糖尿病腎病大鼠血管緊張素Ⅱ1型受體自身抗體與腎臟損傷和細(xì)胞凋亡的關(guān)系*

徐春艷 趙林雙,2,#

糖尿病腎病大鼠血管緊張素Ⅱ1型受體自身抗體與腎臟損傷和細(xì)胞凋亡的關(guān)系*

徐春艷1趙林雙1,2,#

目的：探討糖尿病腎病(DN)大鼠血管緊張素Ⅱ1型受體自身抗體(AT1-AA)與腎臟組織病理變化和腎小管上皮細(xì)胞及腎小球足細(xì)胞凋亡的關(guān)系。方法：36只雄性SD大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC組，n=6)和DN模型組(DN組，n=30)，DN組大鼠給予高糖高脂喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量(35mg/kg)鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立DN模型。應(yīng)用ELISA檢測(cè)各組大鼠血清AT1-AA水平，并據(jù)此將各組再分為AT1-AA陽(yáng)性和陰性亞組，檢測(cè)各組大鼠血糖(BG)、腎功能指標(biāo)及腎臟肥大指數(shù)(KW/BW)；采用HE染色和透射電鏡觀察各組大鼠腎小管和腎小球病理變化；采用TUNEL法檢測(cè)腎小管上皮細(xì)胞和腎小球足細(xì)胞凋亡。結(jié)果：DN組大鼠AT1-AA水平和陽(yáng)性率明顯高于NC組(P<0.05或P<0.01)。與NC組比較，AT1-AA陽(yáng)性DN大鼠肌酐清除率(Ccr)顯著降低，BG、腎功能指標(biāo)及KW/BW明顯升高(均P<0.01)；AT1-AA陰性DN大鼠除BG和KW/BW外，其它指標(biāo)與AT1-AA陽(yáng)性DN大鼠差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。與NC組比較，AT1-AA陽(yáng)性DN大鼠均出現(xiàn)腎組織及超微結(jié)構(gòu)病理變化，腎小管上皮細(xì)胞和腎小球足細(xì)胞凋亡率亦顯著升高(P<0.01)；AT1-AA陰性DN大鼠腎臟未見(jiàn)明顯病變，細(xì)胞凋亡率顯著低于AT1-AA陽(yáng)性DN大鼠(P<0.05)。結(jié)論：AT1-AA水平變化與DN大鼠腎小管上皮細(xì)胞和腎小球足細(xì)胞凋亡有關(guān)，可能通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞凋亡而參與腎臟損害過(guò)程。

血管緊張素Ⅱ1型受體；自身抗體；細(xì)胞凋亡；糖尿病腎病

隨著糖尿病患病率在全球范圍內(nèi)的普遍增加，各種并發(fā)癥也逐年上升，其中30%-40%的患者有發(fā)生糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy，DN)的危險(xiǎn)。作為糖尿病危險(xiǎn)而嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥之一[1]，DN已成為西方國(guó)家終末期腎病的首要病因，若不及時(shí)診治，最終會(huì)成為血液透析甚至腎臟移植的主要原因[2]。深入了解DN的發(fā)病機(jī)制，尋找有效防治DN的方法一直是糖尿病和腎臟病領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

自1999年血管緊張素Ⅱ1型受體自身抗體(Angiotensin Ⅱ Type 1 Receptor Autoantibody，AT1-AA)首次在先兆子癇患者體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)以來(lái)[3]，國(guó)內(nèi)外學(xué)者相繼在高血壓病和移植排斥反應(yīng)患者體內(nèi)觀察到AT1-AA可與血管緊張素Ⅱ1型受體 (Angiotensin ⅡType 1 Receptor，AT1R) 結(jié)合，發(fā)揮類似AngⅡ的激動(dòng)效應(yīng)[4-6]，并能增強(qiáng)機(jī)體對(duì)AngⅡ的敏感性[7]。作者前期臨床研究[8]已發(fā)現(xiàn)，DN患者體內(nèi)AT1-AA陽(yáng)性率明顯高于糖尿病患者和正常對(duì)照者，且與尿蛋白水平正相關(guān)。而且腎小管上皮細(xì)胞和腎臟足細(xì)胞損傷在DN患者蛋白尿的出現(xiàn)和進(jìn)程中也起著重要作用[9]，但對(duì)AT1-AA介導(dǎo)的腎臟細(xì)胞損傷和凋亡的研究目前尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究通過(guò)測(cè)定DN大鼠血清AT1-AA水平并分析其與腎臟功能和結(jié)構(gòu)改變，以及與腎小管上皮細(xì)胞和足細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系，以明確AT1-AA相關(guān)的自身免疫機(jī)制在DN進(jìn)程中的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

