轉化生長因子β1與乳腺癌微血管密度及預后的相關性

沈葉　徐梅玉　盛友華

(上海市奉賢區(qū)中心醫(yī)院普外科，*病理科，上?！?01400)

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·論著·

轉化生長因子β1與乳腺癌微血管密度及預后的相關性

沈葉徐梅玉盛友華*

(上海市奉賢區(qū)中心醫(yī)院普外科，*病理科，上海201400)

摘要目的：探討乳腺癌組織中轉化生長因子β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)與微血管密度(microvessel density，MVD)及乳腺癌預后的相關性。方法： 采用免疫組織化學方法檢測62例乳腺癌組織及30例乳腺腺瘤組織中TGF-β1的表達水平，計數(shù)MVD，分析二者與乳腺癌病理特征的關系。結合隨訪資料分析TGF-β1與乳腺癌的復發(fā)轉移及患者生存率的相關性。結果：乳腺癌組織中TGF-β1蛋白表達的陽性率、MVD計數(shù)均明顯高于乳腺腺瘤組織(P<0.05)；乳腺癌組織中TGF-β1蛋白表達的陽性率隨腫瘤直徑的增加、臨床分期增高及淋巴結轉移而增高(P<0.05)，且MVD計數(shù)與臨床分期及淋巴結轉移相關(P<0.05)。TGF-β1蛋白表達水平與乳腺癌組織MVD計數(shù)呈正相關(r=0.705，P<0.05)。術后5年，TGF-β1蛋白陽性表達患者的生存率明顯低于陰性表達患者(P<0.05)。結論：TGF-β1在乳腺癌組織中呈過表達狀態(tài)且與MVD計數(shù)呈正相關，在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，有望成為乳腺癌抗血管形成治療的生物靶點。

關鍵詞乳腺癌；轉化生長因子β1；微血管密度；預后

乳腺癌發(fā)病率占女性惡性腫瘤的首位，外科手術治療乳腺癌仍是目前最有效的治療手段。研究[1]顯示，即使是T0~T1、N1~N2等早期乳腺癌患者，其術后5年的復發(fā)轉移率仍達60%，而腫瘤的侵襲性與轉移性是導致患者死亡的主要原因。乳腺癌的生長、轉移與腫瘤血管生成密切相關，抑制血管生成已成為乳腺癌治療的一個新靶點[2]。目前已發(fā)現(xiàn)多種血管生成因子，其中轉化生長因子β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)因其在體內外對血管增殖的作用不一致，一直是臨床研究的熱點[3-4]。腫瘤微血管密度(microvessel density，MVD)是特定腫瘤區(qū)域的微血管計數(shù)，是腫瘤侵襲轉移潛能的預測指標，但目前針對乳腺癌組織中TGF-β1與MVD間的關系的研究仍較少。本研究擬通過檢測乳腺癌組織中TGF-β1的表達，探討其與MVD及預后的相關性，為乳腺癌的基因靶向治療提供參考。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2010年12月—2014年1月在上海市奉賢區(qū)中心醫(yī)院手術并經組織病理學確診的女性乳腺癌患者62例。入組標準：(1)均保留手術切除的乳腺癌組織標本，并經手術及組織病理學確診；(2)均為首次確診，可耐受手術，且術前未接受任何放化療治療；(3)排除合并其他部位腫瘤或嚴重臟器功能不全者。本研究經本院倫理學委員會批準，患者或家屬均簽署知情同意書。62例患者的年齡40～75歲，平均(53.6±5.8)歲；組織學分型：浸潤性導管癌38例，導管內癌19例，浸潤性小葉癌5例；根據美國癌癥聯(lián)合委員會(American Joint Committee on Cancer，AJCC)分期標準：Ⅰ期23例，Ⅱ期14例，Ⅲ期21例，Ⅳ期4例。同時選擇同期收治的30例乳腺腺瘤患者的乳腺組織作為對照組。

1.2方法將乳腺組織標本制作成連續(xù)4 μm的組織切片，采用免疫組織化學三步法進行免疫組織化學染色。TGF-β1兔抗人單克隆抗體購自美國Santa Cruz生物技術公司，CD34鼠抗人單克隆抗體購自上海森雄科技實業(yè)有限公司，采用已知陽性切片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3判定標準

