病毒IgG 抗體檢測中的應(yīng)用[J]．中國計(jì)劃生育學(xué)雜志，2013，21(5)：340-342．

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.044

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1672-9455(2015)05-0684-02

2014-09-16

2014-11-28)