A205B亞型伴抗-A1抗體致配血不合1例

董 磊，李雙玉，李立新，安仕萍(天津市血液中心 300110)

?

·案例分析·

A205B亞型伴抗-A1抗體致配血不合1例

董 磊，李雙玉，李立新，安仕萍(天津市血液中心 300110)

A205B亞型； 紅細(xì)胞血型； 聚合酶鏈反應(yīng)； 安全輸血

輸血已成為臨床治療疾病的重要手段,特別適用于急慢性出血性疾病、外傷出血等疾病的治療。輸血具有風(fēng)險(xiǎn)性，ABO錯(cuò)型輸注會(huì)引起嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)，所以輸血前進(jìn)行正確的ABO血型定型是保證臨床輸血安全的重要手段[1]。作者在工作中發(fā)現(xiàn)1例交叉配血不合的患者血液標(biāo)本，經(jīng)血清學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)其血型正反定型不符合一般的血型表型規(guī)律。因此采用聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物法(PCR-SSP)基因分型技術(shù)及血清學(xué)方法對該血液標(biāo)本ABO血型進(jìn)行了正確的鑒定,有效地指導(dǎo)了臨床輸血?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 患者,女,62歲,2014年1月因子宮癌入住本市某醫(yī)院,患者血紅蛋白(Hb)42 g/L，申請輸血。醫(yī)院發(fā)現(xiàn)交叉配血不合，主側(cè)出現(xiàn)弱凝集，送至本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測。經(jīng)詢問醫(yī)院及患者家屬得知，該患者在40 d前曾輸注AB型懸浮紅細(xì)胞4 U。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 血清學(xué)檢查 正定型單克隆抗-A、抗-B、抗-AB購自上海血液生物制品公司(批號為20130612)；反定型A1細(xì)胞、B細(xì)胞、O細(xì)胞購自上海血液生物制品公司(批號為2014013003)；抗A1購自上海血液生物醫(yī)藥有限公司(批號為20131101)；抗-H購自上海血液生物醫(yī)藥有限公司(批號為20130922)；抗-D購自Bio-Rad公司(批號為2246170-00)；微柱凝膠配血卡購自Bio-Rad公司(批號為50531.83.07)；抗體篩查細(xì)胞購自 Sanquin公司(批號為8000197754)；DTS-6B離心機(jī)購自北京時(shí)代北利公司；ID-Incubator 37 SⅠ孵育器購自DiaMed公司；ID-Centrifuge 12 SⅡ離心機(jī)購自DiaMed公司。

1.2.2 序列特異性引物基因分型 DNA提取試劑盒購自北京天根生化科技有限公司(批號為M2023)；人類ABO血型-A亞型基因分型檢測試劑盒購自天津秀鵬生物技術(shù)開發(fā)有限公司(批號為201312007)；人類ABO血型基因檢測試劑盒購自天津秀鵬生物技術(shù)開發(fā)有限公司(批號為201318001)。

1.2.3 DNA電泳 DNA Mark DL2000 TaKaRa購自大連寶生物公司(貨號為D501A)。

1.3 方法

1.3.1 ABO血型正反定型、Rh血型鑒定、吸收放散試驗(yàn)效價(jià)測定、抗體篩查均嚴(yán)格按照文獻(xiàn)[2]方法進(jìn)行操作。

1.3.2 基因組DNA提取及血型基因分型嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書提供的方法操作。PCR擴(kuò)增體系為20 μL，循環(huán)參數(shù)為96 ℃ 2 min；96 ℃ 20 s，68 ℃ 60 s，5個(gè)循環(huán)；96 ℃ 20 s，65 ℃ 45 s，72 ℃ 30 s，10個(gè)循環(huán)； 96 ℃ 20 s，62 ℃ 45 s，72 ℃ 30 s，15個(gè)循環(huán)；72 ℃ 1 min。

1.3.3 DNA電泳 提取10 μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠上以220 V電壓電泳30 min，在紫外燈下照相并觀察電泳結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1 血清學(xué)鑒定結(jié)果 ABO血型鑒定結(jié)果(表1)顯示患者血型正定型為非正常AB型，有可能為亞型；反定型A1細(xì)胞有弱凝集，提示患者血清中含有抗-A1抗體；RhD 陽性。