1.3.1TGF-β1免疫組織化學結果的判定標準隨機選擇5個高倍鏡視野，每個視野計數(shù)200個細胞，采用半定量計分方法評價[5]。染色強度：無著色為0分；著色弱為1分；著色適中為2分；著色深為3分。陽性細胞比例：著色的陽性細胞數(shù)百分比≤5%為0分； 6%～25%為1分； 26%～50%為2分； ≥51%為3分。兩項積分乘積≥3分為陽性。

1.3.2MVD的判定標準參照Weidner[6]的方法，在低倍鏡(×100)下選擇5個腫瘤病灶中染色清晰、微血管最為密集的區(qū)域，再切換到高倍鏡(×400)，計算5個區(qū)域的MVD平均值。

2結果

2.1乳腺癌組織與乳腺腺瘤組織中TGF-β1蛋白的表達及MVD計數(shù)比較乳腺癌組織TGF-β1蛋白表達的陽性率、MVD計數(shù)均明顯高于乳腺腺瘤組織，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1　乳腺癌組織與乳腺腺瘤組織中TGF-β1蛋白表達及MVD計數(shù)比較

注：與乳腺腺瘤組織比較，*P<0.05

2.2TGF-β1蛋白表達、MVD計數(shù)與乳腺癌臨床病理特征的關系乳腺癌組織中TGF-β1蛋白表達的陽性率隨腫瘤直徑的增加、臨床分期增高及淋巴結轉移而增高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Ⅲ期、Ⅳ期乳腺癌患者MVD顯著高于Ⅰ期、Ⅱ期乳腺癌患者，伴有淋巴結轉移的乳腺癌患者MVD高于不伴有淋巴結轉移的乳腺癌患者，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

2.3TGF-β1蛋白表達水平與乳腺癌組織MVD計數(shù)的相關性 經Spearman秩相關分析，TGF-β1蛋白表達水平與乳腺癌組織MVD計數(shù)呈顯著正相關(r=0.705，P<0.05)。

2.4乳腺癌組織TGF-β1蛋白表達與預后的關系 乳腺癌患者術后1、3、5年，TGF-β1蛋白陽性表達與陰性表達患者的復發(fā)轉移率比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；術后1、3年，TGF-β1蛋白陽性表達患者的生存率與陰性表達患者比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；術后5年TGF-β1蛋白陽性表達患者的生存率明顯低于陰性表達患者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表3。

表2　TGF-β1蛋白表達、MVD計數(shù)與乳腺癌臨床病理特征的關系

注：不同臨床分期、腫瘤直徑、有無淋巴結轉移比較，*P<0.05

表3乳腺癌組織TGF-β1蛋白表達與預后的關系 (n,%)

預后隨訪時間TGF-β1蛋白表達-+χ2P復發(fā)轉移率1年 2(12.5)7(15.2)0.07>0.053年 4(25.0)13(28.3)0.06>0.055年 7(43.8)27(58.7)1.07>0.05生存率 1年 16(100.0)44(95.7)0.72>0.053年 15(93.8) 37(80.4)1.56>0.055年 13(81.3) 22(47.8)5.39<0.05

注：與TGF-β1蛋白陰性表達患者比較，*P<0.05

3討論

乳腺癌的生長、轉移是一個極為復雜過程，而新生血管的形成是其中不可或缺的環(huán)節(jié)之一。有研究[7]認為，腫瘤作為典型的血管依賴性病變，腫瘤血管生成對其侵襲性與不良預后具有重要預測價值，同時發(fā)現(xiàn)，MVD與腫瘤大小、分期、淋巴結轉移及早期死亡密切相關。TGF-β是一種細胞內源性生長抑制因子，可調節(jié)多種靶基因的表達，在細胞分化、增殖及凋亡中發(fā)揮重要作用，同時因其在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的雙向調節(jié)作用而備受關注[8]。在腫瘤發(fā)生的初期，TGF-β1抑制腫瘤形成，而在腫瘤發(fā)展過程中則起促進作用[9]。目前，TGF-β1與腫瘤血管形成的關系已有共識，但其與MVD的相關性及對乳腺癌患者預后的預測性研究較少。

