黃芪多糖對(duì)幼犬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響及其抗氧化作用初探

盧 煒顧蓓蓓趙莎莎

（1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院,江蘇泰州 225300; 2.泰州市出入境檢驗(yàn)檢疫局,江蘇泰州 225300）

黃芪多糖對(duì)幼犬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響及其抗氧化作用初探

盧 煒1顧蓓蓓2趙莎莎1

（1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院,江蘇泰州 225300; 2.泰州市出入境檢驗(yàn)檢疫局,江蘇泰州 225300）

目的：研究注射不同劑量黃芪多糖對(duì)幼犬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響及其抗氧化作用。方法：24只4月齡中華田園犬隨機(jī)分為四組：正常對(duì)照組（生理鹽水）、低劑量組（黃芪多糖注射液0.1 mg·kg-1）、中劑量組（黃芪多糖注射液0.5 mg·kg-1）和高劑量組（黃芪多糖注射液1 mg·kg-1）。檢測(cè)黃芪多糖對(duì)幼犬的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、總超氧化物歧化酶（T-SOD）活力、丙二醛（MDA）含量的影響。結(jié)果：黃芪多糖顯著促進(jìn)幼犬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，提高血清T-SOD活力，降低血清MDA含量。結(jié)論：黃芪多糖可顯著提高幼犬免疫力和抗氧化功能。

黃芪多糖 幼犬 淋巴細(xì)胞 抗氧化作用

黃芪的藥用迄今已有2000多年的歷史，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗應(yīng)激、降壓和較廣泛的抗菌作用，是臨床上扶正固本的常用中藥之一[1]。黃芪含有多糖、皂苷類(lèi)、黃酮類(lèi)和氨基酸等多種生物活性物質(zhì)。其中，黃芪多糖（astragalus polysaccharide，APS）含量最高，為黃芪多糖的主要藥用活性成分，具有較強(qiáng)的免疫活性，并具有毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性、無(wú)殘留等特點(diǎn)[1，2]。為了進(jìn)一步研究黃芪多糖對(duì)犬的免疫調(diào)節(jié)作用，本試驗(yàn)研究了黃芪多糖對(duì)幼犬的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響及其抗氧化作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取4月齡健康中華田園犬24只，體重3.5～4.5kg，單舍飼養(yǎng)，按常規(guī)防疫程序進(jìn)行防疫和犬舍消毒。試驗(yàn)開(kāi)始后，隨機(jī)分為四組：正常對(duì)照組（生理鹽水）、低劑量組（黃芪多糖注射液0.1 mg·kg-1）、中劑量組（黃芪多糖注射液0.5 mg·kg-1）和高劑量組（黃芪多糖注射液1 mg·kg-1）。各組犬只按常規(guī)管理、飼喂。

1.2 試驗(yàn)試劑

黃芪多糖注射液（方正芪抗，吉林省方正動(dòng)物藥業(yè)科技有限責(zé)任公司）；RPMI-1640培養(yǎng)液（GIBCO）；小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；植物血凝素（上海依華科技公司）；總超氧化物歧化酶（T-SOD）活力、丙二醛（MDA）（南京建成生物技術(shù)研究所）。

1.3 樣品采集

于試驗(yàn)第0、1、5、10d進(jìn)行靜脈采血，每只犬分別采集肝素鈉抗凝血與非抗凝血各一份?？鼓糜赥淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率測(cè)定，非抗凝血于4 000 r·min-1離心30 min分離血清后，用于血清T-SOD、MDA檢測(cè)。

1.4 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率測(cè)定

將采集的抗凝血加入有PHA與RPMI-1640培養(yǎng)液的試管中，混勻后置于5% CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)72 h。72 h后棄除上清，加入37℃預(yù)熱的0.87% NH4Cl溶液3 mL，繼續(xù)孵育15 min。加入生理鹽水混合，于1000 r·min-1離心10 min。棄除上清，取沉淀進(jìn)行推片，瑞士染色。

淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率=（過(guò)渡型淋巴細(xì)胞+淋巴母細(xì)胞）/ 淋巴細(xì)胞總數(shù)×100%

1.5 血清T-SOD、MDA檢測(cè)

血清T-SOD、MDA檢測(cè)采用南京建成生物技術(shù)研究所試劑盒。操作步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.6 數(shù)據(jù)處理

結(jié)果以平均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)誤（x± SE）表示。數(shù)據(jù)分析采用獨(dú)立樣本t-測(cè)驗(yàn)。采用SPSS 13.0方差分析程序?qū)υ囼?yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃芪多糖對(duì)幼犬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響

黃芪多糖對(duì)幼犬T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響見(jiàn)圖1。試驗(yàn)開(kāi)始前，試驗(yàn)組與對(duì)照組淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化水平相當(dāng)（p〉0.05）。注射黃芪多糖注射液后第1d，三種劑量組幼犬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率明顯提高，較對(duì)照組差異顯著（p〈0.05），并保持到第5d和第10d。