4周齡雄性SD大鼠購(gòu)自武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，共36只(合格證號(hào)42000500001559)。飼養(yǎng)于室溫20-24℃、相對(duì)濕度40%-60%環(huán)境，自由攝食飲水，12h交替照明。

1.2 試劑與儀器

鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ，美國(guó)Sigma公司，貨號(hào)S0130)；TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(美國(guó)Promega公司，貨號(hào)G7360)；血糖(BG)測(cè)試盒(北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)EBGL-100)，肌酐和尿素氮測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所，貨號(hào)分別為C011，C013-2)；尿微量白蛋白(UMA)測(cè)定試劑盒(桂林英美特生物技術(shù)有限公司，批號(hào)U88011020)；AT1R抗原多肽和AT1-AA陽(yáng)性和陰性大鼠血清(華中科技大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院心血管實(shí)驗(yàn)室)。血糖儀(OneTouch UltraVue型，美國(guó)Johnson公司)；多肽自動(dòng)合成儀(PSSM-8型，日本Shimadzu公司)；分光光度計(jì)(752型，上海舜宇恒科學(xué)儀器有限公司)；酶標(biāo)儀(RT-6500型，美國(guó)Bio-Rad公司)；全自動(dòng)生化儀 (UniCelDxC 800型，美國(guó)Beckman Coulter公司)；彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)(HMIAS-2000型，武漢千屏影像技術(shù)有限責(zé)任公司)；透射電鏡(HITACHIH-7000FA型，日本TOSHIBA公司)。

1.3 DN大鼠模型復(fù)制

36只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組(NC組，n=6)和DN模型組(DN組，n=30)。NC組大鼠以普通飼料喂養(yǎng)，DN組大鼠以高糖高脂飼料(在普通飼料中加入2.5%膽固醇、0.4%膽酸鈉、10%蔗糖、10%豬油)喂養(yǎng)。4周后，禁食10h，DN組大鼠腹腔注射1% STZ溶液(35mg/kg)；NC組注射等量檸檬酸緩沖液。3天后兩組大鼠均尾靜脈取血檢測(cè)隨機(jī)BG， 10天后以同樣方法再檢測(cè)一次，對(duì)末次BG>16.7mmol/L大鼠繼續(xù)高糖高脂喂養(yǎng)12周，使其自然進(jìn)展為DN[10]。NC組6只大鼠均未成模，DN組大鼠成模24只，未成模型1只，死亡5只。

1.4 標(biāo)本收集與處理

兩組大鼠于成模前1天用代謝籠收集24h尿液，記錄尿量。于成模當(dāng)天兩組大鼠稱取體重后，10%水合氯醛(0.2ml/100g)腹腔注射麻醉，腔靜脈采血，分離血清，-20℃保存。斷頸處死兩組大鼠，分別摘取雙側(cè)腎臟，去除包膜，生理鹽水洗凈，濾紙吸干水分后用電子天平稱重，計(jì)算腎臟肥大指數(shù)(KW/BW)[雙側(cè)腎臟重量(g)/體重(g)×100%]。將左側(cè)腎臟橫向切分為兩份，一份用4%多聚甲醛固定24h，用作HE染色和TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)；另一份用雙刀法切取小塊腎皮質(zhì)，2.5%戊二醛固定后常規(guī)方法制作電鏡標(biāo)本。

1.5 血清AT1-AA檢測(cè)

