貴州165例α-地中海貧血基因突變類型初步分析＊

劉興梅，李貴芳，吳 嫻，蘇 莉，王茹蕾，黃盛文

（貴州省人民醫(yī)院檢驗科，貴陽550002）

α-地中海貧血（以下簡稱α-地貧）是世界上常見的單基因常染色體遺傳性疾病之一，也是我國長江以南發(fā)生率最高，影響最大的遺傳病之一[1]。其發(fā)病機制是α-珠蛋白基因的缺失或點突變使珠蛋白基因的表達受到抑制，引起α-珠蛋白鏈合成的減少甚至完全不能合成，導(dǎo)致溶血性貧血。廣東、廣西等省的α-地貧分子流行病學(xué)特征已經(jīng)闡明[2-3]，但貴州α-地貧發(fā)生率及突變類型尚未見報道。本文對165例經(jīng)本院確診的α-地貧基因攜帶者和患者的基因型進行分析，初步了解貴州地區(qū)α-地貧的基因型分布情況?，F(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2008年11月至2014年1月在本院就診，經(jīng)地貧篩查發(fā)現(xiàn)為地貧表型陽性，血紅蛋白電泳提示可能為α-地貧的患者，或有α-地貧陽性家族史，需進一步確診者，共753例，均為貴州戶籍，其中男397例，女356例，年齡2個月至77歲。

1.2 α-地貧篩查方法 采用紅細胞指數(shù)分析結(jié)合血紅蛋白（hemoglobin，Hb）結(jié)果進行篩查。平均紅細胞體積（mean corpuscular volume，MCV）＜82fL和（或）平均血紅蛋白水平（mean corpuscular hemoglobin，MCH）＜27pg，血清鐵和鐵蛋白正常者為地貧表型陽性。同時，血紅蛋白A2（HbA2）≤2.5%，或檢出HbBarts或HbH，擬診為α-地貧。

1.3 基因診斷 對α-地貧表型陽性者，抽取外周靜脈血2 mL，提取DNA用于α-地貧基因診斷。基因診斷試劑購自深圳益生堂生物企業(yè)有限公司，PCR擴增采用E-Cycler TM 96儀（北京博奧生物有限公司），PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果用Syngene凝膠成像系統(tǒng)分析。應(yīng)用跨越斷裂位點聚合酶鏈反應(yīng)（Gap-PCR）檢測3種常見的α-珠蛋白基因缺失突變（--SEA、-α4.2和-α3.7），反向點雜交（reverse dot blot，RDB）技術(shù)檢測3種常見的α-珠蛋白基因點突變（αCS、αQS和αWS），操作步驟按試劑盒說明書進行。

2 結(jié)果

2.1 陽性檢出率 753例受檢者中共檢出α-地貧165例，男89例，女76例，陽性檢出率為21.91%。

2.2 α-地貧基因型分析 共檢出11種α-地貧的基因型，其中--SEA／αα標(biāo)準(zhǔn)型105例，占63.64%，見表1。檢出基因突變類型5種，以--SEA最多見，占64.77%，兩種點突變類型共占3.62%，見表2。

表1 165例α-地貧基因型分布

2.3 αβ復(fù)合型地貧 共檢出4例αβ復(fù)合型地貧，基因型為--SEA／αα復(fù)合βCD17／βN2例，-α3.7／αα復(fù)合β654-Ⅱ／βN1例，-α3.7／αα復(fù)合βCD41-42／βCD41-421例。前3例臨床上均表現(xiàn)為輕度貧血，其中HbA2正常1例，升高2例，HbBarts陽性1例。第4例為1歲男性患兒，Hb 94.0g／L，HbF 89.9%，臨床上表現(xiàn)為重型β-地貧。

表2 α-地貧基因突變類型分布

3 討論

我國南方地區(qū)是α-地貧的高發(fā)區(qū)，尤其以廣西、廣東兩省發(fā)病率最高，分別為17.55%[4]和12.03%[5]。本課題組前期采用臍血血紅蛋白電泳的方法，對貴州貴陽地區(qū)的1 219例新生兒進行α-地貧篩查，其發(fā)生率為2.95%[6]。這是目前惟一關(guān)于貴州地區(qū)α-地貧發(fā)病率的調(diào)查結(jié)果。由于貴陽位于貴州的中部，這一調(diào)查結(jié)果不能反映整個貴州地區(qū)α-地貧的發(fā)生率。與廣西接壤的貴州南部地區(qū)的α-地貧發(fā)生率可能會高于這一數(shù)據(jù)。因此，貴州地區(qū)準(zhǔn)確的α-地貧發(fā)生率，有待于進一步開展系統(tǒng)完整的分子流行病學(xué)調(diào)查研究才能明確。同時，還要系統(tǒng)了解貴州地區(qū)的α-地貧基因突變類型，有助于指導(dǎo)本地區(qū)α-地貧的防控。

本研究對165例α-地貧患者及攜帶者的基因突變類型進行分析，初步了解貴州地區(qū)α-地貧的基因突變類型及分布情況。本研究顯示：在165例α-地貧患者或攜帶者中，靜止型32例，標(biāo)準(zhǔn)型113例，中間型20例，分別占19.39%、68.48%和12.12%。共檢測出11種基因型，其中以--SEA／αα最多，占64.77%，其次是-α3.7／αα、--SEA／-α3.7、-α4.2／αα和--SEA／-α4.2分別占12.73%、7.27%、5.45%、4.24%，與國內(nèi)其他地區(qū)的報道基本一致[7]。檢出的5種突變類型中，3種缺失型突變--SEA、-α3.7、-α4.2分別占64.77%、22.28%、9.33%，其中以--SEA最常見，與國內(nèi)其他地區(qū)的突變類型一致[8-9]；點突變αCSα、αQSα僅占2.59%和1.03%。由于本研究的病例來源僅限于就診于貴州省人民醫(yī)院的患者，這一調(diào)查結(jié)果僅是初步反映貴州地區(qū)α-地貧的突變類型及分布頻率。

本研究檢測出4例αβ復(fù)合型地貧，低于文獻報道的1.58%[10]，這可能與檢測人員對αβ復(fù)合型地貧的認(rèn)識不夠有關(guān)，部分αβ復(fù)合型地貧未被檢測出。這4例病例均符合小細胞低色素貧血，并伴Hb電泳異常。而αβ復(fù)合型地貧患者無論與α-地貧或β-地貧攜帶者婚配，都有1／4的風(fēng)險生育重型或中間型地貧。例如本研究的第4例患兒，基因型為-α3.7／αα復(fù)合βCD41-42／βCD41-42，從基因型可以初步推測此患兒的父母一方為αβ復(fù)合型地貧，另一方為β-地貧攜帶者。因此，在地貧高發(fā)區(qū)，要重視αβ復(fù)合型地貧的檢測，對防止重型和中間型地貧患兒的出生有重要的意義。

本研究初步獲得了貴州地區(qū)α-地貧基因的突變類型及其分布頻率，為本地α-地貧的防治提供了有價值的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，對α-地貧的產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷具有重要的指導(dǎo)意義。

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