慢性乙型肝炎患者IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)基因多態(tài)性分析

萬鴻君，彭 芳(武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，武漢 430060)

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慢性乙型肝炎患者IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)基因多態(tài)性分析

萬鴻君，彭 芳(武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，武漢 430060)

目的 探討白細(xì)胞介素-1受體拮抗劑基因(IL-1RN)第2號(hào)外顯子+8006T/C位點(diǎn)基因多態(tài)性在慢性乙型肝炎患者中的分布及其相關(guān)性。方法 采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性的分析方法，對(duì)450例慢性乙型肝炎患者和420例對(duì)照者IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)基因多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算并分析其等位基因和基因型頻率。結(jié)果 觀察組和對(duì)照組IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)基因型的分布最常見為TT型，TC型次之，CC型則較為罕見；在不同年齡組、不同性別間其分布比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；觀察組C型等位基因及TC基因型頻率明顯低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論 IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)等位基因及基因型的分布不存在年齡和性別間的區(qū)別，但與慢性乙型肝炎存在相關(guān)性，在乙型肝炎病毒感染中，C型等位基因可能具有保護(hù)作用。

白細(xì)胞介素-1受體拮抗劑； 基因； 多態(tài)性； 慢性乙型肝炎

白細(xì)胞介素-1受體拮抗劑(IL-1Ra)基因(IL-1RN)2號(hào)外顯子存在一個(gè)+8006T/C位點(diǎn)基因多態(tài)性，由T→C轉(zhuǎn)換所引起，與IL-1Ra的表達(dá)相關(guān)，而IL-1Ra可特異性地抑制IL-1引起的炎性反應(yīng)，是一種重要的內(nèi)源抗炎因子，因此，該多態(tài)性可能與疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[1-2]，但與慢性乙型肝炎是否相關(guān)目前尚不清楚。本文觀察和分析了IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)基因多態(tài)性在慢性乙型肝炎患者中的分布，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院門診與住院部慢性乙型肝炎患者共450例為觀察組，其中男250例，女200例，年齡18～82歲，平均年齡(43.1±13.5)歲，所有病例均根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷[3]。選擇同期420例健康體檢者為對(duì)照組，其中男230例，女190例，年齡18～83歲，平均年齡(44.6±14.2)歲。所有研究對(duì)象均為無血緣關(guān)系的漢族人群，排除其他病毒性肝炎，并排除內(nèi)分泌、肝臟、腎臟和心腦血管疾病，血常規(guī)及生化指標(biāo)均在參考范圍內(nèi)。

1.2 儀器與試劑 主要儀器為美國(guó)PE公司 GeneAmp PCR System 2700 擴(kuò)增儀，法國(guó)VL自動(dòng)凝膠成像及分析系統(tǒng)，PCR試劑及Alu 1內(nèi)切酶為Promega產(chǎn)品，引物由大連寶生物工程有限公司合成。

1.3 方法 采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性的分析方法進(jìn)行。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[4]設(shè)計(jì)一對(duì)引物，P1：5′-TTC TAT CTG AGG AAC AAC CAA CTA GTA GC-3′，P2：5′-AGG ATT AGG ACA TTG CAC CTA G-3′，擴(kuò)增IL-1RN第2號(hào)外顯子區(qū)(7 977～8 150)的片段。模板DNA的制備及IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)基因多態(tài)性的檢測(cè)與分析參照相關(guān)文獻(xiàn)[5]進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 研究對(duì)象IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)等位基因及基因型頻率用頻率計(jì)數(shù)法計(jì)算，并用Hardy-Weinberg定律進(jìn)行遺傳平衡分析。研究對(duì)象等位基因及基因型頻率用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)基因型檢測(cè)結(jié)果 用限制性內(nèi)切酶Alu 1酶切擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)電泳后根據(jù)特異性電泳條帶可檢測(cè)出三種基因型：即TT基因型有1條帶(146 bp)，TC基因型有2條帶(174 bp和146 bp)，而CC基因型有1條帶(174 bp)，見圖1。

注:1為CC基因型；2為TC基因型；3為TT基因型；M為pGEM3Zf(+)DNA/Hae分子量標(biāo)志物。

2.2 不同性別間IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)基因多態(tài)性分析 研究對(duì)象IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)等位基因及基因型頻率經(jīng)χ2檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，表明具有群體代表性。研究人群中，IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)等位基因的分布以等位基因T為最常見，而等位基因C次之；IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)基因型以TT型最為多見，其次為TC型，CC型較罕見。觀察組TC基因型及C等位基因頻率明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.20，χ2=11.98，P<0.01)；觀察組及對(duì)照組在本組不同性別間基因型和等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.07，χ2=0.04；χ2=0.02，χ2=0.02；P>0.05)，見表1。

2.3 不同年齡間IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)多態(tài)性的分布 IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)等位基因及基因型分布在本組不同年齡組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.56，χ2=1.17，χ2=0.64，χ2=0.58；P>0.05)。但觀察組TC基因型及C等位基因頻率明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.31，χ2=10.26，P<0.01)，見表2。