采用ELISA檢測(cè)血清AT1-AA[11]。將合成的AT1R抗原多肽片段溶于0.1mmol/L的碳酸緩沖液(pH=9.6)中，配成100μg/ml的抗原包被液，每孔100μl的量包被反應(yīng)，4℃過(guò)夜；血清封閉酶標(biāo)反應(yīng)孔后加入倍比稀釋1∶40的實(shí)驗(yàn)大鼠血清100μl，37℃反應(yīng)40min；加入1∶2 000辣根過(guò)氧化物酶酶標(biāo)抗體，37℃反應(yīng)30min后加底物顯色。實(shí)驗(yàn)中設(shè)置AT1-AA陽(yáng)性和陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照為AT1-AA陽(yáng)性的健康大鼠血清，陰性對(duì)照為AT1-AA陰性的健康大鼠血清。當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)明顯顏色變化后，每孔加入終止液50μl終止反應(yīng)，于20min內(nèi)測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果。光密度(OD)值測(cè)定及結(jié)果判斷：在酶標(biāo)儀上以450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值。測(cè)OD值時(shí)以實(shí)驗(yàn)樣本與陰性對(duì)照的吸光度之比([樣本OD值-空白對(duì)照OD值]/[陰性對(duì)照OD值-空白對(duì)照OD值])>2.1即判為AT1-AA陽(yáng)性[11]。

1.6 BG和腎功能指標(biāo)檢測(cè)

大鼠血液標(biāo)本離心后分離血清，尿液標(biāo)本離心后取上清液，采用全自動(dòng)生化儀及配套試劑按說(shuō)明書(shū)測(cè)定BG(葡萄糖氧化酶法)、血尿素氮(BUN，脲酶法)、血肌酐(Scr)，尿肌酐(Ucr) (苦味酸法)和24h UMA (免疫比濁法)，并計(jì)算肌酐清除率(Ccr)=[Ucr (g/L) / Scr (g/L)]×[24h尿量(ml) / (24h×60min)]。

1.7 腎臟組織學(xué)觀察

(1)光鏡觀察：4%多聚甲醛固定的腎臟組織按常規(guī)方法梯度脫水、石蠟包埋、切片(5μm)、HE染色，光鏡觀察組織形態(tài)學(xué)改變。(2)電鏡觀察：2.5%戊二醛固定的腎皮質(zhì)組織小塊按常規(guī)方法梯度脫水、樹(shù)脂包埋、超薄切片(50nm)、醋酸鈾-檸檬酸鉛染色，透射電鏡觀察腎皮質(zhì)超微結(jié)構(gòu)變化。

1.8 細(xì)胞凋亡檢測(cè)

采用TUNEL法。將上述石蠟包埋腎組織切片常規(guī)脫蠟入水，蛋白酶K室溫下消化，TDT酶反應(yīng)液37℃濕盒中孵育60min，0.3%的過(guò)氧化氫抑制內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶，鏈霉親和素辣根過(guò)氧化酶室溫孵育30min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染。陰性對(duì)照采用無(wú)TDT酶標(biāo)記液，其它操作同上。光鏡觀察凋亡細(xì)胞呈棕褐色，每張切片選取10個(gè)視野，用醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)計(jì)數(shù)腎小管上皮細(xì)胞和腎小球足細(xì)胞凋亡數(shù)，計(jì)算細(xì)胞凋亡率。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 DN組大鼠血清AT1-AA水平和陽(yáng)性率

血清AT1-AA的水平(OD值)，DN組較NC組顯著升高(t=13.133，P<0.01)。DN組血清AT1-AA陽(yáng)性15例，NC組僅1例，兩組間陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.051，P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組大鼠血清AT1-AA水平和陽(yáng)性率

注：與NC組比較，1)P<0.01，2)P<0.05

2.2 各組大鼠BG、腎功能指標(biāo)及KW/BW比較

與NC組比較，DN組大鼠BG、BUN、24h UMA水平及KW/BW均顯著升高(t分別為21.955、6.818、9.747、8.176，均P<0.01)，Ccr明顯降低(t=6.233，P<0.01)。進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，DN組AT1-AA陽(yáng)性和AT1-AA陰性大鼠BG、BUN、24h UMA水平及KW/BW均較NC組明顯升高，Ccr明顯降低(均P<0.01)；而DN組AT1-AA陽(yáng)性大鼠除BG和KW/BW外，其它上述指標(biāo)與AT1-AA陰性DN大鼠水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠BG、腎功能指標(biāo)和

