新生兒病房分離金黃色葡萄球菌耐藥性及耐消毒劑基因檢測(cè)

雷新云，金正江

（湖北省婦幼保健院，湖北 武漢 430070）

金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，SA）分布廣泛，毒力強(qiáng)，易引起新生兒各種感染。一旦發(fā)生感染，由于新生兒自身原因，多種抗菌藥物使用受限，除β-內(nèi)酰胺類，可選用藥物不多。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA）對(duì)β-內(nèi)酰胺類、紅霉素類等多種抗菌藥物耐藥，該菌的出現(xiàn)給臨床治療帶來極大困難。因此，預(yù)防感染尤為重要，消毒劑的使用是有效的措施之一。近年來，不斷有文獻(xiàn)報(bào)道MRSA攜帶耐消毒劑基因，對(duì)多種消毒劑產(chǎn)生抗性，攜帶率各地區(qū)各有不同［1-2］。為了解本院新生兒病房SA的耐藥性及耐消毒劑的情況，本研究對(duì)新生兒病房送檢標(biāo)本分離的SA耐藥譜進(jìn)行了分析，并對(duì)其是否攜帶耐消毒劑基因qacA/B進(jìn)行了檢測(cè)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 菌株來源 2013年1—12月新生兒科住院新生兒送檢標(biāo)本分離的225株SA，標(biāo)本類型包括:痰、尿、胃液、糞便等，剔除同一患者重復(fù)菌株。

1.2 細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn) 細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)采用法國(guó)生物梅里埃公司VITEK2 Compact全自動(dòng)鑒定系統(tǒng)。試劑采用系統(tǒng)配套的GP卡和GP67卡。質(zhì)控菌株為SA ATCC29213，頻率為每周一次。

1.3qacA/B基因檢測(cè) 采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）方法對(duì)耐消毒劑基因qacA/B進(jìn)行檢測(cè)，特異性引物 為 5’-GCAGAAAGTGCAGAGTTCG-3’和 5’-CCAGTCCAATCATGCCTG-3’，產(chǎn)物長(zhǎng)度為361 bp，PCR體系參數(shù)設(shè)置為:25μL PCR反應(yīng)體系包括10×PCR緩沖液2.5μL，DNTP2.0μL（2.5 mmol/L），引物 各 2.5 μL （10μmol/L），無 菌 去 離 子 水12.7μL，DNA模板2.5μL，0.3μL TaqDNA聚合酶。96℃預(yù)變性3 min，然后94℃20 s，53℃20 s，72℃20 s，循環(huán)25個(gè)周期，最后72℃5 min［3］。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)本來源 225株SA標(biāo)本來源以呼吸道分泌物為主，占72.44%；20株 MRSA中，呼吸道分泌物占65.00%。見表1。

表1 225株SA標(biāo)本來源分布Table 1 Specimen distribution of 225 S.aureusisolates

2.2 藥敏試驗(yàn) 225株SA中，MRSA20株（占8.89%），甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（methicillin-sensitiveStaphylococcusaureus，MSSA）205株（占91.11%）。耐藥率見表2。

表2 225株SA對(duì)常用抗菌藥物的耐藥率（%）Table 2 Resistant rates of 225 S.aureus isolates to commonly used antimicrobial agents（%）

2.3qacA/B基因檢測(cè) 225株SA中21株攜帶qacA/B基因，陽性率為9.33%。其中MRSA3株，陽性率為15.00%（3/20）；MSSA18株，陽性率為8.78%（18/205），兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝148.84，P＜0.01）。PCR電泳圖見圖1。

圖1 qacA/B基因檢測(cè)電泳圖Figure 1 Electrophoresis map of PCR product of qacA/B gene

3 討論

革蘭陽性球菌在新生兒細(xì)菌感染中占重要地位，其細(xì)菌譜分布中SA居首位［4］。SA是一種需氧或兼性厭氧革蘭陽性球菌，可存在于外界環(huán)境及人體口腔、鼻咽等部位，是人類化膿性感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿性感染，也可引起肺炎、假膜性腸炎、心包炎等，甚至可引起敗血癥、膿毒癥等全身感染。本研究中，從標(biāo)本來源分析，呼吸道分泌物占72.44%，可見在SA引起的新生兒感染中，呼吸道感染占主要地位；其次為胃腸道感染，糞便標(biāo)本占1.78%。在局部感染中，臍部、眼及其他部位的化膿性分泌物共占25.33%。新生兒抵抗力差，如消毒隔離措施不到位，護(hù)理不當(dāng)，極易引起臍部等部位的化膿性感染，一旦感染需及時(shí)合理選用抗菌藥物，采取有效護(hù)理措施，防止感染癥狀向全身蔓延。