本研究結果顯示，乳腺癌組織中TGF-β1蛋白表達的陽性率、MVD計數(shù)均明顯高于乳腺腺瘤組織(P<0.05)。進一步分析發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中TGF-β1蛋白表達的陽性率隨腫瘤直徑的增加、臨床分期增高及淋巴結轉移而增高(P<0.05)，且MVD計數(shù)也與臨床分期及淋巴結轉移密切相關(P<0.05)。以上說明，隨著乳腺癌的進展，TGF-β1的表達水平隨之升高，且MVD也參與了新生血管的形成，二者對判斷乳腺癌的惡性程度、浸潤及轉移具有重要價值。Fils-Aimé等[10]研究認為，TGF-β1的高表達促進了癌組織的血管生成，但由于新生血管結構缺乏完整性，基底膜變薄或缺如，易進入血管而發(fā)生轉移。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，TGF-β1蛋白表達水平與乳腺癌組織MVD計數(shù)呈顯著正相關(P<0.05)，TGF-β1的過表達可促進MVD的增高，二者相互協(xié)同，為乳腺癌腫瘤細胞的侵襲性生長提供了條件。

目前，臨床上對乳腺癌切除后的復發(fā)和高轉移人群尚缺乏有效的預測指標，故難以在復發(fā)前進行相應的治療。TGF-β1對乳腺癌患者預后的影響尚有爭議。Divella等[11]研究指出，TGF-β1過表達預示乳腺癌患者的不良預后，其表達陽性率越高，預后越差。殷科等[12]近期研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β1與人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)陰性乳腺癌患者預后無明顯關系，認為TGF-β信號途徑主要通過TGF-β受體發(fā)揮作用。本研究中，TGF-β1蛋白陽性表達與陰性表達的乳腺癌患者的復發(fā)轉移率在術后5年內差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，而術后5年TGF-β1蛋白陽性表達患者的生存率明顯低于陰性表達患者(P<0.05)，說明TGF-β1對早期預后的影響甚小，但可作為遠期不良預后的預測因子。

總之，TGF-β1在乳腺癌組織中呈過表達狀態(tài)且與MVD計數(shù)呈正相關，TGF-β1在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮了重要作用，有望成為乳腺癌抗血管形成治療的重要生物靶點。但本研究樣本量較少，TGF-β1能否準確預測乳腺癌患者術后的復發(fā)轉移及生存時間，尚需進一步研究。

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Correlation of Transforming Growth Factor β1 with Microvessel Density and Prognosis in Breast Cancer

SHENYeXUMeiyuSHENGYouhua*DepartmentofGeneralSurgery,*DepartmentofPathology,ShanghaiFengxianDistrictCentralHospital,Shanghai201400,China

AbstractObjective：To explore the correlation of the expression of transforming growth factor β1(TGF-β1) in breast cancer tissues with the microvessel density(MVD) in breast cancer tissues, as well as the prognosis of breast cancer patients. Methods: The expression of TGF-β1 in the tissues of breast cancer(n=62) and breast fibroadenoma(n=30) were detected with immunohistochemical staining, and the MVD was counted. The correlation of the two factors with the pathological features were analyzed.The influence of TGF-β1 on recurrence, metastasis and survival rate were analyzed in combination with the follow-up data. Results: The positive expression rate of TGF-β1 protein and the count of MVD in breast cancer tissues were significantly higher than those in breast fibroadenoma tissues (P<0.05).The positive expression rate of TGF-β1 protein in breast cancer tissues increased as the increase of tumor diameter,clinical stage,lymph node metastasis(P<0.05),and the count of MVD was correlated with clinical stage and lymph node metastasis(P<0.05).The expression level of TGF-β1 protein was positively correlated with the count of MVD in breast cancer tissues (r=0.705,P<0.05).The 5-year survival rate in patients with positive expression of TGF-β1 was significantly lower than those with negative expression of TGF-β1(P<0.05). Conclusions: TGF-β1 is overexpressed in breast cancer tissues and is positively correlated with the count of MVD. TGF-β1 plays an important role during the process of occurrence and development in breast cancer, and it is a potential biological target for anti-angiogenesis therapy in breast cancer.

Key WordsBreast cancer；Transforming growth factor β1；Microvessel density；Prognosis

通訊作者汪強,E-mail：wq.516@163.com

中圖分類號R737.9

文獻標識碼A