注：與NC組比較，1)P<0.01；與AT1-AA陰性DN組比較，2)P<0.05，3)P<0.01

2.3 各組大鼠腎組織變化特征

大體觀，與NC組比較，DN組大鼠腎臟體積增大，質(zhì)地變硬。光鏡下，NC組AT1-AA陰性大鼠腎臟體積和結(jié)構(gòu)均無(wú)明顯變化，AT1-AA陽(yáng)性大鼠腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)偶見(jiàn)空泡變性；DN組大鼠腎小管上皮細(xì)胞空泡變性，部分腎小管內(nèi)有蛋白管型，腎小球體積增大、系膜細(xì)胞增多、系膜增寬；AT1-AA陽(yáng)性大鼠腎臟組織病變較AT1-AA陰性大鼠嚴(yán)重。見(jiàn)圖1。

透射電鏡顯示，NC組AT1-AA陰性大鼠腎臟超微結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯異常(圖2A)。NC組AT1-AA陽(yáng)性大鼠僅表現(xiàn)為少數(shù)腎小管上皮細(xì)胞水腫，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)稍腫脹(圖2B)。DN組AT1-AA陰性大鼠腎小管上皮細(xì)胞水腫、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹或部分溶解、微絨毛排列紊亂；腎小球基底膜局部增厚，可見(jiàn)足突部分融合(圖2C)。DN組AT1-AA陽(yáng)性大鼠腎小管上皮細(xì)胞嚴(yán)重水腫、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)溶解、胞核濃縮、胞膜破裂、微絨毛排列紊亂，管腔中見(jiàn)大量脫落上皮細(xì)胞、部分管腔閉塞；腎小球系膜基質(zhì)增多、基底膜明顯增厚、足突融合、間隙增寬，偶見(jiàn)腎小球硬化(圖2D)。

2.4 各組大鼠腎小管上皮細(xì)胞和腎小球足細(xì)胞凋亡率

NC組AT1-AA陽(yáng)性和陰性大鼠細(xì)胞凋亡率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.132，P>0.05)。DN組大鼠腎小管上皮細(xì)胞和腎小球足細(xì)胞均有凋亡，以腎小管上皮細(xì)胞凋亡為主。DN組AT1-AA陽(yáng)性大鼠凋亡率明顯大于AT1-AA陰性大鼠(t=4.127，P<0.01)；DN組總凋亡率明顯大于NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=14.504，P<0.01)，見(jiàn)表3。

2.5 AT1-AA與其它指標(biāo)相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析顯示，DN組大鼠AT1-AA水平與BUN、24h UMA水平及KW/BW呈顯著正相關(guān)(r分別為0.671、0.719、0.679，均P<0.05)，與Ccr無(wú)明顯相關(guān)性(r=0.512，P>0.05)。DN組AT1-AA陽(yáng)性大鼠血清AT1-AA水平與細(xì)胞凋亡率呈顯著正相關(guān)(r=0.733，P<0.01)。

表3 各組大鼠腎小管上皮細(xì)胞和腎小球足細(xì)胞凋亡率

注：與DN組AT1-AA陰性比較，1)P<0.01；與NC組比較，2)P<0.01

[本文圖1、圖2見(jiàn)封2、插2]

3 討 論

腎素-血管緊張系統(tǒng)(Renin-Angiotensin System，RAS)是體內(nèi)重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)之一，能有效維持血壓穩(wěn)定和水、電解質(zhì)平衡。近20年的研究表明，除經(jīng)典RAS外，腎臟組織中還存在局部RAS[12]。AngⅡ作為RAS的主要活性肽，在腎臟的基本生理效應(yīng)主要是由AT1R介導(dǎo)。越來(lái)越多的研究證實(shí)，AngⅡ通過(guò)其靶分子AT1R激活多條信號(hào)通路，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞外基質(zhì)合成，在DN進(jìn)程中起重要作用[13]。

AT1-AA屬于補(bǔ)體結(jié)合型IgG1和IgG3類抗體[4]，可與RAS關(guān)鍵因子AT1R的胞外第二環(huán)肽上的氨基酸序列相結(jié)合，發(fā)揮類似AngⅡ的激動(dòng)效應(yīng)，因其對(duì)AT1R的刺激作用不會(huì)出現(xiàn)脫敏現(xiàn)象而成為AngⅡ之外的另一條刺激AT1R的通路[14]。目前關(guān)于AT1-AA的產(chǎn)生主要涉及兩方面的理論：一方面，各種組織損傷和生理紊亂導(dǎo)致隱蔽抗原暴露，機(jī)體自身免疫應(yīng)答反應(yīng)激活[15]，如AT1R上游分子AngⅡ濃度升高或胞內(nèi)信號(hào)通路變化所致AT1R的構(gòu)象和密度改變，均可導(dǎo)致機(jī)體AT1-AA產(chǎn)生增多[16-17]；另一方面，與AT1R抗原表位具有同源性的蛋白分子持續(xù)存在，則會(huì)通過(guò)分子模擬誘導(dǎo)AT1-AA產(chǎn)生[18]。