本研究中，MRSA檢出率為8.89%，低于相關(guān)文獻(xiàn)［5-6］報(bào)道，可能存在地區(qū)及人群之間的差異。MRSA的耐藥性與青霉素結(jié)合蛋白2a（penicillin-binding protein 2a，PBP2a）有關(guān)［7］。PBP2a由 mecA 基因編碼，具有高度保守性，mecA基因檢測(cè)陽性即為MRSA。但近年來有文獻(xiàn)［8］報(bào)道，MRSA菌株中并非均攜帶mecA基因，說明可能還存在其他耐藥機(jī)制，值得關(guān)注。本研究中，SA對(duì)紅霉素、克林霉素、四環(huán)素、慶大霉素、環(huán)丙沙星及復(fù)方磺胺甲口惡唑的耐藥率高低不等，但MRSA的耐藥率普遍高于MSSA。左氧氟沙星、莫西沙星、替加環(huán)素、萬古霉素、利奈唑胺及呋喃妥因?qū)λ蠸A均顯示出良好的抗菌活性，敏感率均為100%。因此，在MRSA感染危重患兒中，萬古霉素可作為經(jīng)驗(yàn)治療的首選。但隨著萬古霉素的應(yīng)用越來越多，近年來不斷有萬古霉素中介SA和異質(zhì)性萬古霉素耐藥SA的報(bào)道，本研究中雖尚未發(fā)現(xiàn)，但也應(yīng)引起警惕，注意合理用藥，嚴(yán)防該類菌株的出現(xiàn)。

SA由于其毒力強(qiáng)，感染廣泛及耐藥嚴(yán)重而一直受到人們的關(guān)注。近年來，由于各種消毒劑在臨床被廣泛使用，SA對(duì)消毒劑的抗性及耐消毒劑機(jī)制的研究也日益受到各界的重視。SA對(duì)消毒劑的抗性主要與外排泵系統(tǒng)有關(guān)，由質(zhì)?；蛉旧w上的相關(guān)蛋白基因編碼，種類繁多，作用機(jī)制均為借助質(zhì)子泵的動(dòng)力將胞內(nèi)抗菌物質(zhì)排出胞外，使其達(dá)不到有效抗菌濃度而產(chǎn)生耐藥。季胺類消毒劑基因（qac）在SA耐消毒劑機(jī)制中發(fā)揮重要作用，qac基因由于在親脂性消毒劑外排機(jī)制中發(fā)揮重要作用而得名，編碼蛋白型的外排系統(tǒng)。目前qac基因家族已發(fā)現(xiàn)有10余種，其中qacA/B基因存在于葡萄球菌的質(zhì)粒中。qacA基因與qacB基因雖然作用底物不同，但結(jié)構(gòu)十分相似，相差僅為幾個(gè)核苷酸，普通PCR方法無法區(qū)分［9］。因此，本研究中參考有關(guān)文獻(xiàn)設(shè)計(jì)通用引物對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，225株SA中檢出qacA/B基因21株，陽性率為9.33%，其中MRSA菌株3株，陽性率為15.00%，MSSA菌株18株，陽性率為8.78%，結(jié)果與有關(guān)報(bào)道［10］相似。研究表明，MRSA菌株的耐消毒劑機(jī)制可能與其耐藥機(jī)制協(xié)同發(fā)揮作用，本研究中是否存在該現(xiàn)象有待進(jìn)一步研究。

總之，新生兒SA感染中，在關(guān)注耐藥性的同時(shí)應(yīng)關(guān)注其對(duì)消毒劑的抗性。在醫(yī)院感染控制中應(yīng)以預(yù)防為主，加強(qiáng)消毒管理，提高手衛(wèi)生依從性，加強(qiáng)新生兒基礎(chǔ)疾病護(hù)理，合理使用抗菌藥物和消毒劑，切實(shí)有效做好預(yù)防感染的發(fā)生或流行，保障新生兒生命健康安全。

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