表1 IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)多態(tài)性在不同性別間的比[n(%)]

注：與對(duì)照組比較，aP<0.01。

表2 IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)多態(tài)性在不同年齡組間的比較[n(%)]

注：與對(duì)照組比較，aP<0.01。

3 討 論

IL-1家族中唯一的內(nèi)源性拮抗劑為IL-1Ra，在疾病的發(fā)生發(fā)展過程中可能起著重要作用，其機(jī)理可能是與IL-1競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合IL-1受體而有效地拮抗IL-1所引起的炎性反應(yīng)[6]。IL-1RN(+8006T/C)位點(diǎn)基因多態(tài)性目前在IL-1家族中研究較少。有研究表明，IL-1RN第2號(hào)內(nèi)含子可變數(shù)串聯(lián)重復(fù)多態(tài)性的等位基因Ⅱ(IL-1RN*Ⅱ)與IL-1RN(+8006T/C)位點(diǎn)的等位基因C存在緊密連鎖[4]，而前者與IL-1Ra的表達(dá)緊密相關(guān)[7]，因此，IL-1RN(+8006T/C)位點(diǎn)的等位基因C可能與疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其機(jī)理是通過與IL-1RN*Ⅱ的緊密連鎖或直接調(diào)控IL-1Ra的表達(dá)。

慢性乙型肝炎是最主要的慢性病毒性疾病之一，在該病的病程中，遺傳因素可能起著重要作用。近年來，乙型肝炎病毒易感性、治療及預(yù)后等與細(xì)胞因子及其基因多態(tài)性已受到廣泛關(guān)注[8-11]。有研究發(fā)現(xiàn)，乙型肝炎病毒感染后果與腫瘤壞死因子基因多態(tài)性有關(guān)[8]。然而，目前關(guān)于慢性乙型肝炎病程與IL-1RN(T+8006C)位點(diǎn)基因多態(tài)性是否相關(guān)尚不清楚。

本研究發(fā)現(xiàn)，在慢性乙型肝炎患者和對(duì)照人群中，IL-1RN(+8006T/C)位點(diǎn)可檢測(cè)出TT、TC和CC三種基因型，其中等位基因T發(fā)生頻率最高，而等位基因C發(fā)生頻率較低。在不同性別和不同年齡組之間，IL-1RN(+8006T/C)位點(diǎn)基因型和等位基因型的分布比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明該位點(diǎn)堿基突變不存在性別和年齡之間的區(qū)別。觀察組C等位基因及TC基因型頻率明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，表明慢性乙型肝炎病程與該位點(diǎn)基因多態(tài)性存在相關(guān)性。據(jù)此推測(cè)，攜帶等位基因C的個(gè)體體內(nèi)IL-1的活性可能較不攜帶等位基因C者強(qiáng)，原因是其產(chǎn)生IL-1Ra的能力較低所致，而IL-1活性增強(qiáng)可進(jìn)而導(dǎo)致IL-1β的分泌增強(qiáng)，刺激機(jī)體產(chǎn)生腫瘤壞死因子、IL-2和IL-6，這些細(xì)胞因子可使中性粒細(xì)胞的吞噬作用得到進(jìn)一步激活，促使機(jī)體清除感染病毒和其形成的免疫復(fù)合物。

總之，IL-1RN(+8006T/C)位點(diǎn)等位基因及基因型的分布不存在年齡、性別間的區(qū)別，但與慢性乙型肝炎密切相關(guān)，C型等位基因可能在個(gè)體預(yù)防乙型肝炎病毒感染中具有保護(hù)作用，其確切機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

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Analysis of gene polymorphism at the position IL-1RN(T+8006C) in patients with chronic hepatitis B

WANHong-jun，PENGFang

(DepartmentofClinicalLaboratory，RenminHospitalofWuhanUniversity，Wuhan，Hubei430060,China)

Objective To investigate the distribution and correlation of gene polymorphism in the second exon of interleukin-1 receptor antagonist gene at position +8006[IL-1RN(T+8006C)] in patients with chronic hepatitis B.Methods The IL-1RN(T+8006C) polymorphism was detected by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphisms methods in 450 patients with chronic hepatitis B(observation group) and 420 healthy persons(control group)，then the genotype and allele frequencies were calculated and analyzed.Results In the observation group and control group，the TT genotype was the most frequent，then the TC genotype，and CC genotype was rare.The distribution of genotypes and allele was no different among different gender and age groups(P>0.05).The frequencies of TC genotype and C allele were lower in patients with chronic hepatitis B than that of the control group(P<0.01).Conclusion The distribution of IL-1RN(T+8006C) genotypes and allele were no difference among different gender and age groups，but it has correlation with chronic hepatitis B.Allele C might be a protect factor against hepatitis B virus infection.

interleukin-1 receptor antagonist; gene; polymorphism; chronic hepatitis B

萬鴻君，男，博士，副主任技師，主要從事免疫學(xué)研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.10.021

A

1672-9455(2015)10-1389-02

2014-11-05

2015-01-15)