業(yè)已證實(shí)持續(xù)高血糖狀態(tài)可使血管內(nèi)皮細(xì)胞過(guò)度氧化，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷，表面抗原暴露[19]，進(jìn)而誘導(dǎo)自身免疫反應(yīng)；而且腎臟局部RAS激活，系膜細(xì)胞合成AngⅡ增多，AngⅡ酶活性降低，局部AngⅡ水平升高[20]，均是DN狀態(tài)下AT1-AA產(chǎn)生的主要機(jī)制。研究表明，AngⅡ可通過(guò)活化AT1R，激活炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激等多條信號(hào)通路，介導(dǎo)DN腎臟結(jié)構(gòu)和功能損傷[21]，且AngⅡ拮抗劑能抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的腎臟細(xì)胞凋亡[22]。據(jù)此推測(cè)，具有AngⅡ樣效應(yīng)的AT1-AA也可能與DN時(shí)腎臟結(jié)構(gòu)和功能改變及腎臟細(xì)胞凋亡有關(guān)，但對(duì)此研究，目前未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。

本研究中，DN組大鼠的BUN和24h UMA水平較NC組增加，Ccr降低，提示在該研究條件下，DN組大鼠腎臟功能明顯減退。對(duì)比血清AT1-AA結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DN組大鼠AT1-AA水平及陽(yáng)性率均高于NC組，且AT1-AA陽(yáng)性DN大鼠前述各項(xiàng)指標(biāo)異常變化較AT1-AA陰性大鼠更明顯；進(jìn)一步相關(guān)分析顯示，DN組大鼠血清AT1-AA與BUN、24h UMA水平均呈顯著正相關(guān)，從而在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)證實(shí)AT1-AA與DN腎臟功能損害有關(guān)，且與作者前期的臨床觀察結(jié)果[23]一致。

為明確AT1-AA對(duì)腎臟結(jié)構(gòu)改變和腎臟細(xì)胞凋亡的影響，本文分別觀察了NC組和DN組AT1-AA陽(yáng)性和陰性大鼠腎組織形態(tài)改變，超微結(jié)構(gòu)變化及腎臟細(xì)胞凋亡的情況。光鏡及透射電鏡結(jié)果均顯示，DN組AT1-AA陽(yáng)性大鼠腎小管上皮細(xì)胞水腫、壞死，胞質(zhì)溶解，腎小球基膜增厚，足突融合程度等均較AT1-AA陰性大鼠嚴(yán)重；NC組AT1-AA陽(yáng)性大鼠偶見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞變性，而AT1-AA陰性大鼠的腎臟結(jié)構(gòu)未見(jiàn)異常改變。細(xì)胞凋亡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，DN組大鼠腎臟細(xì)胞總凋亡率顯著高于NC組，且DN組AT1-AA陽(yáng)性大鼠凋亡率明顯大于AT1-AA陰性大鼠；相關(guān)分析結(jié)果也表明，AT1-AA與腎臟細(xì)胞凋亡顯著正相關(guān)。上述結(jié)果均提示AT1-AA與DN大鼠腎臟細(xì)胞結(jié)構(gòu)損害和凋亡關(guān)系密切。

已知正常人血清中常存在低效價(jià)的生理性自身抗體，主要起著清除自身衰老變性成分，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的作用。但當(dāng)機(jī)體AT1-AA生成增多，自身免疫反應(yīng)激活，則可對(duì)腎臟產(chǎn)生病理性免疫損傷效應(yīng)。本文NC組中AT1-AA陽(yáng)性大鼠腎臟結(jié)構(gòu)即出現(xiàn)了輕微損傷。DN狀態(tài)下，隨著血清AT1-AA水平升高，AT1-AA介導(dǎo)的自身免疫反應(yīng)會(huì)持續(xù)存在，胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相繼激活，靶器官的損傷也會(huì)進(jìn)行性加重，本文TUNEL檢測(cè)結(jié)果即顯示，DN組AT1-AA陽(yáng)性大鼠腎臟細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯高于AT1-AA陰性大鼠。因此認(rèn)為，血清AT1-AA可能與DN大鼠腎臟結(jié)構(gòu)改變和腎臟細(xì)胞凋亡有關(guān)，但其致細(xì)胞凋亡的具體機(jī)制需進(jìn)一步研究闡明。