表1 患者血型鑒定結(jié)果

注：+表示陽性，-表示陰性。

2.2 抗體篩查試驗(yàn) 患者血清與(Ⅰ號、Ⅱ號和Ⅲ號)抗篩細(xì)胞在鹽水介質(zhì)和卡式凝膠中均不反應(yīng)，未檢出不規(guī)則抗體。

2.3 吸收放散試驗(yàn)及效價(jià)測定 將患者紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌5次，取壓積紅細(xì)胞分別與抗-A、抗-B血清等體積混勻，放置在4 ℃冰箱吸收1 h，每15分鐘混勻1次。抗-A效價(jià)由1∶128降為1∶64，抗-B效價(jià)由1∶128降為0。再將吸收后的紅細(xì)胞加等體積生理鹽水，放置在56 ℃水浴箱中，每20秒混勻1次，放散10 min。檢測放散液中抗-A效價(jià)為1∶8，抗B效價(jià)為1∶2。試驗(yàn)同時(shí)以正常AB型紅細(xì)胞作對照。試驗(yàn)結(jié)果顯示患者紅細(xì)胞A抗原吸收力弱，放散力強(qiáng)，符合ABO亞型的基本特征。取患者血清與A1紅細(xì)胞等體積混合，放置在4 ℃冰箱吸收1 h，每15分鐘混勻1次，吸收后的血清與A1細(xì)胞、O細(xì)胞均無反應(yīng)；56 ℃放散后，其放散液與A1細(xì)胞呈弱陽性(+)反應(yīng)，證明患者血液中含有抗-A1抗體。

圖1 人類ABO血型基因檢測試劑結(jié)果

2.4 基因分型鑒定結(jié)果 人類ABO血型基因檢測試劑結(jié)果為A205B亞型(圖1)，人類ABO血型-A亞型基因分型檢測試劑結(jié)果為A205(圖2)。

注：MARKER 片段大小從上至下分別為1 000、700、500、400、300、200、100 bp。

圖2 人類ABO血型-A亞型基因分型檢測試劑結(jié)果

3 討 論

ABO血型是人類輸血、器官移植、遺傳多態(tài)性分析最為重要的紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，常見有A、B、O、AB 4種表型,人群中也發(fā)現(xiàn)有一定數(shù)量的ABO亞型的存在，主要表現(xiàn)為抗原減弱或在血型鑒定中正反定型不一致[3]。A型含有最多的亞型，包括A1、A2、A3、Ax、Aend、Am等[4]。向東等[5]報(bào)道了上海地區(qū)最常見的亞型為A2和A2B，雖然ABO亞型在人群中的頻率不高，但由于臨床檢測人群數(shù)量較大，因此在臨床實(shí)際工作中常會(huì)遇到ABO亞型引起的血型定型或配血困難。22%～35%的A2B亞型血清中有抗-A1抗體，該抗體大多數(shù)情況下無臨床意義，只有在37 ℃有反應(yīng)的抗-A1抗體，才考慮具有臨床意義[6]。

在該例患者血型研究中，血清學(xué)試驗(yàn)提示患者血清中含有抗-A1抗體，該抗體在37 ℃具有生物活性，可以造成紅細(xì)胞血型正反定型不符以及交叉配血不合。經(jīng)吸收放散試驗(yàn)及DNA基因分型試驗(yàn)確定該患者血型為A205B亞型，建議臨床為其輸注O型RhD陽性的洗滌紅細(xì)胞，患者輸血后無不良反應(yīng)發(fā)生。

因此對于ABO亞型患者的輸血治療方案[7]，輸注紅細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量選擇O型洗滌紅細(xì)胞；輸注血漿或冷沉淀應(yīng)選擇AB型或亞型對應(yīng)的正常血型；輸注血小板應(yīng)選擇亞型對應(yīng)的正常血型。增加輸血前常見ABO亞型的篩選[8]，可以避免不規(guī)則ABO抗體的漏檢，降低輸血反應(yīng)發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，提高臨床輸血治療效果。

[1]許志遠(yuǎn)，王濤.北京地區(qū)獻(xiàn)血人群ABO亞型研究[J].北京醫(yī)學(xué),2013,35(8):712-714.

[2]李勇，馬學(xué)嚴(yán).實(shí)用血液免疫學(xué)血型理論和實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京：科學(xué)出版社，2006：341-479.

[3]林甲進(jìn),朱碎永.A2B亞型分子機(jī)制研究及其家系分析[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,36(3):261-262.

[4]郎興瑩,尹建平.ABO血型基因研究進(jìn)展[J].中國輸血雜志,2010,23(12):1078-1082.

[5]向東,劉曦,郭忠慧，等.上海地區(qū)中國人群中ABO亞型的研究[J].中國輸血雜志,2006,19(1):25-26.

[6]高峰.輸血與輸血技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：65.

[7]孫曉琳,關(guān)曉珍,于洋，等.36例ABO血型亞型檢測及血清學(xué)分析[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2012,14(3):215-217.

[8]馬紅麗,劉紅冰,許秀榮.輸血前開展A2/A2B亞型和Rh弱D血型檢測的臨床意義[J].臨床血液學(xué)雜志,2011,24(12):707-708.

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.01.061

B

1672-9455(2015)01-0142-02

2014-04-09

2014-06-22)