圖1 黃芪多糖對(duì)幼犬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響 %

2.2 黃芪多糖對(duì)幼犬血清T-SOD、MDA的影響

從表1中看出試驗(yàn)第0d，試驗(yàn)組和對(duì)照組幼犬血清中的T-SOD 酶活力無(wú)顯著差異。在注射黃芪多糖注射液后第1d，三種劑量試驗(yàn)組血清T-SOD 酶活力均顯著高于對(duì)照組（p〈0.05），并持續(xù)到第5d和第10d。

如表2所示，試驗(yàn)試驗(yàn)第0d，試驗(yàn)組和對(duì)照組幼犬血清MDA含量無(wú)顯著差異。試驗(yàn)開(kāi)始后第1d，三種劑量組幼犬血清MDA含量較對(duì)照組，均顯著降低（p〈0.05），并維持到第5d和第10d。

3 討論

研究表明[2，3]，黃芪的主要活性成分為黃芪多糖，而黃芪多糖本身并沒(méi)有直接的抗菌或抗病毒作用，其作用途徑主要是通過(guò)提高機(jī)體的免疫力和抗氧化水平，從而增強(qiáng)機(jī)體自身抵抗病菌和病毒的機(jī)能。本研究發(fā)現(xiàn)，注射黃芪多糖可促進(jìn)幼犬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，提高血清T-SOD活力，降低血清MDA含量。

表1 黃芪多糖對(duì)幼犬血清T-SOD活力的影響 U/mL

表2 黃芪多糖對(duì)幼犬血清MDA含量的影響 nmoI/mL

黃芪多糖的免疫促進(jìn)作用是通過(guò)體液免疫和細(xì)胞免疫兩種途徑共同實(shí)現(xiàn)的[4]。本研究發(fā)現(xiàn)黃芪多糖提高了幼犬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，增強(qiáng)其細(xì)胞免疫功能。此結(jié)果與黃芪多糖在其他動(dòng)物研究結(jié)果一致[5，6]。此外，黃芪多糖還可通過(guò)免疫球蛋白或補(bǔ)體成分而發(fā)揮作用的，一方面促使細(xì)胞的耗氧量增加，使SOD大量合成；另一方面免疫活性細(xì)胞代謝旺盛，SOD合成加快[7]。炎癥反應(yīng)產(chǎn)生的自由基可與細(xì)胞膜、蛋白質(zhì)、核酸和酶等產(chǎn)生反應(yīng)，造成細(xì)胞損傷，甚至引起細(xì)胞死亡。自由基作用于脂質(zhì)可氧化產(chǎn)生醛，丙二醛蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，且具有細(xì)胞毒性[8]。SOD是動(dòng)物體內(nèi)最主要的抗氧化酶，它能夠清除自由基，防止對(duì)機(jī)體直接或間接的損傷作用[9]。本研究發(fā)現(xiàn)黃芪多糖提高幼犬血清T-SOD活力，降低MDA含量，說(shuō)明黃芪多糖對(duì)自由基誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)注射黃芪多糖可促進(jìn)幼犬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，提高機(jī)體免疫力；提高血清T-SOD活力，降低血清MDA含量，從而對(duì)自由基誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。

[1] 陳國(guó)輝，黃文鳳.黃芪的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)新藥雜志，2008，17（17）：1482-1485.

[2] Tzianabos AO.Polysaccharide immunomodulators as therapeutic agents：structural aspects and biological function [J].Clinical Microbiol Rev，2000，（13）：523-533.

[3] 徐叔云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1455-1458.

[4] 黃保續(xù)，曲志娜.黃芪免疫作用研究進(jìn)展[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，1994，（5）：13-14.

[5] 陳洪亮，禚寶山，李德發(fā).黃芪多糖對(duì)肉雞脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化及信息分子的影響[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2003，39（10）：11-13.

[6] 張恩戶(hù)，王瑞曇，岳明.不同分子量的黃苗多糖對(duì)免疫低下小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和血清溶血素的影響[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，33（3）：75-76.

[7] 方允中，李文杰.自由基與酶[M].北京：科學(xué)技術(shù)出版社，1989.

[8] 黃飛翔，李方玉，李向濤，等.豬血清丙二醛與脂肪代謝和肝功變化關(guān)系的研究[J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，40（3）：300-303.

[9] 方允中，鄭榮梁.自由基生物學(xué)的理論與應(yīng)用[M].北京：科學(xué)出版社，2002.

盧煒（1981-），男，講師，碩士，主要從事動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)生理研究。

江蘇高校品牌專(zhuān)業(yè)建設(shè)工程資助項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：PPZY2015C230