綜上所述，血清AT1-AA在DN大鼠腎臟功能損害中起重要作用，并與DN時(shí)腎小管上皮細(xì)胞和腎小球足細(xì)胞凋亡關(guān)系密切，可為臨床中通過(guò)AT1-AA檢測(cè)對(duì)糖尿病患者進(jìn)行DN早期診斷和早期治療提供理論依據(jù)。此外，由于血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑可以通過(guò)減弱自身免疫反應(yīng)來(lái)降低血清AT1-AA水平[24]，因此可針對(duì)AT1-AA陽(yáng)性DN患者進(jìn)行個(gè)體化治療，如給予AT1R拮抗劑或血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑，阻斷AT1-AA的效應(yīng)或降低AT1-AA水平來(lái)減輕腎臟損害，減少細(xì)胞凋亡，保護(hù)腎臟功能，起到預(yù)防和治療DN的作用。

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本文第一作者簡(jiǎn)介：

徐春艷(1991-)，女，漢族，碩士研究生，研究方向?yàn)樘悄虿〖拔⒀懿l(fā)癥

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Relationship between Angiotensin ⅡType 1 Receptor Autoantibody and Kidney Damage and Renal Cells Apoptosis in Diabetic Nephropathy Rats

XU Chun-yan1，ZHAO Lin-shuang1,2,#

1Wuhan Clinical Medical School, South Medical University,Guangzhou 510515,China;2Department of Endocrinology, Wuhan General Hospital of Guangzhou Command, Wuhan 430070, China;#

Objective: To explore the relationship between angiotensin Ⅱtype 1 receptor autoantibody (AT1-AA) and kidney tissue pathologic changes, and apoptosis of renal tubular epithelial cells and podocytesin diabetic nephropathy (DN) rats.Method: 36 SD rats were randomly divided into normal control group (NC,n=6) and DN model group (DN,n=30). DN model rats were induced by high-sucrose and high-fat diet and intraperitoneal injection of a small dose of streptozotocin (STZ, 35mg/kg). ELISA method was used to test the levels of serum AT1-AA, and respectively divided into AT1-AA positive and negative subgroups according to the ELISA results. The blood glucose (BG), renal function indicators and kidney hypertrophy index (KW/BW) were detected and calculated. HE staining and transmission electron microscope were applied to detect renal tubular and glomerulus pathological changes in all group rats. The apoptosis of renal tubular epithelial cells and podocytes were detected by TUNEL staining. Results: The level and positive rate of AT1-AA in DN group were significantly higher than that in NC group (P<0.01andP<0.05). When compared with NC group, the level of BG, rest of renal function indicators and the ratio of KW/BW in AT1-AA positive DN group were significantly increased, with the creatinine clearance rate (Ccr) decreased (allP<0.01). The levels of all the indicators above except BG in AT1-AA negative DN group were significantly reduced (P<0.05orP<0.01) compared with AT1-AA positive DN group.Comparing with NC group, the kidney and ultrastructure had pathological changes in AT1-AA positive DN group, the apoptosis rate of renal tubular epithelial cells and glomerular podocytes also increased significantly (P<0.01). While no obvious pathological changes were observed in the kidney of AT1-AA negative DN rats,and the cell apoptosis rate of AT1-AA negative DN group were obviously lower than that of AT1-AA positive DN group.Conclusion: These findings indicate that the AT1-AA levels may be related to the apoptosis of renal tubular epithelial cells and glomerular podocytes, and involved in the process of kidney damage.

Angiotensin Ⅱtype 1 receptor;Autoantibody;Cell apoptosis;Diabetic nephropathy

湖北省自然科學(xué)基金(2011CHC001)

1南方醫(yī)科大學(xué)附屬武漢臨床學(xué)院，廣州 510515；2廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院內(nèi)分泌科，武漢 430070；#

，E-mail:zls7111@aliyun.com

本文2014-10-20收到，2014-12-22修回

R587.2

A

1005-1740(2015)01-0004-06